生物化学技术

Southern印迹杂交是由凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色，检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。 Northern印迹杂交由 ...

　　　10×扩增缓冲液 　 10ul　　　4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　模板DNA 　　　 　 0.1～2ug　　 　 Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　Mg2 　　　　　　 1.5mmol/L　　　加双或三蒸水至 　 100ul ...

1、引物 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：　　①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。　　②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。　　③引物碱基：G C ...

糖是生物机体的重要碳源和能源。糖经酵解途径产生的磷酸烯醇式丙酮酸和丙酮酸，以及丙酮酸脱羧后经三羧酸循环形成的α-酮戊二酸、草酰乙酸，它们都可以作为氨基酸的碳架。通过氨基化或转氨基作用形成相应的氨基酸，进而合成蛋白质。此外，由糖分解产生的能量，也可供氨基酸和蛋白质合成之用。蛋白质可以降解形成氨基酸，氨基酸在体内可以转变为糖。许多氨基酸经脱氨后形成丙酮酸、草酰乙酸、α-酮戊二酸等，这些酮酸可通过三羧酸 ...

生物体中的脂类除构成生物膜外，大多以脂肪的形式储存起来。脂肪分解产生甘油和脂肪酸，甘油可转变为丙酮酸，再转变为草酰乙酸及α-酮戊二酸，然后接受氨基而转变为丙氨酸、天冬氨酸及谷氨酸。脂肪酸可以通过β-氧化生成乙酰辅酶A，乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合进入三羧酸循环，可产生α-酮戊二酸和草酰乙酸，进而通过转氨作用生成相应的谷氨酸和天冬氨酸，从而与氨基酸代谢相联系。 但是这种由脂肪酸合成氨基酸碳架结构的 ...

将特定的外源基因构建在植物表达载体中并转入受体植物，并不是植物遗传转化的最终目的。理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达，产生人们期望的表型性状。然而，近二十年的发展历史却表明，外源基因在受体植物内往往会出现表达效率低、表达产物不稳定甚至基因失活或沉默等不良现象，导致转基因植物无法投入实际应用。另外，转基因植物的安全性问题已在许多国家引起人们的关注，例如，转基因有可能随花 ...

糖类和脂类都是以碳氢元素为主的化合物，它们在代谢关系上十分密切。一般来说，在糖供给充足时，糖可大量转变为脂肪贮存起来，导致发胖。糖变为脂肪的大致步骤为：糖经酵解产生磷酸二羟丙酮，磷酸二羟丙酮可以还原为甘油；磷酸二羟丙酮也能继续通过糖酵解途径形成丙酮酸，丙酮酸氧化脱羧后转变成乙酰辅酶A，乙酰辅酶A可用来合成脂肪酸，最后由甘油和脂肪酸合成脂肪。可见甘油三酯的每个碳原子都可以从糖转变而来。如果用含糖类很 ...

亚基分子量亚基数目功能α65 0002与启动子结合β15 0001含催化部位，起催化作用β51 0001与DNA结合ω11 0001 σ70 0001识别起始位点 ...

在转录中新合成的RNA往往是较大的前体分子，需要经过进一步的加工修饰，才转变为具有生物学活性的、成熟的RNA分子，这一过程称为转录后加工。主要包括剪接、剪切和化学修饰。（一） mRNA的加工 在原核生物中转录翻译相随进行，多基因的mRNA生成后，绝大部分直接作为模板去翻译各个 基因所编码的蛋白质，不再需要加工。但真核生物里转录和翻译的时间和空间都不相同，mRNA的合成是在细胞核内，而蛋白质的翻 ...

1． 起始位点的识别RNA的合成不需要引物。体外试验表明，不含σ亚基的核心酶会随机地在一个基因的两条链上启动。当有σ亚基时就会选择正确的起点。RNA聚合酶先与DNA模板上的特殊启动子部位结合，σ因子起着识别DNA分子上的起始信号的作用。DNA分子上的起始信号，即“启动序列”称为启动子。为方便起见，在DNA上使RNA分子开始合成的第一个核苷酸标为 1，它的5′上游标为（-），3′下游标为（ ）。通过 ...

