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免疫火箭电泳技术

相关专题 一、原理定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中,在电场作用下,引起抗原抗体的迁移和相互反应,当比例合适时形成肉眼可见的沉淀峰,由于电泳继续进行,样品孔不断有抗原移向抗原抗体复合物的沉淀峰,因抗原过剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗体复合物的沉淀峰。如此反复向前,直到再无游离抗原而反应终止,形成上行火箭状的沉淀峰,其沉淀 ...

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对流免疫电泳技术

相关专题 (一)原理 在pH8.6的琼脂凝胶中,抗体球蛋白只带有微弱的负电荷,在电泳时,由于电渗作用的影响,抗体球蛋白不但不能抵抗电渗作用向正极移动,反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷,将抗原置于负极,将血清抗体置于正极,电泳后则在两孔之间相遇,并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀线。本法由于抗原抗体分子在电场作用下定向运动,限制 ...

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交叉电泳实验技术

相关专题 (一)原理 交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离,然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中,于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线,根据沉淀线的位置及面积(或高度)可确定该抗原的质和量。 此试验可 ...

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酶标对流免疫电泳技术

相关专题 (一)原理 利用酶标记抗原(抗体)和待测抗体(抗原)在电场中向一定方向移动,在比例适当的地方形成沉淀线,通过酶作用底物而显色,指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。 本试验以检测血吸虫抗体为例。(二)材料与试剂1.0.02Mol/pH 8.6巴比妥缓冲液 巴比妥 ...

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吸附柱色谱的实验技术

相关专题 1. 吸附剂的选择及处理  吸附剂分为无机吸附剂如硅胶、氧化铝、活性炭、氧化镁、碳酸钙、磷酸钙,有机吸附剂如纤维素、淀粉、蔗糖、聚酰胺等。一般来说,所选择吸附剂应有较大的比表面积和足够的吸附能力:对欲分离的不同物质应有不同的吸附能力,即有足够的分辨力;与洗脱剂、溶剂及样品组分不会发生化学反应;吸附剂颗粒均匀。 吸附剂一般先经 ...

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免疫电泳实验技术

相关专题 (一)原理 免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开,然后加入抗体做双相免疫扩散,把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇,在二者比例适当的地方,形成肉眼可见的沉淀弧。该方法可以用来研究:①抗原和抗体的相对应性;②测定样品的各成分以及 ...

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琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA

相关专题 【实验目的】 通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。 【实验原理】 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖,是由D型和L型半乳糖以α-1,3和β-1,4糖苷键相连形成的线状高聚物(如下图所示)。琼脂糖遇冷水膨胀,溶于热水成溶胶,冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段 ...

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聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳

相关专题 【实验目的】 1.掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2.学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术,用于分离蛋白质。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为支持物的一种电泳形式。单体-丙烯酰胺和交联剂-甲叉双丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺,该聚合反应以TEMED作为催化剂,以APS 作为引发剂。丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺 ...

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离子交换树脂层析分离混合氨基酸

相关专题 【实验目的】 1. 了解离子交换树脂层析的工作原理及操作技术。 2. 学会用离子交换树脂层析法分离混合氨基酸。 【实验原理】 离子交换树脂是一种合成的高聚物,不溶于水,能吸水膨胀。高聚物分子由能电离的性基团及非极性的树脂组成。极性基团上的离子能与溶液中的离子起交换作用,而非极性的树脂本身物性不变。通常离子交换树脂按所带的基团分为强酸 ...

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聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法

相关专题 【实验目的】 1.掌握聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的基本原理 2.学习用等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的操作和方法 【实验原理】 等电聚焦法是一种特殊的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。它的特点是在凝胶柱中加入两性电解质载体-Ampholine,从而使凝胶柱上产生pH梯度。当向两性载体凝胶施加电场时,即可形成pH梯度,pH梯度的顺序是从阳极到阴极pH值 ...

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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法—蛋白质的分子量测定

相关专题 【实验目的】 1.掌握SDS—聚丙烯酰胺电泳法的原理。 2.学会用此种方法测定蛋白质的分子量。 【实验原理】 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。SDS与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其稳定地存在于一 ...

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葡聚糖凝胶层析

相关专题 【实验目的】 1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。 2.学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。 【实验原理】 凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤,是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术,这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。层析的固定相载体是凝胶颗粒,目前应用较广的是:具有各种孔径范围的葡聚糖凝 ...

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芦丁的提取及鉴定

相关专题 (一)概述 芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为植物Sophora japonica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔为葡萄糖(Gl ...

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糖链的序列测定—Smith降解法

相关专题 Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解,用纸层析鉴定水解产物,由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例,其反应式如下图: 以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸,并且无甲酸释放;Smith降解后产生甘油。以1→4 ...

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大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

相关专题 (一)概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中,用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来,大黄在植物性泻下药中占有重要位置,是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多,优质大黄是蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatclm L),大黄(R. officinale Baill)及唐古特大黄(R. t ...

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水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA

相关专题 实验目的 学习水平式琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度、构型、含量和分子量大小。 实验原理 闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同,在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率,因而在紫外灯下观察,能区别闭合环状质粒DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。实验 ...

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多克隆抗体的制备

相关专题 【实验原理】 当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。 将抗原导入敏感动物体内后,可刺激网状内皮细胞系统,尤其是淋巴结和脾脏中的 ...

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多克隆抗体的免疫电泳

相关专题 【实验原理】 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM IgG IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗体的扩散过程中,抗原和抗体适 ...

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琼脂糖凝胶电泳检测DNA

相关专题 目的: 学习水平式琼脂糖凝胶电泳,检测质粒DNA的构型、分子量的大小。原理: 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物,可作为电泳支持物,适用于分离大小范围在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的迁移率与分子量的对数值成反比关系。观察其迁移距离,与标准DNA片段进行对照,就可获知该样品分子量大小。在质粒抽提过程中,由于各种因素的 ...

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DNA电泳常见问题分析

相关专题 问题原因解决办法DNA带模糊1) DNA降解避免核酸酶污染2) 电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液3) 所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力4) DNA ...

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