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Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)实验指南及技术总结

ChIP是一项比较流行的研究转录因子( transcription factor TF)与启动子(promoter)相互结合的实验技术。由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法,所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。这个优势是EMSA这个体外研究核酸与蛋白相互结合的实验方法所不能比拟的。当用甲醛处理时,相互靠近的蛋白与蛋白,蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。 ...

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蛋白质组学-质谱分析

Proteomics Primer1. Proteomics2. 2-D PAGE3. Immobilised pH gradients (IPGs)4. Mass spectrometry5. Principles of mass spectrometry6. Matrix assisted laser desorption/ionisation (MALDI)7. Electrospray i ...

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酵母双杂交系统的发展和应用

随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运作与蛋白质之间的互相作用密不可分,例如:DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、修饰和定位以及信息传导等重要的生物过程均涉及到蛋白质复合体的作用。能够发现和验证在生物体中相互作用的蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质是认识它们生物学功能的第一步 ...

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新一代蛋白研究工具——抗体芯片

蛋白组学研究是即基因组学研究后的生命科学发展的一个大方向之一。蛋白质的结构和功能最终直接影响着生命活动的变化,基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化,而真正发挥功能的蛋白要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成,因而对蛋白质的直接研究才能真实的解释各种生命现象。但是目前研究蛋白质的手段和方法还没有很大的发展,所以寻找有效、快捷的蛋白分析技术成为了至关重要的 ...

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蛋白质组研究系统

4700 TOF/TOF蛋白质组分析系统4700TOF/TOF蛋白质组分析系统是全球第一台TOF/TOF 串联飞行质谱仪,它作为目前的最新质谱技术,它一问世即被世界各大蛋白组研究中心和著名蛋白质实验室所争相采用。它由两级TOF和高能碰撞池组成,其工作原理是离子在MALDI源中产生并被加速和聚焦;对于MS/MS 模式可通过第一级TOF选择母离子进入高能碰撞池中碰碎,然后进入第二级TOF重新被加速并被 ...

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Protocol for Protein Extraction for proteomics

Protocol for Protein Extraction10 % w/v TCA/ acetone/ 0.07 % v/v -MercaptoethanolPlant cells are rich in compounds that interfere with the 2DE separation method such as salts organic acids phenolics p ...

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双向电泳--蛋白质鉴定技术全套方案

内容包括以下部分:(一)样品制备与胶内酶切 点击浏览该文件(二)肽指纹谱与肽序列标签 点击浏览该文件(三)数据库检索方法 点击浏览该文件(四)检索结果的综合分析 点击浏览该文件 ...

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功能蛋白质组学研究的有力工具:Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统

原理和应用: Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上,结合了多重荧光分析的方法,在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品,并第一次引入了内标的概念,极 大地提高了结果的准确性,可靠性和重复性。在DIGE技术中,每个蛋白点都有它自己的内标,并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准,保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间 ...

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蛋白组学分析软件一览

蛋白组学分析软件 StartFragment ProtParam 瑞士蛋白质专家分析系统中的子程序,适用于蛋白质序列的物理-化学参数(氨基酸、原子组成,等电点,消光系数等) MultiIdent 瑞士蛋白质专家分析系统中的子程序,适用于通过等电点、分子量、氨基酸组成、序列标签、肽指纹数据等识别蛋白 AACompSim 瑞士蛋白质专家分析系统中的子程序,该程序将登录在Swiss-Prot数据库的蛋白 ...

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蛋白复合体直接酶消化法Direct Enzymatic Digestion of Protein Complexes

Direct Enzymatic Digestion of Protein ComplexesSherry Niessen Ian McLeod and John R. Yates IIIDepartment of Cell Biology The Scripps Research Institute La Jolla California.Excerpted From Protein: Pro ...

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Synthesis and Probing of Membrane-bound Peptide Arrays

Synthesis and Probing of Membrane-bound Peptide ArraysRonald FrankDepartment of Chemical Biology GBF (German Research Center for Biotechnology) 38124 Braunschweig GermanyStefan DubelInstitute for Bio ...

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运用肽库筛选磷酸化激酶motif方法 Screening Kinase Phosphorylation Motifs Using Peptide Libraries

Screening Kinase Phosphorylation Motifs Using Peptide LibrariesIsaac A. Manke and Michael B. YaffeCenter for Cancer Research Massachusetts Institute of Technology Cambridge MAExcerpted From Protein: ...

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蛋白质组学指南

Molecular Biologist's Guide to Proteomics Paul R. Graves1 and Timothy A. J. Haystead1undefined Department of Pharmacology and Cancer Biology Duke University11 and Serenex Inc.2 Durham North Carolina 277102Mi ...

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SELDI-TOF 主题“公园”

关于这个主题想了很久,联想到篮球公园,因拟此题。想了很多方面,总觉得还是大点好,这样可以容纳更多观众与选手,呐喊、助威,才能畅所欲言,充分享受自由的空间,否则就像我们的宿舍一样狭小,大家都不愿意呆,就是回去了,也就是睡觉(不说话,哈哈)SELDI的出现,也就一、两年的事情,现在还没有人去关心他的原创,就像MALDI在它没被大家接受并被证明是蛋白质分析领域强有力的工具之前,没有人关心田中耕一一样。在 ...

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seldi技术介绍

SELDI-ProteinChip表面增强激光解吸离子化-蛋白质芯片系统(surface enhanced laser desorption ionization-proteinchip,SELDI-ProteinChip)是最新发展起来的蛋白质组平台,可分离显影,分析飞摩尔(fmol)级的蛋白质。该系统中,蛋白质芯片表面经过某种化学或生化方式处理(表面增强),使之具备与某一类蛋白特异结合的能力。 ...

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蛋白质微阵列技术

微阵列技术在单个实验中能同时分析数千个参数。捕获分子微点在固体支持物上固定成行列并暴露在含相应结合分子的样品中。基于荧光、化学发光、质谱、放射性或电化学的读出系统能检测每个微点形成的复合物。这些微小化和平行的结合分析高度灵敏,方法的分析能力又能被微阵列基因表达分析所放大。在这些系统中,检测固定的DNA探针的微阵列与互补靶分子的杂交程度。最近在蛋白质微阵列领域中的发展展示了它在酶-底物、DNA-蛋白 ...

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一步法甲醛胶连检测蛋白质相互作用Protein Interactions Captured by Chemical Cross-linking: One-Step Cross-linking with Formaldehyde

INTRODUCTIONThis protocol describes a method for chemical cross-linking of proteins using formaldehyde. With the exception of zero-length cross-linkers formaldehyde has the shortest cross-linking span ...

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蛋白质和多肽MALDI-MS分析方法 General Method for MALDI-MS Analysis of Proteins and Peptides

ABSTRACTFor MALDI-TOF-MS analysis of proteins and peptides samples are cocrystallized with an excess of organic matrix that absorbs at a specific wavelength (usually UV337nm). Typically sinapinic acid ...

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单细胞凝胶电泳标准操作规程(本室SOP)

原理:在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离受到限制,因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。操作步 ...

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蛋白质组实验全套流程方案

蛋白质组实验流程双向电泳的样品的制备样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步,将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法,尽管处理方法多种多样,但都遵循几个基本的原则:1)尽可能的提高样品蛋白的溶解度,抽提最大量的总蛋白,减少蛋白质的损失;2)减少对蛋白质的人为修饰;3)破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作用,并使蛋白质处于完全变性状态。根据这一原则,样品制备需要四种主要的试 ...

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