细胞技术

微载体培养技术（micro-carrier culture technique）于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术日趋完善和成熟，广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认最具发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，且容易放大。该技术已广泛用于培养各类型细胞，如293细胞、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞。 一、 微载 ...

动物细胞培养技术在生物技术领域起着重要的作用。它在生物医药领域、细胞工程、酶工程等领域中都是不可缺少的工具。 培养基是人工配制的满足细胞生长和维持的营养基质。培养基的发展大致经过3个阶段：天然培养基阶段(直接采用某些组织凝块、生物性液体和组织提取液等作为细胞的培养基)，合成培养基阶段(如DMEM、RPMl 1640等)和无血清培养基阶段。合成培养基通常需在其中添加一些诸如血清(常用 ...

一、实验技术及原理 运用细胞培养技术、流式细胞术（体外扩增后ACSs的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化），差异离心术（可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除ASCs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态 ...

一、细胞复苏和接种 1. 37℃预热大鼠间充质干细胞培养液（RM-001）和基础培养液（RM-001B）。 2. 从液氮中取出细胞产品管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下最后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 3. 在生物安全柜中，用75%的酒精擦拭产品管外壁。 4. 将产品管中的细胞移至15 ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（RM-001B）4-5ml混匀 ...

随着细胞培养技术在大量生产疫苗和生化制剂领域的不断发展，对细胞基质的需求量越来越大， 迫切需要发展大规模培养细胞的技术。大规模的动物细胞培养开始于本世纪50年代，经过多年来的研究，人类对动物细胞培养技术进行了大量的研究开发，取得了很大的进展。通常用于疫苗和某些生物制剂生产的原代细胞核二倍体细胞属于贴壁生长细胞，因此贴壁生长细胞的大规模培养技术一直备受关注。 贴壁生长细胞的大规模培养 ...

1．掌握cAMP的产生及灭活机制；PKA的结构、活化机制及其作用；cAMP-PKA信号转导通路；cAMP对糖原代谢过程的调节。 2．熟悉cAMP作用的靶分子；cAMP对基因表达的调节；cGMP的产生与灭活；cGMP作用的靶分子；cGMP调节的生理功能。 一、cAMP的发现及第二信使学说 cAMP是第一个被发现的第二信使。 激素作用的第二信使学说： 胞外化学物质（第一信使）不能进入细 ...

1. 材料与方法 1.1 实验动物及试剂 出生7-9d大鼠幼仔、手术器械、DMEM培养基和胎牛血清FBS、0.125%胰蛋白酶、PBS等包被：Poly-L-Lysine多聚赖氨酸，储存液浓度为4mg/ml，超纯水稀释（1:300）。使用时浓度为13.3ug/ml。24孔板每孔加50ul室温孵育1h后吸去，超纯水清洗后吹干。 DMEM培养基10ml，添加剂：谷氨酰胺(146.15)2 ...

肝癌是全球六大常见癌症和三大致死性癌症之一。 肝癌的恶性转移主要由几个原因介导的，特别是IGF及其配体、受体、底物、和配体结合蛋白。 IGF信号通路通过与细胞表面上特异性受体结合的形式在调节细胞增殖、分化、凋亡等方面起着非常重要的生理作用。 IGF系统包括配体（IGF-1IGF-2和胰岛素），受体（IGF-2R胰岛素受体IRIGF01R/IR杂交受体HR）和6个高亲和 ...

2012年10月8日，瑞典诺贝尔奖评审团宣布，日本京都大学山中伸弥(Shinya Yamanaka)与英国发育生物学家约翰·戈登(John Gurdon)因在细胞核重新编程研究领域的杰出贡献，从而获得2012年诺贝尔生理学或医学奖。以下是2012诺贝尔医学奖得主山中伸弥实验室介绍，欢迎查看。

2012年10月8日，瑞典诺贝尔奖评审团宣布，日本京都大学山中伸弥(Shinya Yamanaka)与英国发育生物学家约翰·戈登(John Gurdon)因在细胞核重新编程研究领域的杰出贡献，从而获得2012年诺贝尔生理学或医学奖。以下是诺贝尔奖项揭晓现场视频，欢迎欣赏。

肾小球硬化的主要发病机制之一是细胞外基质(ECM)的异常沉积。转化生长因子p1(TGF-B1)在ECM沉积中起作用，并与MAPK信号通路有密切关系。醛糖还原酶(AR)是多元醇代谢通路中的限速酶，研究证实AR基因为大鼠肾小球肾炎及肾脏硬化过程中系膜细胞(MsC)的TGF-6l反应性基因之一。以蛋白质印迹检测正常MsC、AR转基因MsC、应用醛糖还原酶抑制剂索比尼尔(sorbinil)和哇泊司他(z ...

转化生长因子(TGF)一13／Smads信号传导通路是由TGF—B超家族、TGF—B受体，Smad蛋白家族及其核内转录调节因子组成的肿瘤抑制通路。通路中任一元件的异常都可以引起TGF．13／Smads信号传导紊乱，从而导致肿瘤的发生¨ 。研究表明，半数以上的胰腺癌都有TGF一13／Smads信号传导异常，其发生机制主要包括Smad基因家族突变(主要为Smad4)和 ...

Wnt /β-catenin信号转导通路是一条在生物进化中极为保守的通路。在正常的体细胞中，β-catenin只是作为一种细胞骨架蛋白在胞膜处与E-cadherin形成复合体对维持同型细胞的黏附、防止细胞的移动发挥作用。只有当细胞外Wnt信号分子与细胞膜上特异性受体Frizzled蛋白结合激活胞内的d ishevelled(散乱的)蛋白导致GSK3B失活，使α-ca ...

一、实验目的 1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。 2.了解溶血现象及其发生机制。 二、实验原理 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低 ...

摘要 Groundbreaking work demonstrated that ectopic expression of four transcription factors Oct4 Klf4 Sox2 and c-Myc could reprogram murine somatic cells to induced pluripotent stem cells (iPSCs ...

非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV rep ...

逆转录病毒载体属RNA病毒，但可在受染细胞内反转录产生DNA互补链，此DNA单链可作为模板合成第二条DNA链，第二条DNA链可掺入细胞基因组DNA中。此病毒可利用宿主细胞的酶自行转录与复制，RNA可合成蛋白，再包装病毒，RNA从胞内释放，成为感染性病毒，该载体可经不同方式改变。介导过程可使病毒单拷贝基因组稳定地进入细胞。 首先，逆转录病毒的繁殖必须要有适当的包装细胞系，以利于产生高 ...

红色荧光蛋白（red florescence protein，RFP）是细胞研究的常用蛋白标记，是细胞生物学示踪研究中的重要标记物，荧光显微镜下可被直接观察，因此被广泛用于肿瘤的生长、浸润及血管发生等追踪性研究［1-2］。质粒转染和病毒转染是将RFP 转染到细胞内的常用方法。慢病毒作为一种较新的病毒载体，具有转染能力强、毒性小、目的基因表达稳定等优点。 通过含有红色荧光蛋白基因的慢 ...

QuickShuttle系列转染试剂是由北京康碧泉生物科技有限公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点。QuickShuttle特别适合用于快速、高效转染各种常规哺乳动物细胞，尤其是用于各种病毒载体的大规模制备。 QuickShuttle区别于常规转染试剂的几大特点： 1. 某些细胞可在传代后未贴壁时立即转染（即立传立转）； 2. ...

细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo?荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病 ...