RNA干涉（RNA interference RNAi）作为研究基因功能的一种有效方法已经被全世界范围内的研究者广泛接受。作为基因抑制的一种有力工具，与其他的方法相比，RNAi的操作过程更简单，成功率更高。通过RNAi，你可以实现对特定的mRNA的选择性降解，进而抑制其翻译过程。例如，Eg5是有丝分裂正常进行所必需的蛋白，当用RNAi方法抑制其表达后，在细胞的有丝分裂过程中就会产生不正常的三极纺锤 ...
美国Bartel和Burge实验室预测人类基因组中大约有三分之一负责蛋白质合成的基因是由一类miRNA控制的。这一推断表明，RNA在细胞机制中所起的作用远超出先前的认识。 最早人们认为，基因研究中最重要的对象是DNA和蛋白质，而RNA只起到传送DNA信息的作用。但到2000年，科学家在线虫幼虫体内发现了一类由20多个核苷酸组成的单链微小RNA，并将其命名为miRNA。此后，科学家又发现了mi ...
PCR的发展可以说是从DNA合成酵素的发现缘起。DNA合成酵素最早于1955年发现 (DNA polymerase I) 而较具有实验价值及可得性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现 但由于这个酵素是一种易被热所破坏之酵素 因此不符合一连串的高温连锁反应所需。现今所使用的酵素 (简称 Taq polymerase) 则是于 ...
于哺乳类细胞内使用RNAi（RNA干涉）技术对研究人员来说是十分重大的挑战，其成败受细胞列与RNAi的浓度所左右。为了检验、比较RNAi的序列，研究人员必须持续观察，并将RNAi的纯度、完整性、摄取、以及细胞生存均做到最佳化。 擅长多种尖端领域之产业策略性调查的美国专业公司 Technical Insights Inc. （总公司：纽约），调查分析了RNAi技术的全球性进步后，出版了一本综合 ...
薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。 1．薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。 2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或预制薄层 ...
首先，通过分析患有某种疾病的人群的遗传信息，将这一疾病定位到某一条或几条染色体上。当致病基因限定在染色体的一段区域（或称基因座locus）后，则可对这个区域及其附近的染色体测序，产生几百万碱基的DNA序列。这样一个基因座可能包含数十个不同基因，其中只有一个有可能与疾病相关。通过数据库搜索和基因预测可以提高在基因座上寻找目的基因的效率，但最终还得将其中几个基因表达，进而设计实验来验证究竟哪个基因与疾 ...
蛋白质芯片还面临着诸多挑战，未来的发展重点集中在以下几个方面：（1）建立快速、廉价、高通量的蛋白质表达和纯化方法，高通量制备抗体并定义每种抗体的亲和特异性；第一代蛋白检测芯片将主要依赖于抗体和其他大分子，显然，用这些材料制备复杂的芯片，尤其是规模生产会存在很多实际问题，理想的解决办法是采用化学合成的方法大规模制备抗体。(2) 改进基质材料的表面处理技术以减少蛋白质的非特异性结合。(3) 提高芯片制 ...
（一）吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系：液一固吸附层析是运用较多的一种方法，特别适用于很多中等分子量的样品（分子量小于1，000的低挥发性样品）的分离，尤其是脂溶性成分一一般不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水住化合物等的分离。吸附层析的分离效果，决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性质这三个因素。 1． 吸附剂：常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、聚酰胺、硅藻土等。 （1 ...
（一）聚乙二醇沉淀法质粒ＤＮＡ这里介绍的方法（R.Tresman个人通讯）已卓有成效地用于纯化碱裂解法制备的质粒ＤＮＡ。１）将核酸溶液转入15mlＣorex 管中， 再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液，充分混匀，用Ｓorvall SS34 转头（或与其相当的转头）于４℃下以10 000转/分离心10分钟。LiCl可沉淀高分子ＲＮＡ。２）将上清转移到另一30mlCorex管内，加等量的 ...
序列测定(sequencing)已有50多年的历史，但开始时进展十分缓慢。最初，人们致力于建立蛋白质(proteins)和多肽(peptides)的分离技术，并确定其氨基酸(amino acids)种类及含量。1945以前，没有任何蛋白质序列定量测定的方法。以后十年中，随着色谱技术和标记方法的快速进展，第一个多肽激素(胰岛素)的全序列测定于1955年完成(Ryle等，1955)。五年后，第一个酶( ...
