生物化学技术

问：请教各位高手：晶状体醛糖还原酶测定方法的具体步骤！谢谢！ 答：不知你要用那种方法测定？一般常用以下两种你可以作参考：配反应体系时注意要临用前加DL－甘油醛和NADPH。作NADPH标准曲线时NADPH至少要梯度稀释5个浓度。 如果不够详细你可以问问作者，山东潍坊医院内分泌科刘长山教授。 荧光法：血样1mI，加肝素抗凝管，1500g离心10分钟，红细胞用10倍体积的等渗盐水冲洗三次，加4倍体积 ...

问：各位大哥大姐好！小弟想测定一下本人分离出的拮抗菌是否为分泌出的几丁质在起作用！想采用在含有胶体几丁质的平板产生透明圈初步测定方法，但在实验准备过程中，碰到了些困难！首先，几丁质不知道哪里有卖的，打了好多家试剂公司，都没有；其次，胶体几丁质配制的方法，国内参考文献描述的有好多，我不确定哪中方法适用，能有结果！恳请园子里做过这方面实验的大哥大姐能帮我解决上述两个问题！ 答：这里面有胶体几丁质的配置 ...

问：很多生物防治用的真菌可以产生几丁质酶和蛋白酶等代谢产物，现在实验想检测这两种酶的活性的大小，不知道用那种方法，请教各位！有没有简单的方法如平板法，测代谢产物法等，具体方法如何？ 答：可以用透明圈法，具体做法就是提出几丁质粗酶液后在几丁质—PDA培养基上打孔培养一定时间然后观察透明圈的大小，测代谢产物应该是不行，因为几丁质酶分内外切酶，产物不一，测不出来的，你也可以用聚丙烯酰胺电泳检 ...

问：如何检测几丁质酶的活性？在一篇文章里看到过，是利用这个酶来酶解底物来测量的。我的问题是： 1、在测量该酶活性时，要不要把这个酶提取出来？ 2、它的底物时chitin底物溶液怎么配制？ 答：1、对几丁质酶酶活的检测一般不需要把几丁质酶提取出来，但最好能适当的浓缩一下酶溶液，因为几丁质酶的活性不是很高。 2、几丁质酶活检测的底物一般用胶状几丁质，浓度为0.5-1.0%，一般用PH5.0左右的醋酸 ...

问：我做几丁质酶已经有一年多了，现在也积累了一些经验，希望和做相关课题的同仁们相互交流一下经验，有问题的也可以问，我会尽量给大家回答，也希望知道的朋友尽量给予帮助。谢谢！ 问：我真是太激动了，现在正准备做几丁质酶的分离、纯化；查了很多资料，但还是不太清楚其活性测定方法（一般都是用sigma公司的，有一种试剂500mg就30美金），肯请你为我介绍实用的方法，谢谢！ 答：测几丁质酶活一般都用DNS ...

问：各位大虾，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌能产生几丁质酶么？ 答：自从1905年Benecke首次报道了溶几丁质芽孢杆菌（Bacillus chitinovirous）能产生几丁质酶以来，已发现了许多产几丁质酶的微生物，包括细菌、放线菌、真菌等。在细菌中，已知的产几丁质酶的有气单胞菌属、交替单胞菌属、杆状菌属、肠球菌属、紫色杆菌属、假单胞菌属、交替假单胞菌属、沙雷氏菌属、弧菌属、黄单胞菌属、小球菌属、 ...

近期的NEJM发表了一篇哮喘方面的文章——探讨几丁质/壳多糖酶与哮喘严重度的关系。是一个横断面（cross-sectional）研究，设计简单但严谨。有兴趣的朋友可以看看。下面是园子里的该文摘要： ttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=116&id=10442258&sty=1&tpg=3&age=0 ...

问：我想请教一下各位，18家族几丁质酶与19家族几丁质酶是怎样进行分类的。究竟怎样对几丁质酶进行分类的？谢谢！ 答：你好，根据几丁质酶催化区氨基酸序列的同源性，可以把几丁质酶分为18，19，20家族。18家族的几丁质酶来源于细菌，真菌，病毒及一些植物。19家族的几丁质酶主要包括植物几丁质酶和部分链霉菌属的几丁质酶。20家族包括链霉菌属和人类的几丁质酶。 ...

问：大家有测蔗糖转化酶，蔗糖合成酶，淀粉酶类的实验的吗？我的一个同学现在正测这三个酶，有谁知道怎麽测吗？先提前谢谢了！ 答：粉酶好测，它降解淀粉生成葡萄糖，可以使用DNS还原糖法测定。蔗糖转化酶应该是水解蔗糖生成葡萄糖和果糖，那么可以通过测定果糖含量来测定酶。果糖测定在有机化学书上有，很简单的。也可以通过测定还原糖的含量来测定，蔗糖合成酶那么可以使用测定低物量减少的方法测定，既测定作为低物的葡萄糖 ...

问：我记得半年前见习时用的是PNP-G7法测α－淀粉酶，现在又改进为EPS-G7法，二者有何区别？哪个方法更好？再有二者的英文全称及汉语全文又是怎样的？ 我想：EPS-G7应该是 46-ethylidene-(G7)-1，4-nitrophenyl-(G1)-α，D-maltoheptaoside46-亚乙基-α，D-麦芽7糖苷-对硝基酚。参考自：上海申能－德赛 ...

