蛋白质技术

relike 如何研究蛋白中的组氨酸残基被磷酸化？现在都有什么手段检测？市面上没有抗磷酸化组氨酸残基的特异性抗体吧？期待战友们的回复。relike 没有人做过吗？我没有检索到相关文献，不知道哪位战友能提供相关资料？多谢！！！！！！！！ningning86 如何研究蛋白中的组氨酸残基被磷酸化？现在都有什么手段检测？可以用western的方法，检测磷酸化和总蛋白，然后做比值。还可以用组织化学染色的方法，对磷酸化的蛋白进行染色。当然，这 ...

bigqi 我正在做一个蛋白的研究，多篇文章提到它可以作用于NRG，有NRG 1，有NRG beta 1.我搞不清楚到底beta 1属于那种NRG。我查了综述，是将NRG分为1、2、3、4的，没有找到NRG beta，请问beta＝2吗？还是beta 1＝1 beta？感觉都不太像。当然也可能是看的太快，又是英文的综述，漏掉了作者的解释。NRG不是我要研究的内容，不想花更多时间了，请问能否有人可以帮我，我就想知道我的蛋白可以作用于几个NRG。bigqi ...

yangcroom 请问大家，用western检测肿瘤细胞的 nf-kb p65表达时用的转膜条件是什么？多少V多少分钟？一抗二抗孵多久？我用的是中杉分装的nf-kb p65的抗体。还要注意些什么？yangcroom 顶一下！shichong 100v2h,一抗4°过夜，二抗1hyangcroom 谢谢 shichong ，我准备提总蛋白做的NF-KB，这样能做出来吗？同学转膜用15V30min做MMP-9也做出来了的，请问下转膜的条件和抗体有关吗？ ...

haohuaiyong 各位战友，最近我在做磷酸化STAT3的检测，用cell signaling公司的磷酸化检测抗体与总STAT3抗体做WB，实验组（bFGF+EGF）与阳性对照的磷酸化水平是有增加的，但总STAT3在实验组是减少的而在对照组是强表达的，我看别人的文献都是将总STAT3作为阳性内参一样，应该是不变化的啊，为什么我做了好多次都是不均一的啊？实在是搞不明白，请做过这方面的战友帮忙!谢谢！dzhzh 你的灌注胶 ...

wssydzjj 想用chip on chip筛选一个非受体酪氨酸蛋白激酶作用分子是否可行？SHIIHS CHIP-on-chip筛选与蛋白分子作用的DNA序列daikey_xie 我有CHIP-on-chip的资料，需要的话可以给你。daikey_xie@yahoo.cn本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

narcissus27 在一篇文献里看到下面这句话：当Ca离子从内质网中被释放入细胞质后会激活内质网附近的一种Ca 依赖性的半胱氨酸蛋白酶即Ca 调蛋白分解酶，此酶可以作用其底物Bax，Bid，caspase一12等而导致细胞凋亡。我没查到这是什么酶，求教各位战友。限制条件：1.可被Ca离子激活2.是半胱氨酸蛋白酶3.其底物是Bax，Bid，caspase-12shqling 符合限制条件的酶之一为Calpain，calpai ...

——轻松获得高质量 western blot 条带图

多肽知识汇总

背景：真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比，染色质免疫沉淀技术（CHIP）能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。原理：是在活细胞状态下以甲醛固定蛋白质－DNA复合物，超声将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后加入目的蛋白抗体，通过抗体沉 ...

【嘉美生物】北京嘉美生物就eBioscience公司的产品 （#00-5523 Foxp3 staining buffer set使用方法，也适用于胞浆和核内抗原的同时检测）浅谈流式核内蛋白染色步骤：1、染表面抗体按说明书条件孵育全血样品孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素（按厂家说明操作）溶血完毕。2、用2ml预冷流式染色缓冲液（Flow Cytometry Staining Buffer）洗涤细胞300-400g离心5分钟，去上清。3、用3倍体 ...

