蛋白质技术

发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology标　题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（一）发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST本文献给YL引子　2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书，书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的 ...

1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS ...

完成《WB实战指南》后，朋友曾央分享点免疫共沉淀方面的咚咚；当时不得不回绝。因为，WB指南是基于这些年的回复的汇总，基本上方方面面的问题都有提及，只需要做些串联；而论及coIP，目前在国内还不太普及，尽管它已经是生化领域最基本的技术之一。因此，再想写这么个长篇颇耗时间，于我的时间和精力太为难；不过，今天是个特殊的日子，凑凑热闹吧。——人，如果在某些方面成功了，必然在另外一面有亏欠，也许这就是上帝的公允吧。——在自己最擅长的 ...

聚乙二醇具有较广的分子量分布，随着平均分子量的不同，性质也产生差异，当分子量小于1000Da时，聚乙二醇是无色无臭粘稠的液体，高分子量的聚乙二醇则是蜡状白色固体，固体聚乙二醇的熔点正比于分子量，逐渐接近67℃的极限。毒性随分子量的增加而减少，小于400Da的 PEG在体内会经乙醇脱氢酶降解成有毒的代谢物，而分子量大于1000 Da的PEG经过多年应用于食品业、化妆品业和制药业证明没有毒性。聚乙二醇分子中含有大量乙氧基， ...

一直以来，园子里一直有很多战友在关于包涵体蛋白的纯化以及透析复性这块存在很多疑问。我从事包涵体蛋白的纯化以及复性这块的时间比较长，有一些经验，希望能与大家一起分享、讨论。大家有什么问题和经验也可以提出来，共同探讨一下。我先把园子里关于包涵体纯化和蛋白复性这块非常有价值的帖子整理出来供广大战友参考。包涵体纯化与复性：色谱柱纯化包涵体包涵体纯化的方法与肝素有亲合力的包涵体的纯化包涵体纯化复性的一篇文章HIS包涵 ...

感谢pinghw，本帖已经锁定，如果有战友继续上传，请到http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2457613&sty=1&tpg=1&age=0跟帖！谢谢大家的积极参与！ 蛋白版的公共邮箱为：dxyprotein@163.com ，大小2G,最大附件30Ｍ。点击此处去邮箱为方便大家上传及下载资料，此邮箱已经开放使用，公共邮箱的设想及初步使用方法的相关内容请参看下帖，欢迎大家多提宝贵意见，谢谢 ...

根据自己的实验体会，总结做好WB的一些心得，与大家分享，不当之处欢迎批评指正。叙述的思路就是围绕着实验的每个步骤展开，这样可能更具体些。1．配胶: 该部分较为重要的是配制凝胶时要充分混匀，此外应保证试剂的新鲜。常出现的问题有：A.凝胶出现花纹：此时应检查原料中过硫酸铵（AP）粉末是否受潮B.凝胶聚合时间较长：聚合时间由AP以及TEMED决定，通常在30min左右，AP不新鲜会导致聚合变慢：此外还需注意环境的温度也很重要， ...

个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配 ...

在蛋白质组学研究中,如果使用高通量方法会得到大量蛋白质数据, 这就需要采用生物信息学的方法进行处理. 这里介绍一篇文章,希望能起到抛砖引玉的作用, 让大家讨论一下还可以用那些方法进行生物信息学处理.在这篇论文中， 应用了合并2种检索， 非标记定量， 相对量比较（normalized and non normalized），GO term 比较， 3种算法的蛋白定位预测比较， 通路分析，蛋白修饰(包括氨基酸修饰，和蛋白降解修饰)。另外在结果表格中还列出信号肽， 跨膜区，以及 ...

由于大型串联质谱的飞速发展， 双向电泳目前已经逐渐让位给其他的各种非胶系统分析手段，但是双向电泳在很长一段时间内仍然会是我们在蛋白质组学领域中不可缺少的一种分析手段。 这个专题希望能够给大家在2D中遇到的一些问题提供一个快速索引，并且共同讨论您在2D中遇到的问题及解决方案！个人进入蛋白质组学领域也有6-7年的时间了， 对于双向电泳技术，从最开始的花篮式电泳到2D-IPG-PAGE， 再到现在的2D-DIGE技术都比较熟悉。 使用 ...

近几天回答了蛋白版几个有关压片和显影的帖子，发现在这一块还没有比较系统的论述。特贡献了western显影常见问题及解决方案，是我的经验总结，以供大家参考。其中绝大部分问题是我所遇到过的，其他个别我没遇到过的是参照pierce公司的说明书。限于字数，语言比较简洁，如对其中内容有疑问或建议可跟帖。Western荧光检测取决于抗原含量—一抗敏感度—二抗敏感度—底物敏感度—显影和定影效率这一系统。我的经历认为确保万无一 ...

