免疫学技术

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 SP(streptavidin-perosidase)法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。 按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。 众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKO EPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。 1.、材料和方法 (1)材料 均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶 ...

相关专题 SABC法：ABC代表的是亲和素-生物素-过氧化物酶复合物。利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗和生物素标记的酶。SABC(链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物)就是StreptAvidin Biotin Complex的英文缩写。这一方法集中体现了目前最先进的免疫组化所必必具备的高敏感性、特异性及操作快速、简便的所有特征。 基本 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 多克隆抗体的概念：由多个B淋巴细胞克隆所产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体。多克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：免疫动物、佐剂、免疫原、免疫、取血等。 多克隆抗体的制备步骤 一、器材 剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把，手术刀架，手术刀 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 (一)酶标抗体的条件 1.纯度高、含杂蛋白少用IgG优于血清抗体，用Fab优于IgG。 2.特异性强 即抗IgG与IgG在免疫电泳上只有一条沉淀线与IgG的全血清也只有一条沉淀线这才算是特异性的单价抗体。 3.效价高 一般琼脂扩散鉴定为1︰64以上才算合格。 (二)酶标记方法 1.交联法 交联法通常用的交联剂是戊二 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 (一)抗原制备 Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗Ig血清，经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备抗Ig抗体。 (二)材料与试剂 1.提取的动物Ig 2.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂 3.青霉素和链霉素 4.实验动物 兔 5.其它 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 (一)免疫球蛋白的提取 (二) 荧光素 1. 荧光色素的基本条件(1)具有化学活性基团，如异硫氰基(-NCS)等，易与免疫球蛋白结合形成共价键。(2)对免疫球蛋白无毒性，不影响抗体活性。(3)荧光效应高，与蛋白结合需要量少。(4)荧光素性能稳定，结合物性能稳定，容易贮藏。(5)结合物的颜色必须与背景组织有良好的反衬 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 125I标记单克隆抗体技术 同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。 (一)　原理 氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 单克隆抗体(McAb)与各种标记技术相结合成为研究细胞分化抗原、活化抗原和各种受体的重要手段。常用方法有免疫荧光技术、流式细胞仪(FCM)、犆8免疫组化技术以及免疫沉淀、SDS-PAGE分析等。125I标记单克隆抗体进行竞争结合试验，可以计算出每个细胞表面平均抗原数量以及抗原抗体结合的亲和力，是分子免疫学中一种重要 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 【原理】 ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(如辣根过氧化物酶 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术生物帮之抗体制备 一、实验目的 1.深入了解ELISA 法测定抗体效价的原理。 2.掌握ELISA 法测定单克隆抗体效价的方法。 二、实验原理 ELISA 是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 【原理】 大分子颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)与其相应的抗体相结合，在适量的电解质存在及一定的温度下，经过一定的时间可出现肉眼可见的凝集团块，是为凝集反应。 试管凝集实验的应用，一般均以标准抗原(已知抗原)测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。 【材料】 1:10抗羊红细胞免疫血清(配制前需经56℃30分钟灭活) 1 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 取绵羊细胞免疫的小鼠脾脏，制成脾细胞悬液，与一定量的指示细胞(绵羊细胞)和补体结合，注入自制的小室内，经37℃孵育后，单个散在的抗体形成释放抗体，抗体与周围的绵羊红细胞(抗原)结合，并在补体参与下，使绵羊细胞溶解，结果在抗体形成细胞周围形成肉眼可见的圆形透明溶血区——溶血空斑。计算溶血空斑数目，则可推算脾内存在的抗 ...

相关专题 生物帮之抗体制备 在临床活检工作中，对于各种肿瘤的正确判断，历来是外科病理学的核心问题。因它关系到患者的治疗和预后的问题。在免疫组化技术没开展以前，主要靠HE，特殊染色和组织化学来进行鉴别和诊断各种肿瘤，这些在当时虽然解决了不少的问题，但是对于较为复杂，较为多型性的肿瘤，就不能对其起源及所含的成分作出正确的判断。随着免疫组化工作的开 ...

相关专题 白介素2(IL-2)分子量为1.5万的糖蛋白，对T细胞激活及生长有作用。IL-2主要由CD4+和CD8+T细胞产生，IL-2主要以自分泌或旁分泌方式发挥效应。不同种属间，IL-2沿种系谱向上有约束性，向下无约束性。IL-2是参与免疫应答的重要细胞因子，并参与抗肿瘤效应和移植排斥反应。 IL-2对T细胞的作用 IL-2是T细胞生长因 ...