问：看到有文献将β-环糊精交联后作柱材料，用于从水溶液中吸附α-淀粉酶，吸附上去后再用溶剂把α-淀粉酶洗下来，也有人在α-淀粉酶的水溶液中加入β-环糊精或羟丙化β-环糊精来提高α-淀粉酶的稳定性。疑问： β-环糊精与淀粉都是多糖（β-环糊精是7个葡萄糖围成的筒状结构），用β-环糊精作柱材料， ...

问：请教各位老师 ：一病人两次尿检胰淀粉酶都比总淀粉酶高 正常吗？ 答：1、检测原理：免疫抑制连续监测法。底物46-亚乙基-a-D-麦芽七糖苷-对硝基苯酚（EPS-G7）被α-淀粉酶裂解为多种片段在第二步反应中它们被a-葡萄糖苷酶进一步水解生成葡萄糖和对硝基苯酚。由于在预孵育阶段，唾液淀粉同工酶被两种单克隆抗体的复合体选择性抑制，所以吸光度的上升速率与样品中胰淀粉酶的活力成正比。 2 ...

问：小孩淀粉酶测定：血AMY正常，尿AMY为1881(尿AMY<600) ，第二天再测定尿淀粉酶为172，结果为正常，临床医生认为我们结果不准，可是将两天的尿标本重新测定，结果仍是如此。各位高手前辈遇到这种情况过吗？为什么？ 答：血中的AMY升高达高峰后一般要2~5天降至正常。AMY在尿中下降要比血中的AMY还慢，象楼主所说的情况，一般出现的可能性不大，我认为很有可能是第一天的标本被唾液污染 ...

问:现在我发现了一个GB 8275-87，不过我现在用的是诺维信的α淀粉酶，他们的标准不是8275－87 两个标准就有一项酶活力这个指标值不同，我也不知道怎么转换，求教哪位可提供另一个标准（GB 2760）给我参考一下。 答：GB 2760是食品添加剂使用卫生标准，对你有用吗？ ...

淀粉酶属于水解酶的一种，是淀粉水解的生物催化剂。按降解方式分为α—淀粉酶、β—淀粉酶、糖化酶、异淀粉酶和环糊精生成酶。α—淀粉酶将淀粉长链分子水解成短链分子时，以无规则的方式切断淀粉大分子内部的α—1，4甙键而使淀粉生成糊精、低聚糖等，因产物的末端葡萄糖残基中C，碳原子为α—构形， ...

果胶酶，适用于果汁榨取，浓缩过滤，果汁澄清，果内衣，膜组织分离。 果胶酶活力单位：果胶酶 10万单位 酶催化特性： 最适温度：45-55℃ 最适PH：3-4 例：样品果汁-温州柑，国光苹果，远天34用量：100克/吨果汁，PH=3.5，50℃水浴，以不加酶果汁相同处理作对照，60分钟检定，果胶物质水解为100%，蛋白质水解率为60%（已经恒定） 注：果胶酶无蛋白质水解能力。 适用范围：葡萄 梨 草 ...

问：我最近想测量果汁中果胶酶的活性，通过查资料发现比较常用的方法为PH-stat法，但该方法要用自动电位滴定仪，该仪器很贵，各位有没有更好的方法，或者谁有这个仪器，我现在和着急，恳请各位的 帮助，多谢！ 答：果胶酶包含的酶组分为： 果胶质解聚酶： 对果胶作用的解聚酶分为a：聚甲基半乳糖醛酸酶（PMG），有内切、外切两种酶系（EC.3.2.1.41）； b：聚甲基半乳糖醛酸裂解酶（PMGL），分内切 ...

问：请问Cellulase“Onozuka R-10”酶溶液可以用0.22微米滤膜灭菌吗？ 答：应该可以的，做过这个实验的，这样足够了，不过就是比较麻烦，必须在超净工作台上来进行。 答：酶液一般都是过滤灭菌，买个一次性的滤器就可以，便宜好用。 ...

问：我现在急求里氏木霉透明圈筛选纤维素酶的做法，试过七八种配方都没有成功，哪位能提供可行的配方，在下不胜感激！ 答：双层平板法:下层倒琼脂水2.5%，上层用球磨纤维素粉1.2%，添加磷酸二氢钾0.4%，蛋白胨0.3%，酵母粉0.05%，有圈的就是纤维素酶了。 ...

问：最近在从一种植物中提取黄酮苷元，但是植物中苷元是与葡萄糖成苷而存在，现考虑使用纤维素酶进行酶解，却苦于总是酶解不够完全，也找不到相关的参考资料。请问大家有没有做过相关的工作，操作中要注意哪些事项呢？ 答：我们实验室做苷的水解，都是制备特定的苷的平板。再筛选能够转化水解的菌种，并且测酶活，薄层层析鉴定活得菌种和酶液。虽然都是糖苷键，但是不同的苷类化合物，它还是有特异性，不是所有的都可以用纤维素酶 ...