生物化学技术

一、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点 ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失 ...

蛋白浓缩方法基本有：丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法……1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析）选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！4，（低温）有 ...

（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion Inc.），琼脂糖，DEPC X光底片，底片暗盒，R ...

1. 取蜡块切片15-20张（8UM），置于EP管中，加入1ML的二甲苯，37度作用3小时，10000×3分钟，倾去二甲苯。重复3-4次，观察管壁是否光滑。若有蜡质残存，需继续脱蜡。 2. 剃度酒精水化：100% 1ML，室温30分钟，10000×3分钟，去上清；95%；75%；50%。 3. 消化：1×SSC 500UL ，洗涤沉淀，12000×3M离心。干燥沉淀后加石蜡消化液 400UL ...

质粒提取过程参照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit进行。（1） 用无菌牙签挑取平板上白色单菌落(5~10个)分别接种至3-5ml LB培养液(Amp )中200rpm培养14~16小时；（2） 室温下，10000g离心1分钟收菌；（3） 加入溶液I 250μl，涡旋重悬菌体；（4） 加入溶液II 250μl，温和倒转4~6次混匀，室温放置2分钟（5） 加入35 ...

总RNA（total RNA）和信使RNA(mRNA)的抽提（自己的总结）1、实验目的提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件，2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂，3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇，5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini KitCat.no ...

1980年底Gordon等人首次将克隆的基因注入小鼠受精卵原核，然后移植于假孕的母鼠输卵管培育出第1个转基因动物。这种将外源性基因用实验方法插入动物生殖细胞的基因组而获得具有插入基因特性，并能正常繁衍的动物称为转基因动物 ( transgenicanimals)。转基因技术是生物学领域最新重大进展之一，已能渗透到生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域。转基因动物已成为探讨基因调控机理、致癌基因作用和 ...

一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。二、 选择正确的酶不言而喻，选择的 ...

基因是染色体上具有一定座位的遗传单位，是DNA分子中一定长度的核苷酸序列。植物的生长发育是在多种代谢和生理过程基础上所发生的基因在时空上表达的综合现象，开发和分离潜在的各种有价值的基因并深入研究其表达机理，对作物品种的改良具有重要意义。因此对植物基因的克隆并发展与之相关的技术已引起人们的日益关注和投入，近年来其研究方法不断改进，新技术不断涌现，这为进一步研究诸如各种调节植物生长发育的基因、逆境与防 ...

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代，许多DNA序列信息仅提供相关基因组的结构和功能. 然而，对基因产物（mRNA和蛋白质）的理解是理解细胞生物学的一个不可缺 ...

随着大规模基因组测序计划的完成，人类又面临一个新的、更加艰辛的科学挑战--蛋白质组学的研究蛋白质组学的研究是一项系统性的多方位的科学探索。其研究内容包括：蛋白质结构、蛋白质分布、蛋白质功能、蛋白质的丰度变化、蛋白质修饰、蛋白质与蛋白质的相互作用、蛋白质与疾病的关联性。目前科学家常用的蛋白质组学的研究手段有质谱分析技术（Mass Spectromotry，MS） 和蛋白质芯片技术（Protein M ...

分子克隆技术通常特指基因克隆（gene cloning）或DNA重组技术（recombinant DNA technology）。基因克隆主要包括：①连接外源基因和克隆载体，构建重组DNA分子，②将重组DNA分子转入受体细胞，使外源基因随受体细胞分裂而得以复制、繁殖。　　一、基因克隆的基本方法　　一个典型的基因克隆实验，主要有以下操作和结果：　　（1）包括有目的基因在内的DNA片断插入另一个DNA ...

测试糖是否被包含在从活细胞内取出的蛋白质中 过去一直使用苯酚-硫酸颜色分析法 但是它的低敏感对现在的生物化学研究而言是不合适的. 现在正在使用的是免疫颜色法(면역착색법) 通过切割羟基邻接的糖得到高活性的醛 或着使用维生素H-straptavidine(스트랩타비딘) 形成的配合物和磷酸酯酶的方法.为分析糖蛋白类型中糖聚合物的结构必须被首先分离糖和蛋白质 这需要化学方法和酶方法. 在化学方法中 可 ...

最近十年 文库及固相化学领域有了爆炸式的发展. 但是 与拥有几百年历史的液相化学相比 固相化学仍是乳臭未干. 尤其是 固相载体上副产物的去除极为困难因而绝大多数固相反应要求99%的产率. 一些反应在以前的液相反应中有90%的满意产率 但为了能在固相反应中应用 还需要重新考虑. 不止是反应 还有新连接方法和树脂上分析技术的发展也是必需的.文库最活跃的应用在于制药工业. 但是 自90年代末以来新催化剂 ...

虽然功能性载体可以直接的与基体化合物连接 为了提高反应效率和剪切的容易程度 一个连接分子被插入在载体和基体分子之间. 连接分子应该被定量的装载在载体上 而且在反应期间直到最后化合物被切下都是稳定的. 连接分子可以分类为保护基团型 无痕型 环化型 安全-捕捉型和光活化型.编码或解码听起来好像是间谍片中的术语. 在文库操作中 编码/解码是非常有用的 甚至可以说是核心部分. 最简单的方法是把一个空间地址 ...

糖文库开始的时间比蛋白质或核酸文库晚很多. 最初 一般认为蛋白质控制了活细胞大部分重要的活动而糖是只是部分参与结构构建和能量储藏. 然而 最近肌醇等糖系列的信号传递分子被发现而且糖的多种功能被揭示之后 糖变成了新的文库候选人.第一个文库由 Daniel Kahne (Science)报道. 他的文库是带有各种取代基的糖结构文库. 也就是说 虽然它是一个糖文库 它是一个与天然糖结构不同的小分子型文库 ...

恰当的选择固相载体和连接分子是固相反应的重要组成部分. 固相载体和连接分子都应该在多种遗传反应过程期间是保持稳定 而且产品的切除应该是在温和的条件下实现. 本章将介绍各种不同的载体和连接分子.如果反应后可以用过滤的方法去除 从理论上讲 任何材料都可用作固相载体. 聚乙烯 聚苯乙烯-外涂聚乙烯薄层 平滑的纸或棉花等都可以. 最常用的载体是: 聚苯乙烯(PS) 聚乙二醇(PEG) Tentagel ( ...

The Merrifield的固相肽合成始于1960年代 在1980年代中期在多种平行固相合成中得到复兴. Geysen 发展了一种利用多针 和标准96孔圆片一次合成96种肽的方法 Houghten 引入了茶袋法. 1990年代早期 提出了单珠单化合物概念 合成了一个高度混合文库结合了子文库和重叠合法(deconvolution). 另一方面 被用作半导体工业中的标准方法的照相平版技术 也被应用于 ...

DNA序列的改变称为突变 这将导致相关蛋白质的序列变化. DNA上特定核苷的取代技术称作基因定位突变法(site directed mutagenesis). 通过病酶动物将突变的基因导入微生物体内即可产生非天然蛋白. 这种方法在研究蛋白质中特定氨基酸的功能上极为有价值. 基因定位突变法Nobel e-Museum与定位突变不同 在PCR中增加Mg2 离子可产生随机点突变; 高盐度降低了DNA聚合 ...