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技术丨化学发光免疫分析中羧基与Tosyl磁珠包被抗体方法及注意事项

化学发光免疫分析与磁珠化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,通过抗原抗体的免疫反应检测各项标志物的免疫分析技术。该技术广泛用于传染病,心脏疾病,肿瘤,妊娠检测等领域。是现阶段体外诊断领域最主流的技术和趋势。磁性微粒(磁珠)是化学发光免疫分析中的一种重要原料。常用磁珠主要是粒径1-3um,修饰了羧基、甲苯磺酰 ...

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噬菌体:首尾相接,总长可达两亿光年

首先要了解什么是噬菌体噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或者螺旋体等微生物病毒的总称,在电子显微镜下有三种形态:蝌蚪形、丝形、微球形,因部分能引起宿主菌的裂解,故称为噬菌体。跟别的病毒一样,噬菌体只是一团由蛋白质外壳包裹的遗传物质,大部分噬菌体还长有“尾巴”,用来将遗传物质注入宿主体内。更狠的是,噬菌体颗粒感染一个细菌细胞后可迅速生成几百个子代噬菌体颗粒,每个子代颗粒又可感染细菌细胞,再生成几百个子代噬菌体颗粒。当把细 ...

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CAR-T细胞的特异性杀伤及耗竭表征

过去几年中,成功使用免疫疗法帮助抗击癌症的范围迅速扩大,许多疗法现已获批用于临床。其中嵌合抗原受体(CAR)T细胞的引入在该领域处于领头地位。CAR构建体旨在与肿瘤细胞上存在的特异性表面表位或抗原相互作用,一旦接近就能使T细胞杀死肿瘤细胞,同时不伤害健康细胞。当肿瘤细胞上的特定抗原可被识别时,CAR-T细胞就会显示出靶向作用,并且由于其来自于患者自身(称为自体疗法),因此没有排斥反应。CD19靶向CAR-T细胞疗法 ...

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DimAb®重组单克隆抗体开发平台

DimAb®重组单克隆抗体开发平台缔码生物拥有独创的DimAb®重组单克隆抗体开发平台,可以在完成动物免疫后直接从外周血中获取阳性B细胞并克隆抗体基因序列。从单只免疫动物中我们可以得到上千个靶点结合阳性B细胞克隆,从中我们能够更为高效的筛选出具有高特异性,高灵敏度,和高亲和力重组单克隆抗体。1. DimAb®平台流程2.DimAb®平台优势3. DimAb®与其它抗体开发平台比较 B细胞抗体开发平台可成药性更高一个新开发的 ...

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更快速、更智能的CAR-T细胞表型及功能分析

CAR-T基于嵌合抗原受体T细胞免疫疗法,是一种基因修饰的细胞疗法,是指利用工程T细胞来对抗癌症,正如基因治疗或再生医学一样,是一项可永久改变医学格局的变革性技术。基于CAR-T细胞的疗法使用来自患者自身或异体供体的免疫细胞,经过基因转化,然后输入患者体内,与癌细胞结合并将其破坏。CAR-T 疗法的工作原理CAR-T疗法的发现和开发过程分为多个步骤,包括:- 分离循环T细胞- 在特定肿瘤细胞模型中进行早期体外实验,了解免疫细胞 ...

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技术干货|基于微球的免疫层析技术指南

免疫层析技术免疫层析技术是出现于20世纪80年代初期,其本质是免疫反应在层析上的体现,是一种将免疫标记技术和层析技术结合的新型检测技术。微球是免疫层析标记中必不可少的原材料之一,研发人员会根据项目需求和微球理化特性来选择更合适的微球产品。免疫层析技术的原理看似简单,但是研发人员在使用微球进行免疫层析实验过程中常会遇到各种困难。为度作为专注微球开发与创新的公司,我们汇总了一些免疫层析实验中常会遇到的问题,并 ...

