细胞技术

1. 宿主范围广 对人致病性低 腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数的肿瘤就是上皮细胞来源的。另外，腺病毒的复制基因和致病基因均已相当清楚，在人群中早已流行（70-80%成人体内都有腺病毒的中和抗体存在）。人类感染野生型腺病毒后仅产生轻微的自限性症 ...

1. 细胞内同源重组这种方法需要在两个DNA分子之间进行重组，第一个DNA分子(即所谓穿梭载体，shuttle vector)含有腺病毒左侧的反向末端重复序列（LITR）、腺病毒包装信号（ψ）等顺式作用元件以及目的基因表达盒和腺病毒基因组的左端一段序列；另一个DNA分子（即骨架载体，backbone vector）与第一个DNA分子的3′端略微重叠，然后继续向右，包含有大部分的 ...

腺病毒感染细胞的过程是从腺病毒纤毛的头节区粘附到细胞表面的特异性受体开始的。因为人腺病毒主要与柯萨奇B病毒共用一种受体，因此这种受体被称为柯萨奇/腺病毒受体即CAR（coxsackie/adenovirus receptor）。接下来病毒纤毛基底部五邻体表面的三肽RGD与细胞表面的αvβ3和αvβ5整合素结合，通过内吞作用将腺病毒内化到细胞中并进入溶酶体 ...

哺乳动物细胞是表达具有天然活性蛋白的最佳宿主其优势在于能正确有效地识别真核蛋白的合成、加工和分泌信号，识别和去除基因中的内含子，再经剪切加工成为成熟的mRNA，能准确地完成糖基化、磷酸化，形成链内和链间二硫键及蛋白水解等翻译后加工过程，因而产生的完整抗体和天然抗体一样，具有生物学活性，既可识别抗原又可激活补体系统。哺乳动物细胞易被重组的DNA转染，经过筛选可得到转化的细胞，具有遗传稳定性和可重复性 ...

1从微量培养基平皿中挑取单个菌落，接种于5ml 2×YT培养基(17g蛋白胨，10g Bactoyeast5g NaCl，加水至1 000ml)中，37℃振荡培养过夜。2取上述过夜菌1∶100稀释接种入500ml新鲜的2×YT培养液中，37℃振荡培养至OD=05~07，约25~3h。3将上述带有菌液的三角瓶置冰浴15~30min。4 000r/min 4℃离心20min。4去上清，用500ml预冷 ...

　　测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞，如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的，采用不同方法，考虑(1)细胞纯度；(2)细胞获得量；(3)细胞活力；(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。　　(一)　原理:　　常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077±0.0 ...

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低( 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。不同浓度 ...

大鼠骨髓间质干细胞的分离和培养：取3－4周龄SD大鼠断颈处死，75％酒精浸泡5分钟，无菌条件下取双侧股骨，彻底清除附着其上的肌肉组织，去除两端骨骺，暴露骨髓腔，PBS液反复冲洗骨髓腔至骨髓腔变白，吹打离散细胞，将冲洗液收集于离心管中，1100r/min离心4min，弃去上清及脂肪，加入DMEM培养液6－7ml，重悬细胞种植于25cm2培养瓶中，37℃、5℅CO2饱和湿度下培养，3d后更换培养液，去 ...

1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE ...

DH5αF- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 hsdR17(rk- mk) λ–1. An Hoffman-Berling 1100 strain derivative (Meselson68) 2. nalidi ...

1.从你叙述的情况我分析是percoll的问题，只有分离效果不好时才会出现中间层红细胞的残留。当然你可以全骨髓培养一下，以证明细胞活力的好坏2.我用的percoll的配方：percoll原液：8.5％ NaCl 9：1 －－－percoll稀释液percoll稀释液：0.85％ NaCl 14：11 －－－percoll工作液（可用于分离）注意：两次稀释都要注意混匀，这很关键3.percoll工作 ...

站长注：关于MTT实验的方案已在“MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项等全面指南（配图片）”一文中做了详细说明，为了保证连贯性，这里再将MTT一并简述一下：1、MTT法 MTT：化学名： 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细 ...

实验前应明确的问题1. 选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异 ...

原理：LDH (乳酸脱氢酶）是稳定的胞浆酶，存在所有的细胞中，当胞膜损伤时快速释放到细胞培养液中。LDH活性通过两个酶催化反应：LDH氧化乳酸盐生成丙酮酸盐，然后丙酮酸盐和四唑盐INT反应生成甲（formazan）结晶。甲（formazan）结晶量在培养液中的增加，与裂解的细胞数增加直接相关。甲（formazan）结晶染料是水溶的，可以用分光光度计在500nm波长检测。通过检测细胞培养上清中LD ...

一、MTT是什么MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。（可参考Sigma，货号 M5655， Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide）二、M ...

第一阶段：1．准备合适体积的由25%体积新培养液和75%旧培养液（即细胞原先适应的培养液）组成的混合培养液I。2．将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液I中。3．使细胞生长到通常培养时的较高密度，监测细胞生长参数。4．继续以步骤2中的密度分装细胞到新鲜的混合培养液I中，直到生长参数达到可以接受的水平。有时候分装一次就可达到要求。5．一旦细胞稳定下来，以通常使用的最低分装密度分装 ...

一、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。（一）检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；2、在微定量板上吸附组蛋白体’3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’4、加酶的底物，测光吸收制。（二）用途该法敏 ...

细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞，也就是说，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。　　原代培养物经首次传代成功后即为细胞系， 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限， 可称为有限细胞系， 如可以连续培养， 则称为连续细胞系， ...

血细胞由红细胞白细胞血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究如炎症渗出细胞迁移识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞淋巴细胞单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。这里主要论述人外周白细胞的分离，主要是中性粒细胞（Neutrophil），淋巴细胞（Lymphocyte），单核细胞（Monocyte）的分离。其它骨髓，脾淋巴细胞等分离可参，不同种属间请注意分离液的选择。细胞 ...

invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔……板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧！1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。（我的接种密度是3~undefined105/ml.）转染时，细胞要达到90~95%的融合。2、溶液1：240ul 无血清培养基 + 10 ul lip ...