蛋白质技术

［转载]个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）螺旋网1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。3、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。4、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用

一：公司介绍 武汉明皓生物科技股份有限公司（http://www.moonbiochem.com）坐落于武汉东湖高新技术区光谷生物城, 是由一批在生命科学领域具有相当丰富经验的归国博士及经验丰富的专家共同创办的专业的生物公司。武汉明皓生物始终以“一切以客户为本”为理念，致力于为从事生命科学研究的科研人员提供高质量的化合物，多肽，蛋白及抗体产品以及高效优质的生物技术外包服务。 武汉明皓生物科技股份有限公司重在以高品质高质量为基础，以高满意度的客户服务为立命之本。我们坚信我们良好的发展前景和不断完善的经营模式，会为更多的客户提供更完美的,更贴心的服务。二：我们的专长（1）普通线性肽，链长至120个氨基酸，毫克至克级，纯度可达99%（2）简单修饰肽：免费提供N端乙酰化，末端酰胺化（3）C端：酰胺化（NH2），生物素标记 (用赖氨酸侧链连接)，PEG2(用赖氨酸侧链连接)， C-FITC(用赖氨酸侧链连接)，C-AMC N端：乙酰化（AC），生物素标记（Biotin），脂肪酸修饰(Pal, Myr)，罗丹明标记， N-FITC，N-5

FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求，近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题，引起了社会和业界的广泛关注。为什么一个看似简单的问题，却给众多专业人员带来如此大的困扰？一方面是由于DNA超强的化学稳定性，另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集（吸附）、包裹作用而难以完全除去。DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行比较。1. 离子交换层析DNA带有大量的负电荷，可以被阴离子交换剂吸附而除去（或用阳离子交换剂负吸附）。离子交换层析在生物制品的生产中广泛使用，负载量大、成本低廉，尤其工艺中本身具有这些步骤的情况，不需单独增加去除DNA的步骤，通过控制吸附、洗脱条件，就能取得良好的去除DNA的效果。其缺点是在DNA残留要求较高的情况下难以达到。原因在于，当目标产物与DNA带有同种电荷时，分离较为困难；而当目标产物与DNA带相反电荷时，两者会发生聚集和包裹现象，影响去除效果。2. 鱼精蛋白沉淀鱼

关键词：标准物质 食品成分检测 化学试剂 分析试剂 一、双指示剂甲醛滴定法 1．原理 氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液 时一NH。基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基，并用间接的方法测定氨基酸总量。 2。试剂 ①40％中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40％甲醛中和至淡蓝色。 ②0．1％百里酚酞乙醇溶液。 ③0．1％中性红50％乙醇溶液。 ④O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。 3．操作步骤 移取含氨基酸约20～30 mg的样品溶液2份，分别置于250 mL锥形瓶中，各加50 mL蒸馏水，其中1份加人3滴中性红指示剂，用O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL，摇匀，静置1 min，用O．1mol·L-1，氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。 4．

中肽生化技术系列 Stapled Peptides 杭州中肽有限公司α-螺旋是蛋白二级结构最常见的一种，将其用于药物研发受到了大量关注。多肽的不稳定构象导致易被酶水解以及生物利用率低，这些都可以通过α-螺旋结构构象的稳定化来解决。Hydrocarbonstapled peptides是在特定位点引入化学交联的一种全烃化装订，将迷你蛋白锁定在他们的生物活性的α-螺旋构象中。多肽装订的理念是用于克服两大类治疗试剂的靶向细胞内蛋白相互作用的局限性：小分子和蛋白生物制剂。作为一类新兴的下一代药物，Stapled Peptide应该具备易于合成和容易进入细胞的能力，以及能够多靶标识别的生物活性。有两种构象化策略用于引入和稳定α-螺旋结构，即α双取代（甲基化螺旋骨架）和巨环桥形成（约束构象）。在多肽内装订从而使两个合适的空隔合并：α-甲基化，α-alkenylglycine残基，有确定的立体化学构象和烯烃链长度，然后在树脂上进行钌介导的烯烃复分解反应，从树脂上切割并去保护后便可产生Stapled Peptide。下图显示了在多肽中产生稳定α-螺旋的三种不同的全烃装订类型。α-甲基化和α-alke

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1713522&sty=3&keywords=pHluorin很久前，2004年的一个关于GFP的贴子。经过很多年的发展，荧光蛋白的发展超出想像。大致总结如下：1，普通的绿色荧光蛋白（GFP）；2，增强型的绿色荧光蛋白（EGFP）；Schmitt, M., et al., 2006. Use of PMA1 as a housekeeping biomarker for assessment of toxi ...

重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：Hi ...

08新书：Protein Engineering (Nucleic Acids and Molecular Biology).pdfby Caroline Koehrer, Uttam L. RajBhandarySpringer | 2008-10-21 | ISBN: 3540709371 | 347 pages | PDF | 7,5 MBSite-specific mutagenesis of DNA, developed some thirty years ago, has proven to be one of the most important advanc ...