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用全血直接分选 CD3+ T 细胞

免疫亲和层析是以 Fab 片段为基础的无痕亲和细胞分选技术(traceless affinity cell selection, Fab-TACS)。Fab-TACS 运用免疫亲和层析的原理,使用细胞表面抗原分子 CD marker 中的 Fab 片段来进行捕捉及释放目的细胞。以抗体的 Fab 片段取代一般具有高亲和力的完整抗体,实现试剂与细胞的可逆结合,直接从全血或其他血液样本中分选目的细胞。Fab-TACS 柱子填充了包被有 Strep-Tactin® 多聚体的细胞级琼脂糖 ...

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用 CD3/CD28 做好 T 细胞激活与扩增

机体免疫应答过程的复杂性和严格的调控性,是由多种免疫细胞和免疫分子共同参与完成的。而T淋巴细胞的活化,在免疫应答中扮演着相当重要的角色。研究表明,诱导T细胞的活化与增殖需要两种信号:一种是 TCR/CD3 与抗原提呈细胞(APCs)表面特异的 MHCⅡ 抗原肽复合物结合产生的特异性抗原刺激信号;另一种是非特异性协同刺激信号,由 APCs 表面的协同刺激分子和 T 细胞的相应受体相互作用后产生,其中 CD28/B7 是最为重要的协同刺激分子,能增加 IL-2 的 ...

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免疫组化实验染色效果差?原来你一直忽略的是它!

免疫组化技术是病理科主要的辅助诊断技术之一,质量控制要求严格,目前病理技术人员关注的焦点一般在操作流程及抗体质量上,而一直忽视实验用水的质量问题。免疫组化实验流程较多,常涉及烤片,脱蜡,水化,抗原修复,抗体孵育,显色,复染,脱水及封片。实验用水常为蒸馏水或纯水,其中蒸馏水是将水蒸馏后去除电解质及与水沸点相差较大的非电解质,如屈臣氏饮用水; 而纯水则利用反渗透法去掉了水中的全部非水物质(全部电解质与非电解质) ,是一种偏酸( ...

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历史性革新,超高浓缩胶体金横空出世,最高可节省80%活材用量

研发小白的时候,第一次见到胶体金,便被惊到了,怎么不是金光闪闪的?老前辈一脸淡定而沧桑地介绍,胶体金的颜色是酒红色的,颜色透亮。一无所知的我只能内心咆哮,面上漏出尴尬而不失礼貌的微笑:哦,这样啊。然而,肉眼所见的胶体金是这样的:当然还有这样的:有谁懂我的灵魂?酒红色??我色盲???直到很久以后,小编遇到了现在的团队,看到了这样的胶体金,才明白当年老前辈因何沧桑。果然这才是正确的颜值!然而做了多年的侧向层析,才发现,侧向层析 ...

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CANDOR BIOSCIENCE: 关于ELISA板稳定性的技术探讨与比较

诊断试剂盒中试剂等组分的稳定性对于商业化的检测至关重要。现今稳定剂不仅可以延长保质期,而且可以提高检测试剂盒的可靠性。以SARS-CoV-2抗原为例,我们将解释商业化稳定剂如何在优化工作流程的同时提高分析质量。如果在开发过程中没有充分考虑组分的稳定性,即使是技术上最先进、设计最完善的诊断检测,通常也无法实现商业化。根据将于2022年5月生效的欧盟体外诊断法规(IVDR),诊断试剂盒的分析性能在其保质期内不得改变 ...

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免疫分析中,遭遇HAMA等干扰问题如何破?

免疫分析中出现问题的一个常见原因是干扰性抗体,如众所周知的人抗鼠抗体(Human anti-mouse Antibodies,HAMA)、一般的抗动物抗体、嗜异性抗体(Id)或类风湿因子(rheumatoid factors,RF)。有趣的是,由于今天的治疗性单克隆抗体药物几乎完全是人源化的,所以真正的HAMA的流行率正在稳步下降。然而,随着近年来类风湿和过敏性疾病等发病率的上升,抗体引起的干扰在未来仍将具有高度的临床相关性, ...

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聊一聊血清学研究中的表面封闭剂

Serologic assays are a very important method of detecting antibodies in the bodily fluids of patients and have a broad applicability in confirming a patient’s immunological response to an infection or a vaccination. When new pathogens like SARS-CoV-2 emerge and spread epidemically arou ...

