免疫学技术

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相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 酶联免疫斑点法ELISPOT最早可追溯到1963年的溶血空斑技术，到了20年后的1983年，该方法才被证实敏感度高且操作方便。之后才开始在检测上大显身手。那么，酶联免疫斑点法与其他传统技术相比，优势何在呢? ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lyti ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 一、提取外周血淋巴细胞时注意事项 如果取外周血淋巴细胞 (PBMC) 进行ELISPOT检测，最好采用新鲜血液。在保证无菌操作的前提下，首先应保证取血时抗凝剂应及时充分的与血液混匀，避免血凝块的出现。抗凝血最好及时提取PBMC，避免放置时间过长，室温下避免过夜。应选用分离效果好的淋巴细胞分离液，避免 ...

相关专题 一、 ELISPOT技术概述 1、技术原理和技术特点 ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理，一句话概括就是：用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） CTL 提供唯一由实验室开发并精制的 ELISPOT 系统。 目前已经发展到第三代，称为Seriese 3系列。 根据客户的不同分析需要以及预算， CTL 设计了两种类型的分析仪，包括 Analyzer 和 ImmunoScan 两种产品。两者成像方式有所区别，分析软件均一样。为了提高 ELISPO ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和ELISA 法（下图）分别测量产生IFN- ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech Millipore Nunc BD Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明（白色），PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型elispot板都能良好的进行ELISPOT试验。不推荐使用PVDF膜ELISPOT板。 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 为了实现ELISPOT的标准化，显色最好在恒温箱内进行，温度控制在25°C±5°C，显色25分钟为宜。另外，在37°C显色也是不错的一个方法，但要注意相应的缩短显色时间到12-18分钟，并且显色中勤检查。为了提高ELISPOT检测结果的可重复性，增加实验的可信度，必须建立一套标准化的实验操作规范。标 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT基本操作过程： 一、包被96孔板： 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。 （如果暂时不 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 一、ELISPOT 技术简介 随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 一、简介ELISPOT技术 ELISPOT全名为Enzyme-linked Immunospot Assay，其技术原理与ELISA相似。其实验设计是在96微孔培养盘底部披覆PVDF薄膜，用来吸附特殊挑选、且无毒性(不含sodium azide、内毒素endotoxin)的单株抗体。静脉血PBM ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 试剂盒内容：PVDF96孔板，室温保存;0.1ml捕获抗体，4℃保存;0.1ml生物素标记检测抗体，4℃保存;15ul亲和素碱性磷酸酶标，4℃保存;0.25g牛血清白蛋白，4℃保存;0.25g脱脂乳，4℃保存;11ml底物缓冲液，4℃保存;11ml浓缩PBS(10X)，室温保存;11ml浓缩洗涤液( ...

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相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 廖爱华　VERA Rebmann ①　HANS Grosse2Wilde ①　(华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉430030) 　目的:建立一种新的检测人类HLA2 Ⅰ类抗体方法———酶联免疫斑点法( ELISpot) 。方法:以鼠B 细胞系HB95 为模型建立一系列特异性ELISpot 检 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT 时候在培养皿底部有条纹和不规则的斑点出现。这是什么原因导致的? 在分析过程中，T细胞的移动活跃。特别的，在活体或者培养皿中，预先激活的T 细胞的迁移很快，常常留下细胞因子的痕迹。同时，如果板被震动(例如孵箱门的开关的撞击)或者在捕获中被移动了，则细胞会卷起，留下条纹或者不规则形状的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT 技术操作中应注意的问题: (1) 关于固相支持物(微量板) 的选择 目前有 96 孔聚乙烯板和硝酸纤维素膜微量板(NC) 两种 均为通过非共价键吸附抗原或抗体。在实验中 用NC做支持物时 背景颜色较深 不利于 对比 但用聚乙烯做支持物时 偶有斑点大小不 均或融合现象 这时使用琼脂糖固 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 目前有什么类型的ELISPOT板?对使用各种类型的板有什么建议? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型elispot ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、目前有什么类型的ELISPOT板? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 2、达科为公司对使用各种类型的板有什么建议? 国外主要生产商所生产的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF)，这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 透明板在操作的时候比PVDF板稍微容易点，PVDF板在使用时要进行预处理板，操作时还要小心不要把那层膜捅破了。 透明板就是显示的斑点都是黑色的，不能进行几种因子的同时测定，而PVDF板就可以用斑点颜色的变化一次来测定几种细胞因子。 总结：都有优缺点，个人认为，测一种细胞因子的话还是透明板比较好。 ...