细胞技术

近年来，基因编辑技术已经得到了迅速的发展。CRISPR- Cas9 作为第 3 代人工核酸内切酶系统，是一种具有广阔应用前景的基因定点修饰工具。利用的 CRISPR- Cas9 系统建立基因敲除的细胞系，具有时间短、难度低、费用少等优点，是广大科研工作者的好帮手。1、基因打靶细胞系制备的基本原理基因打靶是指通过 DNA 定点操作，改变基因组中的特定基因的编码序列，从而在细胞或生物活体内研究基因的功能及干预。细胞系基因打靶最常见的是基因敲除，其原理是 ...

MHC I 类分子在 CD8+细胞免疫系统中起到抗原呈递和识别作用。因其特异性，MHC-多肽复合物在免疫治疗中起着重要作用。虽然 MHC-多肽复合物能够被 TCR 特异性识别，但大多数天然 TCR 受体不仅稳定性低，与 MHC-多肽复合物的亲和力也低。为了解决上述两个不足，以肿瘤抗原表位为靶点，制备亲和力高，且可溶性强的 TCR 样抗体成为替代野生型 TCR 受体的最佳选择。该类 TCR 样抗体作为一种新的免疫分子，起着识别并杀灭肿瘤细胞的作用。1、以 T 细胞表位为靶标的免疫治 ...

随着流式细胞术的发展，流式细胞仪越来越多的使用在环境相关的研究及检测中。相对于传统的平板法与显微计数法，流式细胞术具有快速、灵敏、精确并能进行多参数分析的特点，且在后期使用成本上具有一定的优势。自 1993 年流式细胞仪首次运用于活性污泥中微生物群落结构分析以来，该技术逐渐成为空气、土壤、水等环境中微生物学研究中的一项重要工具。Joachimsthal 等 对新加坡港的压舱水进行了细菌总数、肠道菌数、弧菌数和大肠杆菌数的检测， ...

FCM 数据的存贮的方式是 FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排队（List Mode）方式。易于加工处理分析，但缺乏直观性，数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。坐标轴的意义？单参数直方图每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数（channel）， ...

间充质干细胞（MSC, mesenchymal stem cells）是干细胞家族的重要成员，属于多能干细胞，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。诱导性多能性的间充质干细胞（iPMSCs）是药物筛选、再生医学和细胞治疗的新型候选药物。然而，用于生成骨髓间充质干细胞的诱导性多能性间充质干细胞（iPSC），在导入编码基因的转录因子中，往往伴随有在靶细胞基因组的插入时发生突 ...

细胞和病毒生产的放大培养面临挑战。当需要生产量增加千倍时，细胞培养瓶对于工业规模生产是不可行的。微载体为生物反应器中贴壁细胞的生长提供了方便， 微载体充当贴壁细胞可附着的支架，允许它们增殖，而生物反应器使细胞-微载体复合体自由悬浮在培养基中。因此，贴壁细胞也可以像悬浮细胞那样生长，从而简化了放大培养，并允许利用现有的资源用于过程优化和生产。微载体细胞计数的难题细胞计数和活力是优化和监测大规模生物生产的关键参数。 传统 ...

引言：上海吉凯基因化学技术有限公司成立于 2002 年，拥有国内最大的慢病毒文库，同时也是国内最大的疾病关键基因科研服务供应商，在疾病研究领域的实验积累已逾 14 年！在这里，我们为大家特别整理了 10 多个研究领域的经验所得，将最实用的精华分享给大家！上一期帮大家总结了胃癌研究中体内外模型的选择，以及病毒工具的应用，本期我们来看看同属消化系统的结直肠癌又有哪些特别的的地方呢。结直肠癌（colorectal cancer, CRC）是消化系统 ...

自然杀伤（NK）细胞是一类先天性免疫淋巴细胞，与体外病毒感染和免疫调节有关。但是，lncRNA在NK细胞生物学过程中的作用还不是很清楚。研究人员借助于高通量lncRNA芯片检测技术，分析了NK细胞中lncRNA表达模式，发现了调控NK细胞分化和生物学功能相关的lncRNAs。其中，lnc-CD56，作为正调控因子，与CD56的表达呈正相关模式，参与了初级NK细胞的分化过程。该研究证实lncRNA在NK细胞生物学 ...