最近我们实验室想做这个试验，以前也没有做过，如果有战友做过这个试验，希望介绍点经验和教训，谢谢乐。应战友要求，在网上找乐一下基础资料，方便大家查看，虽然下面也列出了试验方法，但在实际实验室可能并不一样，希望战友们较少些自己的亲身体会，让大家和我本人在即将进行的试验中少走弯路。先谢谢各位了免疫共沉淀　　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用 ...

近来看到好多“熟悉”的问题，不断的被询问。猜测是因为丁香园不断的壮大，好多新的战友不断加入。但是可能大家一时并没有养成搜索的好习惯，于是许多问题不断的被翻出。其中蛋白表达问题是问的最多的，虽然关于这个问题的帖子园子里是汗牛充栋了。建议大家在询问之前能养成搜索的好习惯，毕竟高手们并不是时时都在的。在这里我把关于蛋白表达问题做一个总结。这里的帖子都是含有加分的回答，很有参考价值。普通的帖子没有整理。一、原核蛋白表达问 ...

本帖后续更新临时转移至【公告】蛋白版导读--发帖前必读==暨精华帖分类汇总特此公告友情提示：1．为规范起见，特将专人分类改为专题分类，分导读和专业讨论2种。2．部分专题帖因涉及多个领域被重复归类。3．如有分类建议、分类错误或侵犯 个 人 权 利 请直接pm本人，定将致谢/致歉并即刻修改。【蛋白提取】导读首帖：2005-12-06 菌体/细胞裂解法汇总 专业首帖：2004-05-12 提蛋白酶时，缓冲液中为什么要加入精氨和亚精氨以及苯甲脒【凝胶电泳】导读首帖： ...

2011年鄙人做western的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份western blot操作步骤2012版，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献（原谅我无法像Endnote那样一一注明文献出处，只能大概标注出引用的参考资料），希望对大家有帮助。鄙人按下文的步骤操作已经做出来了稳定可重复的、背景干净的w ...

默克密理博2010年快乐“膜”术师评选活动——只要提交一个漂亮的蛋白印迹图(WB)，即有机会赢取iPOD大奖!　　　活动期间，跟帖发表最新westernblot蛋白印迹图即可参赛，赢得实物奖品，如果投票结果进入六甲，就有机会拿到超炫的 iPod shuffle MP3，快快行动吧！参加投票者都有机会赢得高灵敏度WB显色液和精美小礼品一份！（大奖以实物为准）默克密理博2010年快乐“膜”术师评选活动自2010.10.12启动以来，从“作品提交 ...

蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜（湿式转膜）1）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后，小心取出带有凝胶的玻板，用割胶刀沿下边缘小心撬开短板，按样品的多少切下合适大小的凝胶。浸泡在转膜缓冲液中5分钟左右，以平衡离子强度。视情况决定是否切角标记。 2）电用结束前，应泡好3M滤纸2-6张均可（普通滤纸也可）和1张硝酸纤维素滤膜。 3）戴上手套按如下顺序安装转移装置： a.平放底部电极（阴极），放一张海绵垫片。 b.在海绵垫片上放置1- ...

华中农业大学02年研究生考试试题A华中农业大学02年研究生考试试题A答案华中农业大学02年研究生考试试题B华中农业大学02年研究生考试试题B答案西北农林科技大学02年研究生考试试题及答案中科院1999年生化A、B卷、01生化B卷、02年试题中科院生化与分子生物学试题03/04年广州医学院1998年攻读硕士学位研究生入学考试试生物化学广州医学院2000年攻读硕士研究生入学考试试题中山大学医学院硕士生物化 ...

分享我整理的56邮箱(生物相关，超过4000兆)这些书籍资料来自阿果等论坛，经本人整理，全部奉献给大家，希望大家能喜欢！！邮箱名：zhangjt1234@56.com使用方法:你先申请一个56信箱(去www.56.com申请)，登录后点击“共享资源”，填入zhangjt1234，即可看见我的电子书包括以下文件：网友共享 健与美 2005.12.17 14:13 11328.10Kb网友共享 origin中文版教程 2005.12.16 13:53 5424. ...

请到下面这个贴子处认真学习发贴规范，并改正后归还积分！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=4562313&tpg=1&ppg=1&sty=3QUOTE:基于生物化学的经典宝书《Lehninger Principles of Biochemistry》第二版的电子网站,语言：英文。每章内容包括正文、概要、进一步的阅读参考文献、习题及解答，还包括名词解释镜象站点打包下载QUOTE:Lehnin ...