蛋白质技术

～～广～而～ 告～ 之～～本帖后续已转至新版本－－ 【专帖】蛋白版无人应助帖￥￥加分从优，每周更新，请勿跟帖 请战友于新版本阅读应助规则和更新信息 2006-10-20周一至2006-11-26周日 2006-11-29整理总无应1 【求助】为什么用碘染淀粉酶会显紫红色？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=7566374&sty=1&tpg=8&age=02 【求助】如何进行蛋白质定量动态的观察？http://www.dxy. ...

western blot是现在实验技术中较常用但又不好控制的实验技术。近一月，一直在攻克这个高地，目前尚在努力中，有些心得想给大家聊聊。希望对大家的实验有点点帮助。1)蛋白提取和定量：A.组织蛋白提取过程中，匀浆是一个多因素影响的过程，除了根据实验目的要加入各种蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等之外，匀浆操作本身也有讲究。在其他条件都一致的情况下，匀浆操作尽量是一个人进行（手法一致，否则蛋白浓度和含量有差异）。B.所提取的蛋白 ...

做了两个月的western blot，在跑SDS-PAGE中，几乎遇到了各位战友在站内提到的所有问题（比如胶聚合速度过慢，胶聚合不均匀，胶孔漏样，蛋白带笑脸状等等）。虽然SDS-PAGE做了这么多遍，可每次都有不同的问题出现，所以很是佩服自己“创造”问题的能力。在此把这些问题归纳一下，算是总结经验，也算是给总是失败的自己打打气，更是想把这些经验教训与各位战友分享，希望能给斗争在SDS-PAGE中的战友一些启发，也希望实验 ...

我做了半年western blotting了，p53，p15都能做出来，就是做不出来p21和p27.万般无奈，买了CST的9932#cell cycle sample kit，可还是做不出来。上周给CST发了质量投诉报告，老外处理的很积极，5天之内就给我发来了反馈意见。我的操作基本上是按照CST的说明书进行。只有一点不同，我制备蛋白样品的时候用1毫升注射器在冰浴中反复快速抽吸RIPA-细胞悬液，直到液体清亮为止。我没有按说明书上 ...

包涵体的出现可能是很多朋友最头疼和无奈的事情了，我在这里将过去的一些知识和经验总结如下，希望我和大家都能从中受益！如何溶解包涵体http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=720959&sty=3&keywords=%B0%FC%BA%AD%CC%E5http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1877293&sty=3&keywords=%B0%FC%BA%AD ...

这篇配方是我原发在这儿的http://www.dxy.cn/bbs/thread/3193927怕帖子沉了，搜索了一下就开了一个新主题。另有Tricine SDS-PAGE凝胶配方（10％）的配方，有战友需要话我再发出来 。希望用了这个配方的战友如果效果好的话请跟贴说明，效果不好的话，我尽可能帮助战友们分析一下问题，反正这是我实践过的东西，不应该跑步出来的呀^_^另外Tricine SDS-PAGE16.5％是我见过最浓的Trici ...

Difference Gel Electrophoresis (DIGE)即差异凝胶电泳是目前2D领域相当热门的一项技术，可以说它的出现消除了传统双向的一些弊端，使得好多实验室对双向重拾信心:P先简要介绍一下DIGE技术的历史和路线。DIGE技术最早在1997年由Jon Minden实验室提出，后来Amresham成为此项技术的主要推动者，其技术路线是将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料（其中Cy2 作为用Cy3、 ...

双向电泳的第一向IEF 电泳采用IPGphor，实验将变得很简单。IPGphor 包括半导体温控系统(18°C-25°C)和程序化电源(8000V，1.5mA)。可采用普通型胶条槽一步 完成胶条的水化、上样和电泳，大大减少操作步骤。IPGphor 一次可进行12 个胶条槽的电泳(7, 11, 13 ，18 ，24cm)，因采用高电压(8000V)，可缩短聚焦时间。最新推出 的通用型杯上样胶条槽因采用可移动的上样杯和电极，适合任何长度的IPG 胶条，尤其适合极性等电点 ...

花了点时间整理了园内有关考染的帖子，拿出来共享，希望对刚动手做WB的战友有所帮助。12.5％考马斯亮蓝染色液的配制（含30％甲醇，10％乙酸）考马斯亮蓝R250 0.125g甲醇 30ml冰乙酸 10ml加ddH2O至 100ml染胶1h~2h脱色液配制（含30％甲醇，10％乙酸）甲醇 30ml冰乙酸 10ml加dd H2O至 100ml注：1. 染色液可回收利用；室温保存即可；甲醇可以用乙醇代替。2.其它脱色液：（1）用水脱色，但效果非常不好，建议不要用。（2 ...

