蛋白质技术

1x 40min - overnight 50% MeOH 12% Acetic Acid 1x 30min ...

Summary WCE Extracts are prepared from strain SHY282 (TFC4-Flag-EE (HpaI)).TFIIIC complex is first purified by flag affinity: TFC4 contains a single copy of the flag epitope.The flag purified TFIIIC i ...

大规模基因组 测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组 序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组 序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组 序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组 时代，许多DNA序列信息仅提供相关基因组 的结构和 ...

1．启动子 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。在转录起始点上游5～10 bp处，有一段由6～8个碱基组成，富含A和T的区域，称为 ...

Procedure A: Preparation of the cell lysate 1.Rinse a 60 mm culture dish of confluent cells with 10 mM Tris-HClPH 7.40.15 M NaCl1 mM MnCl2 and 0.2 mM PMSF. 2.Lyse the cells with 0.5ml cold buffer (1 ...

Before trying this methodtry rapid protein prep which involves boiling yeast in SDS PAGE buffer 1.Grow 100 ml yeast to A600 ~1.0.If the yeast are overgrownuse proportionally less cells for the prep. 2 ...

三级结构主要针对球状蛋白质而言的 是指整条多肽链由二级结构元件构建成的总三维结构，包括一级结构中相距远的肽段之间的几何相互关系骨架和侧链在内的所有原子的空间排列。在球状蛋白质中，侧链基团的定位是根据它们的极性安排的。蛋白质特定的空间构象是由氢键、离子键、偶极与偶极间的相互作用、疏水作用等作用力维持的，疏水作用是主要的作用力。有些蛋白质还涉及到二硫键。 如果蛋白质分子仅由一条多肽链组成，三级结构就是 ...

Contributor: Suprya Jayadev Date: April 111996 1)Weigh out the appropriate amount of DEAE sephadex and place in a 15 ml conical tube. 2)Wash resin three to four times with zenopure water.Mix gel with ...

yhbdxs:实验思路是这样的，将目的基因连接到含有GFP的表达载体上，得到GFP和目的基因的融合蛋白，再纯化。 我现在还没有选定用哪个载体，请你们帮帮我，太多不清楚的地方了。 E.coli:通常在进行原核表达实验时，选择使用pET系列载体居多。但是pET系列载体不带有GFP基因，其上的His Tag标签是专门用于分离纯化的。通常情况下，目的基因与GFP蛋白融合，用于真核表达的实验较多。 yhbd ...

This procedure is used to break cells that contain a protein to be purified.This procedure is valid only for the use on Appling's lab sonicatior. PREPARATION 1.Place your sample in a 15ml elongated p ...

Fusion Protein Isolation 融合蛋白分离纯化 Peter Novick LabDepartment of Cell Biology Yale University School of Medicine http://info.med.yale.edu/cellbio/Novick/Second/Protocols/Fusion.pdf 1.Start a 5 ml overn ...

Bradford quantification of protein concentration Brandford法测定蛋白浓度 http://www.msu.edu/user/delgadoi/192.html Standard Curve m g of standard B ...

关于离子交换层析实验的介绍，对于常用到的层析介质的一些基本技术数据罗列如下： 离子交换介质名称 最高载量 ...

TGEK Base 50 mM Tris 10% vol Glycerol 1 mM EDTA 100 mM KCl (add for std lysis buffer): PMSF Benzamidine Leupeptin Aprotinin 0.5% NP40 (add for solubilization buffer) 1% NP40 0.1% Triton X100 0.1% SDS ...

（一）双缩脲测定法 1．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。 2．试剂配制 硫酸铜（CuSO4 .5H2O） 1.50g 酒石酸钾钠 5.00g H2O 500.0ml 10%氢氧化钠（不含硫酸钠）300ml H2 ...

葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍；最适反应温度提高10～12℃；酶比活相同。据分析，Pro替代Gly138后，可能由于引入了一个吡咯环，该侧链刚好能够填充于G ...

蛋白质一级结构（primary structure) 是指多肽链的氨基酸残基的排列顺序，也是蛋白质最基本的结构。它是由基因上遗传密码的排列顺序所决定的，各种氨基酸按遗传密码的顺序通过肽键连接起来。 每一种蛋白质分子都有自己特有的氨基酸的组成和排列顺序即一级结构，由这种氨基酸排列顺序决定它的特定的空间结构，也就是蛋白质的一级结构决定了蛋白质的二级三级等高级结构，这就是荣获诺贝尔奖的著名的Anfins ...

CATHY'S NO BOIL YEAST EXTRACTS 1.Cells to mid log/ need ~ 5OD.Spin down and wash w/ 1ml H2O 2.Transfer to 1.5ml round bottom screw cap tube 3.add 200μl SDS sample buffer+ (5% BME50mM NaF1mM PMSF)-a ...

To be done the day before: 1.Put meat grinder and accessories in the cold room. 2.Put 6 one-liter centrifuge bottles in the cold room. 3.Put 14 to 16 500 ml Beckman polycarb centrifuge bottles with li ...

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点： 易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学 ...