细胞技术

在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。【材料】1.常规细胞培养仪器设备 恒温水浴振荡器。2.培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】1.细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2.培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin ...

单层贴壁细胞四唑盐（MTT）比色法仅供参考 MTT常用浓度为5mg/ml;向大家推荐一本书《动物细胞培养--基本技术指南》注：此书中MTT浓度为50mg/ml1、药物的细胞毒性四唑盐（MTT）比色法操作步骤接种细胞（1）用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。（2）离心细胞悬液使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。（3）将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml每个微 ...

一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。3．检测：用33258荧光染色镜检（每个 ...

骨髓间充质干细胞总结2003年8月，为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台，我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区，经过近三个月的讨论学习，我们既学习丰富了自己的知识体系，也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为翔实的认识，为了大家阅读的方便，我们决定把本版中的相关内容，同时参考部分书目和文献，做一总结。一、骨髓间充质干细胞的分离目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法， ...

1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质，如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。2.日本学者Oh等首先报道，高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞，并表达CK8 CK18 ALB等。3.2002年，Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中，用60％ ...

前一段时间做干细胞的DAPI染色，把自己收集的一些相关资料和自己的经验写在这里，希望能够给做DAPI染色的战友一点帮助。将培养中的细胞进行DAPI染色，标记细胞核。DAPI保存：放在4℃保存。DAPI配制：使用无菌三蒸水溶解，可以将10mgDAPI溶解在10ml水中，使用冻存管分装，每一管1ml，－20℃冻存。使用的时候，先取一管放在4℃。染色：把培养皿中的培养基换一次液，每一个皿中放4－8ml培 ...

早期的HSCT的主要适应症是各种原因的造血系统疾病，目前已广泛应用于多种恶性疾病和非恶性疾病的治疗，同时在基因治疗中将发挥更大的作用。 恶性疾病: 恶性血液病 急性非淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、毛细胞白血病、少见类型白血病、MOS 、多发骨髓病、HD等。 恶性非血液病 乳腺癌、肺癌、卵巢癌、其他实体瘤。 非恶性疾病: 造血系统疾病 再生障碍性贫血、PNH 、骨髓纤维化 遗 ...

什么是造血干细胞移植（Hematopoietic stem cell transplant）？ 造血干细胞移植（HSCT）泛指将各种来源的正常造血干细胞在患者接受超剂量化（放）疗后，通过静脉输注移植入受体内，以替代原有的病理性造血干细胞，从而使患者正常的造血及免疫功能得以重建。 移植过程中的危险因素 1、感染、发热、出血：患者在接受超剂量放、化疗后两周内，外周血白细胞下降至最低线，容易出现感染和发 ...

胚胎干细胞的标志物 Oct-4: Oct-4（也叫Oct-3或Oct3/4）属POU转录因子一员，最初鉴定为DNA结合蛋白，可通过顺式元件活化基因转录。它在全能胚胎干细胞(ES)和生殖细胞表达。该表达对于维持干细胞的自我更新和多能性是必要的。4 ES的分化导致Oct-4的下调。5 Oct-4不仅是细胞系多能分化的主要调节因子，而且也是首要的作为鉴定全能ES细胞的标志物。SSEAs: SSEAs 最 ...

A hemacytometer (also spelled hemocytometer) is an etched glass chamber with raised sides that will hold a quartz coverslip exactly 0.1 mm above the chamber floor. The counting chamber is etched in a ...

目录一、细胞二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代三、体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法四、移植细胞的准备细胞多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。3．J1-由Dr ...

1、称体重：2、腹腔内注射苯巴比妥钠50ｍｇ/kg将大鼠处死用酒精严格消毒大鼠下颌至全腹皮肤及鼠毛剪开下颌至中腹部皮肤打开腹腔推开肝脏并分离出肝及膈肌间的下腔静脉并给予切开放血。3、肺血管灌洗：分离并部分横断切开气管插入连接有10ｍｌ注射器(内装ｐＨ7.0ＰＢＳ)的灌洗管并用细线加以固定在固定的离心段剪断气管剪开肋骨并打开胸腔将肺和心脏提出胸腔。用20号针(另一端连接20ｍｌ的注射器) ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（ ...

问题1：培养液pH 值变化太快可能原因（1）CO2 张力不对（2）培养瓶盖拧得太紧（3）NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足（4）培养液中盐浓度不正确（5）细菌、酵母或真菌污染建议解决方法（1）按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3 对应CO2 浓度为5％ 到10％。（2）松开瓶盖1/4 圈。（3）改用不依赖CO2 培养液。加HEPE ...

细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素 ...

1.我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行 ...

1.如何选择培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。 2.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培 ...

细胞诊断要诀镜下观察要周到，每个视野不漏掉；看完背景看细胞，低倍高倍仔细瞧；先看形态和大小，核浆比例有多少；核的结构最重要，核质又多又粗糙；核膜核仁均异常，病理分裂偶见到；单个细胞不能断，足量细胞方有效；只有成堆无分散，重复检查再报告。肿瘤细胞分类要诀肿瘤细胞四类型，抓住特点能分清；鳞癌细胞多形性，核如墨染胞浆红；（角化型）腺癌细胞类圆形，胞浆空泡是特征；核膜增厚核仁大，核的位置偏正中；未分化癌容 ...

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 10% 热灭活马血 ...

１　原理　　用稀乙酸将血液稀释２０倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液中的白细胞数。２　器材和试剂２．１　器材　　生物显微镜、Ｎｅｕｂａｕｅｒ氏血细胞计数池、０．０２ｍｌ吸管、小试管、刺血针、２ｍｌ吸管。２．２　试剂　　白细胞稀释液：采用３％乙酸溶液。３　稀释液的配制　　采用３％乙酸溶液。即取冰乙酸３ｍｌ，加蒸馏水至１００ｍｌ混合。亦可于上述稀释液中加美蓝或 ...