蛋白质技术

随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工 ...

摘要: 采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术对天麻染菌球茎皮层和不染菌的新生球茎皮层进行了比较蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后在分子量12～97 kD、等电点3～10 范围内 每块胶分离到约900 个蛋白质点。对新生球茎中表达量明显增加的5 个蛋白质点用基质辅助激光解吸P电离飞行时间质谱(MALDI2TOF MS) 进行肽质量指纹谱的分析 并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测 初步认为第4 ...

摘要:目的　建立急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱初步观察急性脊髓损伤组织中蛋白质组的变化与差异表达为进一步探讨急性脊髓损伤分子机制奠定了基础。方法　采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白银染显色Image Master图象分析系统分析从胶中选取分离蛋白质点基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS) 分析获取肽质量指纹图谱(PMF) Mascot 软件搜索MSDP、SWISS2PROT数据库鉴 ...

双向凝胶电泳_飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI_H520蛋白质组成分.pdf ...

摘要　目的:研究小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁蛋白质表达图谱及其差异。方法:用固相pH 梯度双向凝胶电泳分离5d. p. c. (days postcoitum) 小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁总蛋白同时分离同龄未交配小鼠子宫内膜总蛋白银染显色PDQuest 2DE 软件分析。结果:图像分析测得三块胶的匹配率达7415 %以上在等电点pI 3～10 、分子量1414～7514kDa 范围内分离得未 ...

背景及目的 抑郁症发病机制不清。结构影像、遗传、神经生化的研究都从不同角度阐述了抑郁症的发病机制，种种证据也显示抑郁症的发病在脑代谢层面是有其器质性基础的，但至今还无明确、统一的结论。蛋白质组学技术为抑郁症发病机制的研究提供了新的手段。本研究通过建立抑郁症的动物模型，利用双向电泳和质谱鉴定技术，分析海马组织差异蛋白质表达，旨在探索抑郁症新的治疗靶点，为建立客观的诊断、治疗、停药指标提供 ...

Hancock Laboratory ，Department of Microbiology and ImmunologyUniversity of British ColumbiaBritish ColumbiaCanada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/methods/PROTEINASSAY.htm (Sandermann and Stromiger.1972.J. ...

(一)蛋白质电泳 1.请参照常规电泳操作. 2.分子量标准: 可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时要注意其优点和缺点: 优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率. 缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力. 购买信息: 中范 ...

结晶紫法活性测定 1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5×105个/ml。接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。接种细胞时须不断摇动细胞悬 ...

GST Protein Prep. Ver.2 1) Grow 50ml of culture in LB or TB +antibiotic o/n at 37_C shaker. 2) Dilute culture in LB or TB +antibiotic 1:10 3 ...

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件以获得最满意的表达效果。事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择――多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因――即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。 作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的 ...

T7Select™ 噬菌体展示系统是Novagen开发的基于T7噬菌体(而非传统的M13)创新的基因发现研究产品。目的序列(C-端)与T7基因10 衣壳蛋白而表达得到的多肽和蛋白即可暴露(展示)与病毒(T7噬菌体)的表面。复制周期短，细胞质蛋白组装，操作和储存方便，超高克隆效率，以及T7噬菌体强大的天然特性使Novagen的T7Select成为替代传统M13系统的更好选择，用于高效文库 ...

Buffers: Lysis Buffer (1 liter) 50 mM NaH2PO4 6.90g NaH2PO4.H2O (MW 137.99g/mol ) 300 mM NaCl(up to 2M)17.54gNaCl(MW 58.44)or 60ml 5M 10 ...

Swelling and Storage 1.Resuspend .2 gm of beads (= 1.0 ml swelled bead volume)in 40 ml of distilled water.Let swell for at least 2 hours. 2.Wash beads twice in (10 ml each wash).Spin in clinical or ta ...

This extraction procedure was developed by the Simmlaboratory and described in Rudolph et al.1999(Anal Biochem 26966-71).It’s a great way to make very concentrated extracts for Western blottinga ...

notes Written (2004-04-16)by Jonathan Sheehan Adapted from Pace and Sholtz1 Purpose When you really need to know the concentration of your urea or guanidinium HCl solutionsuse this method.Especially ...

高分子量标准参照 中分子量标准参物 &n ...

主要特点： · 准确灵敏：BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000μg/ml采用加强方法可检测到5μg/ml；MicroBCA试剂测定范围是0.5-20μg/ml。 · 快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。 · 经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。 · 不受样品 ...

等电聚焦 等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽 ...

1. After electrophoresis of protein gel transfer gel to round staining tray. Add ~200 ml protein gel stain. 2. Microwave for ~45 sec until the s ...