药动学模型是为了定量研究药物体内过程的速度规律而建立的模拟数学模型。常用的有房室模型和消除动力学模型。 （一）房室模型 房室（compartment）是由具有相近的药物转运速率的器官、组织组合而成。同一房室内各部分的药物处于动态平衡。房室仅是按药物转运动力学特征划分的抽象模型，并不代表解剖或生理上的固定结构或成分。同一房室可由不同的器官、组织组成，而同一器官的不同结构或组织，可能分属不同的 ...
组织中总RNA的提取 ↓利用反转录酶合成cDNA ↓PCR反应：反应液组织：反应缓冲液 模板（上述合成的cDNA） 底物（dATPdGTPdCTPdTTP） 引物（爱滋病病毒特异性引物） TaqDNA聚合酶 50μl循环：95℃，30sec（变 ...
（一）细菌培养物的生长 从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)，然后从中纯化质粒，质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体（如pUC系列）都能复制到很高的拷贝数，惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚期，就可以大量提纯质粒。此时，不必造反性地扩增质粒DNA。然而，较长一代的载体(如pBR322)由于不能如此自由地复制，所以需要在得到部 ...
质谱方法(Mass SpectroscopeMS)是通过正确测定蛋白质分子的质量而进行蛋白质分子鉴定、蛋白质分子的修饰和蛋白质分子相互作用的研究。质谱仪通过测定离子化生物分子的质荷比便可得到相关分子的质量。但长期以来，质谱方法仅限于小分子和中等分子的研究，因为要将质谱应用于生物大分子需要将之制备成气相带电分子，然后在真空中物理分解成离子。但如何使蛋白分子经受住离子化过程转成气相带电的离子而又不丧失 ...
1. 用 Trypsin 酶解蛋白质时，碳酸氢氨的浓度应该是多少？ 酶解时碳酸氢氨的浓度一般在 10 ～ 50 mM 之间。碳酸氢氨的作用主要是提供一个碱性的水解环境，因为 Typsin 的活力在 pH8 ～ 9 之间最高。最常用的碳酸氢氨浓度有 20 mM ， 40 mM 。盐浓度过大时，后续的冻干过程中会有较多的盐析出；盐浓度过小时，则不能有效的提供碱性 pH 的水解环境（尤其是在样品的 pH ...
1，用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）：1.取200ul样品数 阴性对照 阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇5.取第3步离心的上清（一定不要 ...
1. 怎样邮寄我的样品？ 冻干的胶或干粉可以直接邮寄。切胶后的湿胶（不用做任何处理），放在 EP 管中 ( 不加任何缓冲液 ) ；用干冰速冻；邮寄时，置样品于足够的干冰中。液体样品的邮寄方式同湿胶一样。 2. 为什么要使用内标？ 用内标做校准可以大大减少 MALDI-MS 的误差（ 3. 我为什么还要提供正负空白胶正对照提供 (exact) 对照两块胶？正负对照的两块胶是用来对整个鉴定过程做质量控 ...
1 ． HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足：解决办法为增加样品量 样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器 检测器衰减太多：调整衰减即可。 检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数 检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。 检测池中有气泡：解决办法为排气。 记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。 流动相流量不 ...
当生物芯片和样品探针杂交完毕后，就需要对杂交结果进行图象采集和分析。一般膜芯片的杂交都用同位素p32、p33作标记，其信号的检测需通过传统的磷光成像系统来完成。而对于用荧光标记的玻璃芯片杂交后的检测，则需要用专门的荧光芯片扫描仪。 1. 磷感屏成像系统Cyclone Storage Phosphor System Cyclone磷屏成像系统为美国Packard公司生产的第一台集高分辨率、高 ...
蛋白质是一切生命活动的基础，受基因表达的调控，因而以检测样品中的mRNA为基础的cDNA芯片是当今研究中倍受关注的研究手段。但是，由于存在着转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等多种调节机制，基因的表达，或者说mRNA的水平并不必然代表蛋白质产物的水平。因此，以微阵列技术对生物样品作整体蛋白质表达分析的蛋白芯片在后基因组时代越来越受重视。抗体芯片（Antibody Microarray，抗体微阵 ...
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