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功能蛋白质组学研究的有力工具:Ettan DIGE荧光差异蛋

原理和应用: Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上,结合了多重荧光分析的方法,在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品,并第一次引入了内标的概念,极 大地提高了结果的准确性,可靠性和重复性。在DIGE技术中,每个蛋白点都有它自己的内标,并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准,保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于1 ...

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精确鉴定蛋白相互作用,简化下游分析

ProQuest™ Two Hybrid System with GateWay™ Technology基于酵母,用于检测蛋白间相互作用。通过使用三种报告基因和低拷贝数的载体,ProQuest™系统可以得出最低假阳性的可信结果。另外,ProQuest™"诱饵"和"猎物"载体是GateWay™兼容的, ...

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常用的层析分析方法

在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。 一、吸附层析 1、吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。 2、薄层层析 薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相,以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄 ...

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蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组(proteome)。同理,不同细胞在不同生理或病理状态下所表达的蛋白质的种类也 ...

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peptide fingerprint mapping

Polyacrylamide gel electrophoresis is a widely used technique to separate proteins from biological samples.Moreoverthe development of two-dimensional (2D)gel electrophoresis has provided a tool for di ...

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Purification of TFIIA from E. coli

HelveticaGenevaSwissSunSans-Regular" size="2"Linda Warfield Hahn Lab 2003 HelveticaGenevaSwissSunSans-Regular" size="2"Volumes given are for 2L of cells for each subunit (Toa1 and Toa2). Toa1 a ...

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考马斯亮兰法(Bradford法)测定蛋白浓度

(一)实验原理 双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法)是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液 ...

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蛋白浓缩方法

蛋白 浓缩方法基本有: 丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法…… 1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白 质变性。 ...

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质谱兼容的银染

最佳的银染灵敏度和最快的染色速度 SilverQuest™ Silver Staining Kit实验步骤专门设计,确保最快地得到结果的同时保证最好的银染灵敏度和清晰的背景。90分钟内就可以检测到0.3ng蛋白(图1)。 图1 使用SilverQuest™ Sliver Staining Kit得到亚纳克级灵敏度 下面列出的样品在NuPAGE® Novex 4- ...

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亲和层析技术

(一)原理 亲和层析是一种吸附层析,抗原(或抗体)和相应的抗体(或抗原)发生特异性结合,而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原(或抗体)固相化后,就可以使存在液相中的相应抗体(或抗原)选择性地结合在固相载体上,借以与液相中的其他蛋白质分开,达到分离提纯的目的。 此法具有高效、快速、简便等优点。 (二)载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件:①不溶于水,但高度亲水;②惰性物质,非 ...

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蛋白质浓缩提取和细胞裂解产品介绍

主要产品 : 1.蛋白提取试剂盒I(实体组织和细胞总蛋白提取) 2.蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收) 3.核-胞浆蛋白制备试剂盒 4.变性/非变性细胞裂解产物制备试剂盒 5.非变性裂解液 6.变性裂解液 具体介绍: 1.蛋白抽提试剂盒 -I (实体组织和细胞蛋白抽提100 extractions) P1250 50 次提取 286元 100次提取 520元 描述:实体组织如大脑 ...

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Preparation of Affinity Column

Preparation of Affinity Column SEK 5/3/95 1.Add 222.2μl 1M MOPSpH 7.5 to 2ml of 10mg of CREBtide (0.1M MOPS pH 7.5 final concentration). 2.Read OD205OD280 (using 0.1M MOPS buffer as blank) 3.Affi ...

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蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理

蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置 ...

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Protein Precipitation Protocols

TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1)To one volume of protein solutionadd 1/100 vol.of 2% DOC (Na deoxycholatedetergent). 2)Vortex and let sit for 30min at 4ºC. 3)Add 1 ...

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常用核酸和氨基酸代码

常用核酸和氨基酸代码 Amino Acids Table Here is a list of the standard one-letter amino acid codes and their three-letter equivalents. The synonymous codons and their depiction in the IUB codes are shown. You sh ...

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Taq Polymerase Purification

This is a protocol from Engelke et.al.(1990)which was modified by Dr.Baron.The enzyme has been used for RT-PCRgenotyping and cloning. Solutions 1000X IPTG 0.5M IPTG 1.19g IPTG up to 10 ml wih sterile ...

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多肽物质分离与分析方法研究进展

摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法,主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 多肽类化合物广泛存在于自然界中,其中对具有一定生物活性的多肽的研究,一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的,生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现 ...

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DEAE column: FPLC

Contributor: Suprya Jayadev Date: September 211993 Resin preparation: 1)Measure out appropriate volume of resin into a 50 ml conical tube. --> NOTE: 1 ml of DEAE-Sephacel should bind approximately ...

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2-D Polyacrylamide Gel Electrophoresis

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ...

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Preparation of Tonsil Lysate

Purpse The prtcl describes hw t prepare human tnsil lysate fr use in purificatin f ICAM-1LFA-1and PNAd. Materials Safety Equipments Lab Cat Latex Glves Face Mask Bench Paper Fresh human tnsil tissue ...

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