酶名称来 源识别位点EcoRⅠEcoRⅠ -N-C-T-T-A-A↓G-N-5′5′N-G↑A-A-T-T-C-N-BamHⅠBacillus amyloliquefaciensH -N-C-C-T-A-G↓G-N-5′5′N-G↑G-A-T-C-C-N-HindⅡHemophilus influenzaeD -C-A-Pu↓Py-T-G-5′5′G-T-Py↑Pu-A-C-HindⅢ ...

酶类分布产 物α-鹅膏蕈碱对酶的作用分子量反应条件Ⅰ核仁rRNA不抑制500 000～700 000低离子强度，要求Mg2 或Mn2 Ⅱ核质mRNA低浓度抑制～700 000高离子强度Ⅲ核质tRNA 5SrRNA高浓度抑制－高Mn2 浓度 ...

项目DNA聚合酶ⅠDNA聚合酶ⅡDNA聚合酶Ⅲ（复合物）分子结构单链分子单链分子核心酶3个亚基，全酶22个亚基分子量109 000120 000400 000每个细胞所含40010010~205′→3′聚合作用 3′→5′核酸外切酶 5′→3′核酸外切酶 — 模板和引物 完整的双链DNA———具有引物的长单链DNA —全酶 具有缺口(个核苷酸)的双链DNA 核心酶 聚合速度（37℃核 ...

限制性内切酶（restriction endonuclease）也称限制性酶（restriction enzyme），是由W. Arber，H. Smith和D. Nathans等人（1979年）从细菌中分离的一类酶。限制酶具有极高的专一性，识别双链DNA上特定的位点，将两条链都切断，形成粘末端或平末端。限制酶可以用来解剖纤细的DNA分子，在分析染色体结构、制作DNA的限制酶谱、测定较长的DNA序 ...

酶作为生物催化剂和一般催化剂相比，在许多方面是相同的。如用量少而催化效率高。和一般催化剂一样，酶仅能改变化学反应的速度，并不能改变化学反应的平衡点，酶在反应前后本身不发生变化，所以在细胞中相对含量很低的酶在短时间内能催化大量的底物发生变化，体现酶催化的高效性。酶可降低反应的活化能（activation energy），但不改变反应过程中自由能的变化（△G），因而使反应速度加快，缩短反应到达平衡的时 ...

嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值，其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在230nm处为吸收低谷，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定 ...

溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形，开环，超螺旋结构）、蛋白质及其他杂质在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超离心法纯化核酸，或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。应用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。RNA分离常用蔗糖梯度。分离DNA时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大的溶解度。可以制成浓度很高（8mo ...

（一）单纯蛋白酶和结合蛋白酶蛋白质分为简单蛋白质和结合蛋白质两类。同样，按照化学组成，酶也可分为简单蛋白酶（simple proteinases）和结合蛋白酶（conjugated proteases）两大类。如脲酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、核糖核酸酶等一般水解酶都属于简单蛋白酶，这些酶的活性仅仅取决于它们的蛋白质结构，酶只由氨基酸组成，此外不含其它成分。而像转氨酶（transaminases）、 ...

（一）试剂1. 试剂甲：碱性铜试剂溶液中，含0.5N NaOH、10%Na2CO3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜，配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后，最后加入。2. 试剂乙：与前面的基本法相同。临用时加蒸馏水稀释8倍。3. 标准蛋白质溶液：同基本法。（二）操作步骤测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴中保温5 ...

将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料然后将标记后的3 种样品混合 同时在一块胶上进行电泳即为差异凝胶电泳(DIGE) 。所得到的2D 胶图像可使用3 种不同的激发P发射过滤器得到不同颜色荧光信号根据这些信号的比例来判断样品之间蛋白质的差异这样可避免在匹配时出现的误差进行定量分析时也不依赖于胶与胶之间的重复性。用于标记的荧光基团在化学结构上相似分子量也基本相同都带有正电荷所以 ...