市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验，总结如下：一、外观拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要1、颜色根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采 ...

1 ． RBC 的 Hb 、网织 RBC 、 MCV 、 MCH 、 MCHC 及 RBC 体积分布宽度（RDW）是判定贫血类型重要依据： (1)Hb/RBC 比值：正常人： Hb/RBC 比值为 3 gHb/L=100 万 RBC/ μ L 即 3:1 。 AA 、溶血性贫血及继发性贫血等属此类。 3:1 者即为大细胞高色素性贫血 ,5% 。其网织 RBC 内嗜碱性网织增多，代偿性功能减低者，低于正常水平。多见于 AA ，但有不典型 AA（1/4）患者可有网织 RBC 增高。网织 RBC 计数 1000 个 RBC 中有多少网织 RBC ，以其 % 数表示，是一个比值数，不是绝对值。精确应计算绝对值或用流式细胞仪计数更 ...

所谓工欲善其事必先利其器，做实验也是一样的道理。做免疫组织化学染色，抗体信号弱，再怎么重复也达不到好的效果，不如试试 TSA 酪胺信号放大技术。该技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法，可有效放大信号 100-800 倍。该技术可与高性能染料 Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。上海臻和生物科技有限公司基于 TSA 酪胺信号放大技术开发了一系列自主品牌 EU-BIO 试剂盒，包括不同荧 ...

【嘉美生物】正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：一、自噬诱导剂 (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化锂）：IMPase 抑制剂（即Inositol monophosphatase，肌醇单磷酸酶）(3) Earle's平衡盐溶液：制造饥饿(4) N-Acetyl-D- ...

细胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。细菌内毒素 ...

据统计，2015 年，我国癌症新发人数为 429.2 万。死亡人数 281.4 万，平均 5 年生存率 36.9%。肺癌、胃癌、肝癌、食管癌占到总数的 57%。细胞治疗，治疗病人的个体化差异较大。细胞治疗大有向精准发展趋势。从临床角度，目前所开展的细胞治疗大多以 T 细胞为基础。血液肿瘤治疗，利用肿瘤特异性抗原（TAA）作为治疗靶点，使得 CAR-T 细胞治疗方法已得到有效验证，取得划时代性的突破。然而，利用 CAR-T 细胞治疗实体瘤的临床效果未能得到充分验证。因此，寻找有效治疗靶点 ...

据统计，约有 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞会导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗失败等。不仅浪费大量时间、精力和金钱，还可能造成不可挽回的灾难性后果。为此，很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定，并对细胞系之间的交叉污染进行监测。

细胞制作

1. 细胞污染的种类细胞污染一般可分为微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、细菌、支原体等。而真核生物一般是细胞系间的交叉污染。细菌、真菌或酵母的污染很容易辨识，直接可通过培养基颜色变化、显微镜下观察便可判断。如细菌污染后细胞培养基变黄色，而且镜下有小黑点，且有规律的运动。而酵母污染后培养基变紫色，镜下可见透明、且连成一串的圆形。但如果是支原体污染的话，由于最开始支原体生长缓慢，而且显微镜下难以看出， ...

1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是 ...

细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的， 还有就是血清和培养基。解决办法：1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能a、是「黑胶虫」，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或 ...

目前市场上的血清品牌五花八门，除了名气最大的 Gibco，Hyclone 之外还有很多其它的进口品牌和国产品牌。价格也高低不一，可以称得上鱼龙混杂，血清的水深的很。很多不法奸商为追逐高额利润，大肆造假，炮制出许多所谓 Gibco，Hyclone 等「原装进口胎牛血清」，甚至很多国家严禁进口的疫区血清或者超级紧俏的血清货号，他们都能提供「大量现货」，坑害广大科研工作者，造成实验失败，毕业延期等恶劣影响。特别是近年来，进口血清紧俏，价格 ...