细胞技术

在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。【材料】1.常规细胞培养仪器设备 恒温水浴振荡器。2.培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】1.细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2.培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin ...

在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。【材料】1.常规细胞培养仪器设备 恒温水浴振荡器。2.培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】1.细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2.培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin ...

最近做了很多小鼠腹腔巨噬细胞， 有如下几个问题需要和大家讨论，望经验丰富的同志指点一二。 1. 关于是否注射淀粉肉汤或是别的刺激物， 是不是注射后有两大特点：第一，得到的细胞更多， 第二，得到的细胞都是炎性巨噬细胞， 而未注射则是非炎性细胞？ 我做了十来次， 有时注射有时不注射（淀粉肉汤）， 注射后细胞确实多一些。 至于炎性与非炎性，有待指教。2. 关于分离的巨噬细胞的纯度问题。 我这里碰上一个严 ...

最近做了很多小鼠腹腔巨噬细胞， 有如下几个问题需要和大家讨论，望经验丰富的同志指点一二。 1. 关于是否注射淀粉肉汤或是别的刺激物， 是不是注射后有两大特点：第一，得到的细胞更多， 第二，得到的细胞都是炎性巨噬细胞， 而未注射则是非炎性细胞？ 我做了十来次， 有时注射有时不注射（淀粉肉汤）， 注射后细胞确实多一些。 至于炎性与非炎性，有待指教。2. 关于分离的巨噬细胞的纯度问题。 我这里碰上一个严 ...

单层贴壁细胞四唑盐（MTT）比色法仅供参考 MTT常用浓度为5mg/ml;向大家推荐一本书《动物细胞培养--基本技术指南》注：此书中MTT浓度为50mg/ml1、药物的细胞毒性四唑盐（MTT）比色法操作步骤接种细胞（1）用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。（2）离心细胞悬液使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。（3）将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml每个微 ...

一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。3．检测：用33258荧光染色镜检（每个 ...

单层贴壁细胞四唑盐（MTT）比色法仅供参考 MTT常用浓度为5mg/ml;向大家推荐一本书《动物细胞培养--基本技术指南》注：此书中MTT浓度为50mg/ml1、药物的细胞毒性四唑盐（MTT）比色法操作步骤接种细胞（1）用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。（2）离心细胞悬液使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。（3）将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml每个微 ...

一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。3．检测：用33258荧光染色镜检（每个 ...

骨髓间充质干细胞总结2003年8月，为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台，我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区，经过近三个月的讨论学习，我们既学习丰富了自己的知识体系，也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为翔实的认识，为了大家阅读的方便，我们决定把本版中的相关内容，同时参考部分书目和文献，做一总结。一、骨髓间充质干细胞的分离目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法， ...

1　骨髓间充质干细胞的发现和来源骨髓组织中有多种细胞成分，除基质细胞等已经分化的细胞外，还含有两类多潜能干细胞：造血干细胞和间充质干细胞。1987 年Friedenstein 等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个细胞在一定条件下可分化为多种类型的细胞，而且经过20－30个培养周期仍能保持其多向分化潜能。由于骨髓中的这种多能细胞能够分化为多种中胚层来源的间质细胞 故称之为间充质干细胞(Mesen ...

1　骨髓间充质干细胞的发现和来源骨髓组织中有多种细胞成分，除基质细胞等已经分化的细胞外，还含有两类多潜能干细胞：造血干细胞和间充质干细胞。1987 年Friedenstein 等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个细胞在一定条件下可分化为多种类型的细胞，而且经过20－30个培养周期仍能保持其多向分化潜能。由于骨髓中的这种多能细胞能够分化为多种中胚层来源的间质细胞 故称之为间充质干细胞(Mesen ...

1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质，如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。2.日本学者Oh等首先报道，高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞，并表达CK8 CK18 ALB等。3.2002年，Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中，用60％ ...

1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质，如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。2.日本学者Oh等首先报道，高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞，并表达CK8 CK18 ALB等。3.2002年，Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中，用60％ ...

前一段时间做干细胞的DAPI染色，把自己收集的一些相关资料和自己的经验写在这里，希望能够给做DAPI染色的战友一点帮助。将培养中的细胞进行DAPI染色，标记细胞核。DAPI保存：放在4℃保存。DAPI配制：使用无菌三蒸水溶解，可以将10mgDAPI溶解在10ml水中，使用冻存管分装，每一管1ml，－20℃冻存。使用的时候，先取一管放在4℃。染色：把培养皿中的培养基换一次液，每一个皿中放4－8ml培 ...

前一段时间做干细胞的DAPI染色，把自己收集的一些相关资料和自己的经验写在这里，希望能够给做DAPI染色的战友一点帮助。将培养中的细胞进行DAPI染色，标记细胞核。DAPI保存：放在4℃保存。DAPI配制：使用无菌三蒸水溶解，可以将10mgDAPI溶解在10ml水中，使用冻存管分装，每一管1ml，－20℃冻存。使用的时候，先取一管放在4℃。染色：把培养皿中的培养基换一次液，每一个皿中放4－8ml培 ...

什么是造血干细胞移植（Hematopoietic stem cell transplant）？ 造血干细胞移植（HSCT）泛指将各种来源的正常造血干细胞在患者接受超剂量化（放）疗后，通过静脉输注移植入受体内，以替代原有的病理性造血干细胞，从而使患者正常的造血及免疫功能得以重建。 移植过程中的危险因素 1、感染、发热、出血：患者在接受超剂量放、化疗后两周内，外周血白细胞下降至最低线，容易出现感染和发 ...

早期的HSCT的主要适应症是各种原因的造血系统疾病，目前已广泛应用于多种恶性疾病和非恶性疾病的治疗，同时在基因治疗中将发挥更大的作用。 恶性疾病: 恶性血液病 急性非淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、毛细胞白血病、少见类型白血病、MOS 、多发骨髓病、HD等。 恶性非血液病 乳腺癌、肺癌、卵巢癌、其他实体瘤。 非恶性疾病: 造血系统疾病 再生障碍性贫血、PNH 、骨髓纤维化 遗 ...

胚胎干细胞的标志物 Oct-4: Oct-4（也叫Oct-3或Oct3/4）属POU转录因子一员，最初鉴定为DNA结合蛋白，可通过顺式元件活化基因转录。它在全能胚胎干细胞(ES)和生殖细胞表达。该表达对于维持干细胞的自我更新和多能性是必要的。4 ES的分化导致Oct-4的下调。5 Oct-4不仅是细胞系多能分化的主要调节因子，而且也是首要的作为鉴定全能ES细胞的标志物。SSEAs: SSEAs 最 ...

胚胎干细胞的标志物 Oct-4: Oct-4（也叫Oct-3或Oct3/4）属POU转录因子一员，最初鉴定为DNA结合蛋白，可通过顺式元件活化基因转录。它在全能胚胎干细胞(ES)和生殖细胞表达。该表达对于维持干细胞的自我更新和多能性是必要的。4 ES的分化导致Oct-4的下调。5 Oct-4不仅是细胞系多能分化的主要调节因子，而且也是首要的作为鉴定全能ES细胞的标志物。SSEAs: SSEAs 最 ...

目录一、细胞二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代三、体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法四、移植细胞的准备细胞多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。3．J1-由Dr ...