多肽是由复杂分子组成的化合物，每一条序列都有其独特的化学和物理属性。除了有些多肽难于合成，大多数多肽相对容易合成，但是纯化可能较困难。很多肽水溶性较差，因此在纯化时，这些疏水性多肽常常需要溶解在有机溶剂或者特定的缓冲溶液中。这些有机溶剂或者缓冲溶液有时并不适合生物学等方面的实验，所以就不能用这些多肽进行研究工作。因此，在合成多肽时，我们会对这些多肽序列进行分析，以确定是否难以合成或水溶性的问题。针对一些有着特殊 ...

这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻璃匀浆器、高速离心机、分光光度仪、—20℃低温冰箱、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床。试剂：单去污剂裂解液、0 ...

样品处理及保存（极为重要）1、悬浮细胞样品：把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。 ...

琼脂糖凝胶的制备1、 取5×TBE 缓冲液20ml 加水至200ml,配制成0.5×TBE 稀释缓冲液,待用。2、 胶液的制备：称取0.4g 琼脂糖,置于200ml 锥形瓶中,加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液,放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。3、 胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏(宽约1cm)紧密封住。将封好 ...

琼脂糖电泳步骤之超级基础篇----对论坛的一些帖子和个人的看法做个汇总，欢迎大家多多指正。一、电泳前准备准备内容作用1.刷干净电泳制胶的梳子，板子，槽子，蒸馏水洗净晾干防止不必要的重复污染，减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。2.检查电泳槽，根据情况更换buffer排除电泳槽的电极接触不良，确保buffer的缓冲能力，减少污染。3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录达到较好的分离效果，防止样过快跑出胶或 ...

下载帐号密码见以下链接：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=4513198&sty=2丁香园生化与分子生物学FTP资源列表(9 folders, 0 files, 0 bytes, 9.71 GB in total.)├─软件(3 folders, 6 files, 32.18 MB, 49.30 MB in total.)├─常见分子生物学参考书(3 folders, 6 files, 46.86 MB, 1.10 GB in total.)│?│?蛋白质技术手册.pdf5.94 MB│?│?Molcular ...

I. 2D电泳操作手册BIORAD英文版BIORAD中文版Amersham英文版Amersham中文版Amersham的DIGE工作手册Dr. Gorg英文版双向电泳手册中文版（感谢国家生物医学分析中心于景华老师提供）Trouble shooting部分Dr.Gorg's trouble shootingAmersham Biosciences公司的关于“2D workshop troubleshooting”的Powerpoint材料 ...

本帖姐妹篇：【原创】蛋白质纯化武器－设备篇（欢迎补充）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=3&keywords=%B4%BF%BB%AF%CE%E4%C6%F7（这篇小文可是上过丁香园的头版哦，还曾给配了个好看的图片，感谢）【资源】蛋白质纯化武器－资料篇（欢迎补充）http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17703087条条大路通罗马，纯化之路千万 ...

～～～热烈欢迎GE公司於莉女士光临蛋白版～～～通过我版热心战友baiy引荐，我们有幸邀请到GE公司专门从事蛋白质科学研究的於莉女士光临蛋白版进行专题讲座。在此丁香园蛋白质技术讨论版全体版主代表蛋白版会员对于於莉女士的到来表示热烈的欢迎，并对於莉女士带给我们的精彩的讲座致以由衷的谢意。本次讲座将开设两帖：1. 本帖： 於莉女士将在本帖进行讲座； 广大战友可以在本帖跟贴提问。2. 答疑贴： 我们将定期收集整理战友提问统一开贴，於莉女士将 ...

【资源】蛋白质技术讨论版资源共享—常用蛋白技术电子图书 1分共享主要资源：1.蛋白质纯化与鉴定实验指南2.蛋白质电泳实验技术3.蛋白质技术手册4.抗体技术实验指南5.2D electrophoresis & 2D workshop troubleshooting6.Protein Purification Protocols 2nd ed7.Pichia Protocols8.Proteome Analysis--uploaded by hosea5分共享主要资源： ...