细胞技术

体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2） 1　大鼠肝细胞的分离和培养 大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次 ...

在人体发育过程中，γδΤ细胞先于αβΤ细胞出现，γδΤ细胞 主要分布于皮肤，小肠、食道、肺和生殖器官等上皮组织内，而在外周血中淋巴细胞仅占0.5%-5%。外周血中γδΤ细胞主要为Vγ9Vδ2、δ1Τ细胞，它在抗感染、抗肿瘤和免疫监 ...

1. 分离制备单细胞悬液： （1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。 （2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。 2. 胶板制备： （1） 取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。 （2） 水平取 ...

消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞 用DMEM配0.2%的1型胶原酶（用20的血清的DMEM配可能更好，有类似文献），分装于青霉素小并，每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1瓶消化液中消化，消化约10几个小时（消化程度的把握要体会），离心后，接种（若见细胞量大，成功把握大），绝对静置3天（没必要看，看多了无益），8天可传代。 犬胸主动脉平滑肌贴块法——方法成熟，比消化法好控 ...

细胞培养经验之谈

器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤 一. 水的制备 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水 二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制) 1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4•H2O 1.56g ...

本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。

细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗 ...

摘要：预防和避免污染是细胞培养成功的关键，黑胶虫（也称黑焦虫）是近几年来几乎出现在每个细胞培养实验室。但是现在无法对黑胶虫的确认和鉴别，导致学术界说法不一，笔者收集了关于黑胶虫的资料，对黑胶虫进行类系统描述，对黑胶虫出现的情况对细胞培养的影响以及黑胶虫污染后的有效处理进行介绍。 (Grade 2005 Biotechnology School of Life Science and Enginee ...

我所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。 Open flames ...

正在定购MG63 ，即人成骨头瘤细胞，但是以前没买过，都是从别人那直接扩培的，所以对于刚拿到细胞株要做的不清楚，恳请有经验的战友提供帮助。 打算买三瓶，新购进时应该会配培养基，那我是否需要提前配培养基（按厂家提供的培养基配方，是一拿到手直接冻到液氮里吗？还是先培养几天再冻？查文献发现很多种培养基都可以用，可否用实验室已有培养基培养，大约需要多久后才能用实验室的培养基培养。 对于新买的细胞，必然是有 ...

ECM(extracellular matrix)是细胞外大分子构成的网络。 包括：胶原、非胶原糖蛋白、氨基聚糖与蛋白聚糖、弹性蛋白等。 ECM在结缔组织中含量较高。 ECM的成分及组装形式由所产生的细胞决定，并与组织的功能相适应。如：角膜、肌腱。 ECM影响细胞的存活、死亡、增殖和分化。 第一节ECM的成分 一、胶原Collagen 组成： 由原胶原交联而成，原胶原是三条肽链形成的三股螺旋，含有 ...

成分：微丝（microfilament）、微管（microtubule）和中间纤维（intemediate filament）构成。均由单体蛋白以较弱的非共价键结合在一起，构成纤维型多聚体。 微丝确定细胞表面特征，使细胞能够运动和收缩。 微管确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导轨。 中间纤维使细胞具有张力和抗剪切力。 其它骨架成分：核骨架、核纤层、细胞外基质。 第一节微丝microfilamen ...

第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。然后高压蒸汽灭菌，烤箱中烤干。 第二，爬片前最好用多聚赖氨酸或者层粘蛋白或者胶原溶液处理玻片，未处理过的细胞不容易贴壁， ...

1.细胞爬片； 2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)； 3.PBS漂洗5min； 4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)； 5.PBS漂洗2次，每次5min； 6.1%BSA封闭30min； 7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h； 8.PBS漂洗2次，每次5min； 9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h； 10 ...

第一节基本概念 生命与非生命物质最显著的区别在于生命是一个完整的自然的信息处理系统。一方面生物信息系统的存在使有机体得以适应其内外部环境的变化，维持个体的生存；另一方面核酸和蛋白质信息在不同世代间传递维持了种族的延续。生命现象是信息在同一或不同时空传递的现象，生命的进化实质上就是信息系统的进化。 一、几个容易混淆的概念 细胞信号发放（cell signaling）：细胞释放信号分子，将信息传递给其 ...

1.做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了)，注意: 洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用)， 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后，都会有自发荧光。 2.抗体的孵育: 预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度，一抗4度孵育过夜（时间8－12h）；二抗（荧光抗体）孵育时要避光，孵育好后用PBS充分冲洗；可以将做好的片子直接在板子中孵育，如果从节约的角度来看，可以用1 ...

定义：结构、功能和发生上相关的内膜形成的细胞结构称为细胞内膜系统，如核被膜、内质网、高尔基体等。 功能：区隔化；增加内表面积，提高代谢和调节能力。 从系统发生来看内膜系统起源于质膜的内陷和内共生。 从个体发生来看新细胞的内膜系统来源于原有内膜系统的分裂，具有核外遗传（epigenetic）的特性。 第一节蛋白质分选的基本原理 细胞内合成的蛋白质、脂类等物质之所以能够定向的转运到特定的细胞器取决于两 ...

养细胞就像养孩子，甚至比养孩子还难。忘记是谁这么说了。上次一次性死了14瓶细胞，前后分析都是培养基污染了。然后换了新培养基，换了新的种子，开始长得不错，但今天看了一下，又污染了，培养基变浑浊。我养的是HUVEC，8月4日从一个老师处取种子（8月3日复苏），他原先是用高糖DMEM培养的，而我用的是1640。在倒置显微镜下，细胞形态不是太好，而且有小黑点。我用1640换掉原先的DMEM培养基，5，6日 ...

据估计细胞膜上与物质转运有关的蛋白占核基因编码蛋白的15~30%，细胞用在物质转运方面的能量达细胞总消耗能量的2/3。 细胞膜上存在两类主要的转运蛋白，即：载体蛋白（carrier protein）和通道蛋白（channel protein）。 载体蛋白又称做载体（carrier）、通透酶（permease）和转运器（transporter），有的需要能量驱动，如：各类APT驱动的离子泵；有的则不 ...