生物化学技术

相关专题 一、基本概念 目前电泳技术已被广泛应用于蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定。 何谓电泳？在溶液中，带电粒子在外加电场的作用下，向相反电极方向移动的现象，称为电泳。 电泳时不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同。电泳速度常用泳动率（M）来表示。 泳动率也称迁移率。 它等于泳动速度（V）与电场强度（E）之比（1式），亦即带电粒子在单 ...

相关专题 实验原理单向定量免疫电泳又称火箭电泳（rocket immunoelectrophoresis）。在琼脂内掺入适量的抗体，在电场作用下，定量的抗原泳动遇到琼脂内的抗体，形成抗原—抗体复合物沉淀下来。走在后面的抗原继续在电场作用下向正极泳动，遇到琼脂内沉淀的抗原—抗体复合物，抗原量的增加造成抗原过量，使复合物沉淀溶解，一同向正极移动而 ...

相关专题 实验原理酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳。此过程与无机磷将糖磷酸化有关。本实验利用无机磷与钼酸形成的磷钼酸络合物能被还原剂α－1，2，4－氨基萘酚磺酸钠还原成钼蓝的原理来测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量，用以观察发酵过程中无机磷的消耗。试剂和器材试剂 蔗糖；5％三氯乙酸；3mol/L硫酸和2.5％钼酸铵等体积混合液。磷 ...

相关专题 验原理在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行。本实验以动物肌肉组织中肌糖原的酵解过程为例。肌糖原的酵解作用，即肌糖原在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应，最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖原首先磷酸化，经过己糖磷酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯等一系列中间产物，最后生成乳酸。该过程可综合成下列反 ...

相关专题 实验原理黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、 ...

相关专题 实验原理 维生素B2（核黄素）在440~500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与维生素B2的浓度成正比。利用硅镁吸附剂对维生素B2的吸附作用去除样品中的干扰荧光测定的杂质，然后洗脱维生素B2 测定其荧光强度。试液再加入连二亚硫酸钠（Na2S2O4），将维生素B2还原为无荧光的物质，再测定试液中残余荧光杂质的荧光强 ...

相关专题 目的要求(1) 了解乳酸脱氢酶活性测定原理。(2) 学习用比色法测定酶活性的方法。实验原理乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase简称LDH，EC.1.1.1.27 L－乳酸：NAD+氧化还原酶）广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很 ...

相关专题 实验原理维生素A（视黄醇）属于脂溶性维生素，在氯仿溶液中能与三氯化锑生成不稳定的蓝色物质，此反应称为Carr-price反应，可用于维生素A 的定性鉴定和定量测定，所生成的颜色的深浅与溶液中维生素A的量成正比。在一定时间内可用分光光度计在620nm波长下测定其吸光度。试剂和器材一、试剂无水硫酸钠；醋酸酐；无水氯仿；乙醚。25％三氯化 ...

相关专题 第一部分多糖的提取、纯化目的要求了解多糖提取和纯化的一般方法。实验原理多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子。早在60年代，人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。它可以调节免疫功能，促进蛋白质和核酸的生物合成，调节细胞的生长，提高生物体的免疫力，具有抗肿瘤、抗疡和抗爱滋病(AIDS)等功效。由于高等真菌多糖主要是细胞壁 ...

相关专题 实验原理 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。 维生素C主要存在于新鲜水果及蔬菜中。水果中以猕猴桃含量最多，在柠檬、桔子和橙子中含量也非常丰富；蔬菜以 ...

相关专题 实验原理 体内α-氨基酸的α-氨基在氨基转换酶的作用下，移换至α-酮酸的过程，称氨基转换作用。此类酶各有一定的特异性，普遍存在于动物各组织中。 本实验是将谷氨酸与丙酮酸在肌肉糜中谷氨酸－丙酮酸氨基转换酶（简称谷－丙转氨酶）的作用下进行氨基转化反应，然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。其反应过程如下： 由于谷氨酸、丙酮酸在肌 ...

相关专题 目的要求 （1）学习双向纸层析的原理。（2）掌握纸层析法分离混合氨基酸的操作方法。实验原理纸层析是以滤纸作支持物，用一定的溶剂系统展开，使混合样品达到分离分析的层析方法。其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端；再选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开，展开完毕，取出滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫 ...

相关专题 目的要求（1）了解凝胶柱层析的原理及应用。（2）掌握凝胶柱层析的基本操作技术。实验原理凝胶层析又称凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子不能进入凝胶颗粒中的静止相中，只留在凝胶颗粒之间的流动相中，因此以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒 ...

相关专题 分子生物学技术的突飞猛进发展，也推动了病理学的进展。原位杂交技术时分子生物学领域中最常用的基本技术方法之一，是核酸分子杂交技术中的一种。 核酸原位杂交技术最早应用于60年代末期，但当时仅限于对体外条件下啊核酸分子片段的初步工作，直到1975年才见到较为系统地介绍在细胞内进行原位杂交的技术。而在常规福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片中进 ...

相关专题 实验原理：基本同Southern Blotting，但因RNA是单链分子，必须消除局部区域形成的二级结构，在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小，因而需使用变性胶进行电泳；操作过程中应特别注意防止RNA的降解。 实验材料：经检测质量好的RNA样品 实验步骤： 1.制胶： Agarose 1%-1.2%，1×MOPS ...

相关专题 【目的和要求】1、 学习和掌握蛋白质双向电泳的基本原理和方法。2、 了解双向电泳技术在蛋白质组学研究中的应用。【实验原理】蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦（IsoelectrofocusingIEF）根据蛋白质的等电点不同进行分离；第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两 ...

相关专题 琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide EB)染色在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外还可以从电泳后的凝胶中 ...

相关专题 【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法：针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行设计了两对引物，采用双重PCR同时扩增上述基因，用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质，在50cm×100μm i．d．涂壁毛细管中，于一10kV电压下用激光诱导荧光-毛细管 ...

相关专题 体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋 ...

相关专题 一、实验 一、实验目的 目的：1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；2、掌握分配层析法；3、掌握影响分配系数的因素。层析分离技术z是利用被分离的混合物中各组分物理化学的性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在两相（流动相和固定相）中，当流动相流过固定相时，各 ...