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免疫荧光单标检测

免疫荧光实验步骤脱蜡至水二甲苯Ⅰ(8min)二甲苯Ⅱ(8min)无水乙醇和二甲苯1:1(5min)无水乙醇(3min)95%乙醇(3min)85%乙醇(3min)75%乙醇(3min)PBS洗3遍二.抗原修复柠檬酸钠抗原修复液修复。抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。三.PBST洗2遍,PBS洗1遍。每次5min。四.用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性 ...

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免疫荧光实验如何选择和使用荧光直标一抗,你需要注意这四点!

一、选择荧光标记要匹配荧光直标抗体的一个主要优势在于它为多重检测提供了机会,比如现在一些先进的流式细胞仪能检测每个细胞中 20 多个离散参数。在设计多重实验时,应考虑每种荧光基团的独特性质,如最大吸收波长和最大发射波长,消光系数和斯托克斯位移等因素。对于免疫荧光分析方法,人们要同时检测组织或细胞样本中的多个抗原,常常会利用直标一抗进行免疫荧光共染色,这时一般尽量选择光谱重叠比较少的荧光基团进行组合。比如,我们会选择一个 ...

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免疫细胞化学(ICC)和免疫荧光(IF)实验方案

免疫细胞化学/免疫荧光(ICC/IF)是一种使用荧光抗体或染料来检测细胞内靶抗原的技术。本实验方案详述了使用 Cytospin™ 离心对悬浮细胞进行 ICC/IF 的流程。点击下载此实验方案一般流程1. 用聚乙.烯亚胺或多聚赖氨酸涂覆盖玻片,在室温下放置 1 小时。2. 用无菌水充分漂洗盖玻片 3 次,每次 1 小时。3. 充分干燥盖玻片,在紫外光下灭菌至少 4 小时。4. 使细胞在玻璃盖玻片上生长,或制备 Cytospin 或涂片制备物。5. 用磷酸盐缓冲液 (PBS) 简单漂洗。推荐使用 1 × PBS 0.1% Twe ...

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MHC Tetramer 技术:检测抗原特异性 T 细胞的金标准

MHC 四聚体(MHC Tetramer)是一类免疫学试剂,由四个主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)与抗原肽结合的单体分子组成,并标记有荧光,用于 T 细胞免疫分析的 MHC 四聚体检测(MHC Tetramer Assay,或称 MHC Tetramer Stain)。检测原理&应用领域MHC 四聚体检测技术于 1996 年由美国斯坦福大学医学院的 John D. Altman 博士所开发, 它在单细胞水平上标记目标 T 细胞,并通过流式细 ...

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抗体和重组蛋白使用保存方法

无论是保存还是运输,请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果,如果保存得当,Cambridge Bio的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后(大部分抗体和重组蛋白是溶液态) ...

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MHC 四聚体助力细胞治疗基础研究:CTL 表位筛选

据统计,2015 年,我国癌症新发人数为 429.2 万。死亡人数 281.4 万,平均 5 年生存率 36.9%。肺癌、胃癌、肝癌、食管癌占到总数的 57%。细胞治疗,治疗病人的个体化差异较大。细胞治疗大有向精准发展趋势。从临床角度,目前所开展的细胞治疗大多以 T 细胞为基础。血液肿瘤治疗,利用肿瘤特异性抗原(TAA)作为治疗靶点,使得 CAR-T 细胞治疗方法已得到有效验证,取得划时代性的突破。然而,利用 CAR-T 细胞治疗实体瘤的临床效果未能得到充分验证。因此,寻找有效治疗靶点 ...

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白介素6(IL6)在牛生物样本中的精确检测实验

牛白介素6(IL6)酶联免疫吸附检测试剂盒预期应用本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定牛血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中IL6含量。试剂盒内容需自备的设备及试剂1.450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2.单道或多道微量加液器及吸头3.稀释样品的EP管4.蒸馏水或去离子水5.吸水纸6.盛放洗液的容器标本的采集与保存1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 ...

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