免疫学技术

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“ 杂音”染色片（ ...

1、 一抗从4度拿出后，为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后，直接用PBS洗没发生过脱片现象 ...

1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会：（1）选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于 ...

一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同。2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （1：1）。5、条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久。6、荧光抗体 ...

实验动物免疫方案1、抗原: 蛋白质、多肽、细胞器、细胞、组织等。2、免疫方式：皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射等。3、不同动物免疫所需抗原量（以蛋白免疫为例）18-20kDa 动物 抗原量 最佳抗原量 抗原量 最佳抗原量兔子 20-200 100 50-400 200小鼠

ELISPOT1. PBS溶解抗原为30 μg/ml，加100 μl/孔于PVDF膜铺底的96孔灭菌板过夜；2. 第二天吸去包被液后，加5％FCS的PRMI 1640培养基100 μl封闭1小时，37 oC；3. 准备脾细胞悬液（用氯化铵去除红细胞，制备成单个脾淋巴细胞悬液）；4. 从1 × 106/孔开始，按1:3的稀释度开始逐孔稀释做不同浓度梯度，并做3 ...

藻酸盐包裹实验1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为1.5%；2. 收集培养的肿瘤细胞，用无血清的培养基洗涤1次，将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中；3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用1 ml加样枪缓慢滴入磁力搅拌的250 mM CaCl2溶液中，形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于250 mM CaCl2中30 min即可使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行；4. ...

A. Plating:To sterilize glass coverslips dip in ethanol and flame. We use 22x22x1 mm3 coverslips and put them in 6-well plates.Seed 100000 cells per well overnight and fix the next day.B. Fixatio ...

Methanol fixation works by precipitating proteins and as such it is a quick method (2-5)minutes is enough time for most antibodies/proteins). Diffuse proteins may be losthowever in which case PFA fixa ...

石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理： 抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine 等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50 比例丙酮稀释的AP ...

一 、石蜡切片方法步骤： 在每次操作切片刀和标本，或更换标本前一定要锁定手轮，并用护刀罩将刀 刃遮住！ 锁定手轮， 应先夹紧标本再装切片刀！ 将预先休整好的石蜡块装在标本夹上， 在使用切片刀和一次性切片刀时，一定要十分小心，其刀刃锋利无比，误操作后会导致严重伤害！ 转动粗转轮，将标本退到后面的极限位置。 将护刀罩移向刀架中间。 将切片刀插入刀架，夹紧。 调节切削角度。 将基体 ...

包埋剂embeddingagent　　在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片，用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂；电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。 石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋 ...

石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或 ...

Introduction Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISPOT) assays were originally developed to enumerate B cells secreting antigen-specific antibodies but subsequently the assay has been adapted for iden ...

免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x的抗体免疫沉淀x，那么与x在体内结合的蛋白质y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体 ...

1| Transfer heparinized venous blood of patient to plastic50-ml tubes and dilute with an equal volume of PH buffer.When sodium citrate has been used as anticoagulant add an equal volume of PT buffer. ...

中国生物工程杂志　ChinaBiotechnology，2008，28（10）：141～152抗体生产纯化技术孙文改 　苗景 （通用电气医疗集团Life Sciences　北京　100176）摘要　自1997年FDA批准第一个治疗淋巴癌的嵌合单抗药物Rituxan，Anti?CD?20抗体上市，并进入56个国家，至2007年，FDA已批准了20多种治疗性单抗药物，约一半用于治疗癌症，7个已成为年销 ...

一 原理：IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。实验最需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在 ...

1．半抗原与载体连接时，应选择合适的方法，结合方式的选择应考虑如下因素：　　1）半抗原的溶解度和稳定性：在结合反应中应不导致半抗原活性的改变，同时也不能使载体变性至不溶解的程度。　　2）结合键的位置：抗体对远离蛋白质联接点的半抗原部分有最好的特异性，故联接时应使联接键远离半抗原的决定簇。3）选择适合的偶联试剂：不同的半抗原在偶联时，应根据半抗原的化学结构，以及反应方式选择适当的偶联试剂。如小分子肽 ...

做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM，37度30分钟。2、拿出后，1000rpm，5min，可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次3、与效应细胞混培，作用 ...