专注于一站式科研实验服务外包的亿鸣复兴生物科技 ---承接科研课题实验设计，代做实验，数据分析 1. 建DGGE变性梯度凝胶电泳 细菌和真菌多样性分析 2. Western Blot项目 3. SNP项目 4. STR项目 5. Footprinting项目 6. 分子克隆 7. 菌种鉴定 8. 细/真菌等微生物多样性分析 9.QPCR项目 10. 重组慢病毒/腺病毒载体包装 11. 稳定细胞株筛选 12. 全基因合成 等分子生物学方面的实验把珍贵的创意留给自己，把繁琐的实验交给亿鸣复兴！ 周德清 北京亿鸣复兴生物科技有限公司 手机： 1 ...

（一）酵母双杂交系统的基本原理酵母双杂交系统的建立与发展是基于对真核生物转录调控起始过程的认识。真核生物中存在一种上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)，其作用是和激活蛋白结合并大大增加启动子的转录速度，从而在转录水平对靶基因表达进行调控。真核细胞转录起始需要反式转录激活因子的参与。很多真核生物的位点特异性转录激活因子是组件式的，通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异性结 ...

最近在做核酸电泳，感觉自己做的差的要死，羞于见人……无奈之下上上网，到处找找资料咯。话说现在做实验似乎已经变成生活的一部分了，不然我怎么感觉这些实验资料每个看起来都这么像人人、豆瓣上分享的生活小贴士……1、让凝胶电泳变得更快,更漂亮方法改进:将电泳电压进行定时变化,例如可以在开始时将电泳电压调节至 100V,大约 15min, 使条带的确可以因为自身片段大小不同而产生较大差别的泳动速度,从而将片段分离,然而现在的分离 或许会间距较 ...

SOUTHERN BLOT PROTOCOLFollowing electrophoresis and staining of DNA, cut the agarose gel to size by removing the wells at the top of the gel (to prevent buffer transfer through the wells), and any blank or unrelated lanes that do not need to be transferred.UV treat for 5 minutes on the transilluminato ...

暗室实验暗室实验的操作流程：1. 新鲜配制1-2ml工作液（A液与B液1:1或1:40混合配制）2. 进入暗室，在黑暗的条件下，加入1μl未稀释的二抗（HRP连接物）3. 混合后，可立即在暗室中观察到蓝色光暗室实验的注意事项：? 工作液按正确比例混合，且新鲜配制? 在暗室中加入二抗? 直接使用未稀释的二抗? 加入二抗后，立即观察注：暗室实验可同时检测底物是否有活性，以及二抗是否有活性。如果暗室实验结果阴性：更换其它二抗，再次进行检测；再次检测结果仍为 ...

影响电泳分离的主要因素：1. 待分离生物大分子的性质：待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。2. 缓冲液的性质：缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产生影响，溶液pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大，尤其对于蛋白质等两性分子，缓冲液pH还会影响到其电泳方向，当缓冲液p ...

1．目的学习SDS-PAGE的基本操作，学会用SDS-PAGE检测蛋白。2．原理蛋白质在加热变性以后与SDS结合，带上负电荷，在电场的作用下，向正极移动，结果按分子量大小排列在胶板上，含量多的蛋白带纹粗。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式冷冻离心机，制冰机，超声波破碎仪，电磁炉，电泳仪，垂直电泳槽及配套的玻璃和密封条、梳子等。4．试剂SDS（十二烷基磺酸钠），Acr（丙烯 ...

刚刚去BD网站，发现一个优惠活动，送BD绿色荧光蛋白表达载体，原价是6000千元的，赶快贴在这里，大家赶快去要呀，是个好东东！！Free AcGFP green monomer vector while supplies last!Commemorative Promotion: Ten Years in Fluorescent ProteinsDear Researchers,Over the past ten years, your feedback has helped Clontech beco ...

核酸相关技术动画集锦RT-PCR cartoon原文链接：http://www.kexue.com.cn/blog/user_content.aspx?id=13509Southern blot原文链接：http://www.kexue.com.cn/blog/user_content.aspx?id=13468DNA Fingerprinting原文链接：http://www.kexue.com.cn/blog/user_content.asp ...

sds-page电泳主要利用聚丙烯酰胺的分子筛效应分离蛋白质和核酸，SDS-PAG蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质。几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS-PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论：Q：SDS-PAGE电泳的基本原理?A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙 ...

小弟弟一次做电转，完全按照毕氏酵母说明书来，居然没长出来。第二次，按老板出国前留下的做，效果甚好！现贡献出来，望对大家有所帮助！小弟刚做酵母表达，在DXY受益匪浅！看到不少关于酵母电转的PROTOCOL,但基本上是按INVITROGEN上的步骤来的。小弟第一次也是照本宣科，可是没出来，后来又按导师留给小弟的PROTOCOL做了一次，转化效果特好。先将其贡献给大家，希望对大家有所帮助：Yeast Transformati ...

抗体是机体免疫系统为清除“异己”而产生的保护性免疫球蛋白。抗体能特异性识别并结合于抗原蛋白的抗原决定簇（表位）上，并通过一系列手段达到清除抗原的作用。抗原抗体相互识别作用原理常常应用于各种免疫检测方法中，免疫微阵列技术是其中一种高通量的免疫检测分析技术。其原理十分简单，可类比于ELISA反应原理：在固体支撑材料表面将各种不同的探针（抗原蛋白或多肽）固定成阵列，与待测样品（血清、组织液等）中的抗体相互作用，然后借助标 ...