蛋白质技术

相关专题 蛋白纯化技术专题 蛋白纯化试剂盒主要是利用蛋白与亲和介质的亲和能力不同达到蛋白分离纯化的目的。蛋白纯化试剂常见的蛋白标签有GST标签、HIS 标签等，本文主要介绍了蛋白纯化试剂盒的原理、His Tag 蛋白纯化方法试剂选择的方法、GST 标签融合蛋白纯化问题分析等。 蛋白抽提试剂盒和蛋白纯化试剂盒用途有什么不同? 蛋白抽提试剂盒是从 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 一、原理 1、E .coli 表达系统 E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-Page 以检测表达蛋白质。 2、外源基因的诱导表达 提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达 ...

相关专题 来自芝加哥大学癌症生物研究所，本·梅癌症研究中心等处的研究人员发明了一种能同时检测大量蛋白的新方法，彻底改变目前我们进行癌症和其它疾病蛋白表达水平检测的技术面貌，这种新方法效果与传统的western blotting一样好，但是时间可以大大缩短，比传统Western Blotting快48倍。这一研究成果公布在《Nature Me ...

相关专题 2011年鄙人做western的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份western blot操作步骤2012版，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献(原谅我无法像Endnote那样一一注明文献出处，只能大概标注出引用的参考 ...

相关专题 主要包括以下 4 个基本步骤：样品制备;电泳分离;蛋白的膜转移;免疫杂交与显色――蛋白检测。 溶液和试剂 1. 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) 2. ModifiedRIPAbuffer：Tris-HCl:50 mM pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ; ...

相关专题 我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常 ...

相关专题 膜蛋白具有多种功能，在细胞识别、细胞信号转导、运输等有着中着重要的角色，因此也是极佳的药物靶点。抽提膜蛋白主要是进行蛋白组分析：常用的实验是非变性胶电泳、酶活分析、SDS-PAGE、western blot等。本文叙述了总蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。 一、从新鲜样品中提取总蛋白(简易法) 1、自配裂解液(pH 8.5-9. ...

相关专题 Thermo Scientific Pierce近日推出了HiPPR去垢剂去除离心柱/离心板，可更快更彻底地从细胞裂解液及其他生物样品中去除去垢剂。这种即用型的产品适用于低浓度的蛋白及多肽样品。HiPPR树脂结合并去除去垢剂，同时很好地回收蛋白及多肽，便于下游的质谱分析。 大家都知道，去垢剂和表面活性剂是制备蛋白和多肽样品时常常 ...

相关专题 它们都是BSA 1、选择应用考马斯亮蓝方法测蛋白质量，做BSA标准曲线步骤时已经测得梯度蛋白量的吸光值。想求助：在excel中怎样做标准曲线。 Q1、很简单的，将蛋白质浓度放在一列，相应的吸光度放在一列，将两列选中后，选择插入图形，选散点图，然后在插入的图形上的点右击选择添加趋势线，并勾选显示公式和R值，即可得到方程式。 Q2、用梯 ...

相关专题 实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通 ...

相关专题 一、原理与方法 PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。 其方法是：在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氢二钠-0. ...

相关专题 研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的 ...

相关专题 7月，最新一期的冷泉港实验手册《Cold Spring Harbor Protocols》发布。按照惯例，有两篇protocol是可以免费阅读的，其中一篇介绍了如何验证蛋白-DNA相互作用的功能重要性。这篇文章节选自《真核生物的转录调控：概念、策略与技术》一书，是由美国加州大学洛杉矶分校（UCLA）的研究人员撰写的。 鉴定与感兴趣 ...

相关专题 几个常用蛋白质分析网站，分享一下! 1.从氨基酸组成辨识蛋白质 ExPASy：http://www.expasy.ch/tools/ PROSEARCH：http://www.embl-heidelberg.de/prs.html 2.预测蛋白质的物理性质：等电点、分子量、酶切特性、疏水性、电荷分布等 ExPASy：http:// ...

相关专题 一、mtt比色法检测细胞活性 (一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 (二)试剂准备 1、青链霉素溶液(100X)：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中抽滤除菌。 2、L1 ...

相关专题 一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较 染色方法灵敏度与质谱的兼容性Silver1- 10ng-Silver (MS compatible)10ng+Comassie G -250 or R-25030ng+Antibody(western blot)1ng- 二、考马斯亮蓝染色 CBB 染色液：0.5%考马斯亮蓝 G250 或 R25 ...

相关专题 一、原理 1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。(G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质) 2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料，因为PPO是带有阳 ...

相关专题 技术起源&发展：iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI 研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素编码的标签，通过特异性标记肽的氨基基团，尔后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含 ...

相关专题 1.目的 了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。 2.原理 外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖)，解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-PAGE或Western-bl ...

相关专题 生物实验中的封闭剂 大家好，这是我最近总结出的有关封闭的一些小知识，收集了一些封闭剂的种类，如何选用封闭剂等等。与大家分享。欢迎大家批评指正。 封闭的原理： 固相载体表面(如ELISA板，NC膜或者PVDF膜上等)有很多洞洞，通过电转或包被，胶上的蛋白被转移到了膜上，或抗原/抗体固定在板上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表 ...