关于这个主题想了很久，联想到篮球公园，因拟此题。想了很多方面，总觉得还是大点好，这样可以容纳更多观众与选手，呐喊、助威，才能畅所欲言，充分享受自由的空间，否则就像我们的宿舍一样狭小，大家都不愿意呆，就是回去了，也就是睡觉（不说话，哈哈）SELDI的出现，也就一、两年的事情，现在还没有人去关心他的原创，就像MALDI在它没被大家接受并被证明是蛋白质分析领域强有力的工具之前，没有人关心田中耕一一样。在基因组学取得巨大成功之 ...

蛋白质提取与纯化技术　　选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的 ...

http://www.ab-mart.com.cn/content400102.aspx一、样品制备对于Western Blotting实验而言，样品处理是关键步骤之一，获得的蛋白样品必须均质、可溶，并解离成单个多肽亚基，且尽量减少相互间的聚集，使其最终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时，需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器（如核抽提物），或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常样品有重组蛋白、细胞和组织等 ...

【推荐指数】★★★ ★【文章来源】D. Zielinska, F. Gnad, J. Wisniewski, M. Mann. Precision Mapping of an In Vivo N-Glycoproteome Reveals Rigid Topological and Sequence Constraints.Cell, May 28, 2010.http://www.cell.com/abstract/S0092-8674%2810%2900386-7【内容简介】N-连接的糖基化是一种具有重要生物学意义的翻 ...

争做“超离达人” 有奖活动超速离心机是实验室常见的分离纯化工具，密度梯度离心是利用超速离心机分离纯化生物小分子的常用方法，如蛋白、病毒、核糖体、线粒体……现在，您是怎样制备密度梯度液？您是怎样收集样品条带？手工吗？北京五洲东方公司的全自动密度梯度制备和分离系统，能够1min内快速制备6管线性密度梯度，无扰动无层流精确分离样品组分条带，实现密度梯度离心全自动化。带着这个问题，让我们走进“超离达人”有奖活动！本期活动邀请丁香 ...

在园子里看到有好多战友询问有关蛋白保存的问题，自己对于这个问题也一直模模糊糊，今天特意搜集了一下园子里有关蛋白质保存的一些有价值的帖子，希望能给各位战友提供一些方便http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1790263_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4680926_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs ...

WESTERN BLOT 操作1一 裂解细胞提取蛋白.1试剂/溶液裂解液10ml 10% SDS10ml 甘油10ml β-巯基乙醇8ml 0.5M Tris Ph6.81ml 0.1% 溴酚蓝51ml 单蒸水2方法1)将培养的细胞消化离心,数量需达到106,(可用PBS洗一次.)2)重悬细胞于100μl加热得裂解液,搅拌并煮沸5-10分钟,破坏DNA.3)冷却(但不能在冰上,否则SDS会沉淀),离心收集液相.4)振荡混合.5)得到样品.6)样品储存于-20度备用.二 SDS-聚丙酰 ...

选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于 ...

我收集了些资料，希望大家喜欢与传统方式相似，重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异，即以分子的大小，形状，溶解度，等电点，亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。与此相对应的分离纯化方法参见表1。从表1可看出，当前蛋白质的纯化主要是依靠层析和电泳技术。由于重组蛋白在组织和细胞中仍以复杂混合物的形式存在，因此到目前为止还没有一个单独或一整套现成的方法把任何一种蛋白质从复杂的混合物中分离出来，而 ...

General Western Blot ProtocolMany variations exist among protocols for running Western blots. These variations address all aspects of the procedure from the choice of gel buffers and membranes to transfer conditions, blocking and processing steps. The following procedure was wri ...

电泳是蛋白质技术的一个重要方面，也是问题教多的方面，我整理了我们的相关内容，便于解决相关问题！内容较多：(求教）做蛋白质表达差别分析（双向凝胶电泳/MS）的费用（求助）2D胶能用普通的单向垂直电泳装置跑吗？（求助）蛋白电泳**求蛋白质毛细管电泳试剂配方以及各项参数蛋白电泳各带为什么总连成一条线？聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的一些问题中文双向电泳手册【讨论】2D电泳Tricine－SDS-PAGE体系电泳中的问题？2D电泳求助 ...