生物化学技术

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 【目的要求】1. 掌握α1-AT分离纯化各步骤原理、操作及鉴定方法2. 掌握基本技术操作及仪器使用 3. 熟悉人血清蛋白质的分类方法α1-AT性质4. 了解生物大分子制备技术 分离纯化类型5. 学会利用学过的分离纯化方法进行基本的科研设计 6.练习研究论文基本写作 【 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 一、实验目的 1.加深了解酶活力的概念。 2.学习掌握测定蛋白酶活力的方法。 二、实验原理 酶活力指酶催化某一特定反应的能力。其大小可用在一定条件下酶催化反应进行一定时间后，反应体系中底物的减少量或产物的生成量来表示。 酶活力单位是表示酶活力大小的重要指标。本实验规定酶活力单位(U)为一定条 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 目的要求 (1)学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。 (2)了解酶的活性与比活性的概念。 实验原理 胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在Ca2+的存在下，被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活，从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开，失去一段六肽，分子构象发生一定改变后转变为 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 一、实验目的 1.熟悉亲和层析纯化蛋白质的的原理。 2.初步掌握亲和层析法纯化胰蛋白酶的方法步骤。 二、实验原理 亲和层析已经广泛应用于生物分子的分离和纯化，如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等，也可用于分离细胞、细胞器、病毒等。近十多年来，亲和层析发展 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 【目的要求】 1.实验目的 ⑴ 通过学习生化及相关学科的理论和技术，熟悉并进一步掌握酶的提取、分离、纯化、检测及其生物学性质和理化性质的实验技能。 ⑵ 初步培养从总体水平进行实验的设计，进一步加强并提高综合分析解决问题的能力。 ⑶ 培养科研工作中的协作精神和勤俭而高效的科研作风。 2.实验要 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 一、实验目的 ①学习测定蛋白酶活力的方法。 ②掌握分光光度计的原理和使用方法。 ③学习绘制标淮曲线的方法。 二、实验原理 福林—酚试剂是磷铂酸盐与磷钨酸盐的混合物。它在碱性条件下不稳定，能被酪氨酸中的酚基还原，生成铂蓝、钨蓝的混合物。酪蛋白在蛋白酶作用后产生的酪氨酸可与福林—酚试剂反应，所生 ...

相关专题 解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 1.1原理 福林试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等)，它使蛋白质及其水解产物呈上述反应，利用这个原理可以测定蛋白酶活力的强弱。以酪蛋白为作用底物，在一定pH值和温度下，同酶液反应，经一段时间后加入 ...

相关专题 抗原实验技术及研究进展 非放射性物质标记核酸探针的方法通常是通过在核酸分子中引入诸如半抗原、生物素等惰性小分子。这些小分子一般通过连接到dUTP等核苷三磷酸上。这种经修饰的核苷三磷酸再通过酶促反应掺入到探针中，例如用于随机引物法标记长链探针或是通过末端转移酶标记寡核苷酸的3′端。 杂交后用与一种酶相连接的抗体(或者如果是 ...

相关专题 关于配制CMC-Na： 1. 先将称好的CMC加入所需水量的8/10让其充分溶涨后在加热煮沸然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒煮沸时间短. 2. CMC溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，实际操作中0.4%～0.5%最为实用，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 目的： 1. 药典：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 2. 如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度; 3. 如果你是做含量测定，比如说用 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 TLC显色试剂的选择 显色试剂 显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂;另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。显色剂种类繁多，列举一些常用的显色剂。 l.通用显色剂 硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液;硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液;1.5mol/L硫酸溶液与0. ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 1.在薄层层析中，展开剂的选择很重要，我从事合成时间不长，每次选展开剂的时候都不是很恰当，请各位经验丰富的老师赐教 答复：一种简单的办法是根据你产的溶解性选择一种极性最强的溶剂学(如醇类，乙氰等)，再根据你实际展开的情况慢慢加入极性弱的溶剂(如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等)调节体系的极性。以得到最好的展开效果 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 薄层色谱方法总结1.方法原理(1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - (诱导) - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。2.溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷 一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离; 中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 薄层色谱法是常用的微量分析方法，广泛应用中草药研究和日常检验，但常出现斑点异常现象给结果判断带来困难，应注意避免和克服。 1、拖尾现象 拖尾现象在薄层色谱中较为常见，结果使斑点间界限模糊，结果难以判断。 产生原因及克服方法 (1)点样过量在薄层色谱过程中化合物在薄层板上进行吸附———解吸附的移动过程中，任何一 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 一、薄层色谱概念 最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱。同柱色谱不同的是吸附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少量展开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂涂层，借毛细作用向上移动。与柱色谱过程相同，经过在吸附剂和展开剂之间的多次吸附-溶解作用，将混合物中各组分分离 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 薄层色谱，或称薄层层析(thin-layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。 　　 1.薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。 2.吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。主要区别在于薄层 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 薄层色谱，与其他色谱技术的原理一样，是一种利用样品中各组成成分的不同物理特性把它们分离开来的技术。这些物理特性包括分子的大小、形状、所带电荷、挥发性、溶解性及吸附性等。薄层色谱分离一般是由几种分离机理综合的结果，最多的是吸附和分配，也有离子交换或凝胶渗透。鉴于在薄层色谱的过程中，固定相和流动相的特性因分离原理 ...

相关专题 薄层层析（TLC）技术 一、薄层色谱技术的特点 薄层色谱技术具有其他色谱技术共同的特征，即利用样品中各组成成分的不同物理特性把它们分离开来。这些物理特性包括分子大小、形状、所带电荷、挥发性、溶解性及吸附性等。 1.薄层色谱系统的组成部分 固定相：可以是一种固体、凝胶或固定化的液体，或起支撑作用的基质。 色谱板：把固定相薄薄涂布在玻璃 ...