蛋白质技术

Comments: T antigen (131-259)is an MBP-Hisx6-fusion protein constructed by Laura Mizoue (refer to the wisdom page for details on the construct). i.Pick a single colony from freshly transformed cells ( ...

Adapted from W.C.CopelandProtein Exp.& Purif 9(1997)1-9 and Schneideret.al.JBC 273:34 (1998)21608-21615. Obtained from Fanning lab and revised by LSM7/23/01 Obtained cell stock of BL21(DE3)cells c ...

Comments: pSV281 RPA70AB Constructed by L.Mizoue; May '02.This plasmid encodes RPA 70 subunit residues 181-422 as a fusion protein with an NT 6His tag.The tag can be cleaved off with TEV protease (rec ...

J.MoviusKCoachmanand S.Hahn (Hahn Lab) last modified 10/9/00 Induction of BRF in bacteria and purification on Ni-NTA agarose Transform BRF plasmid into strain BL21 DE3 (pLysS)or JM25 (DE3 containing t ...

Materials Expression plasmid (e.g.pET/Ncd in BL21(DE3)pLysS host cells) ZB = 10 g NZ-Amine A 5 g NaCl 860 ml final volume 10X M9 Salts = 1 g NH4Cl 3 g KH2PO4 6 g Na2HPO4 100 ml final volume M9ZB = 86 ...

George P.Smith Division of Biological Sciences Tucker Hall (573)882-3344 Introduction to B-PER B-PER from Pierce Chemical Co.is a Tris-buffered detergent formulation that lyses bacterial cells without ...

一、目的要求1.学习电泳原理和技术2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术二、原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(N，N，N，N—tetramethy ...

等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点 ...

载体两性电解质必备的条件：1. 可溶性要好，为了保证等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移，载体两性电解质必须具有很好的溶解性能。2. 紫外吸收低，不发荧光。由于制备分离时，检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度，因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低。3. 在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。4 ...

主要仪器试剂仪器：微型电泳系统、电源、注射器、固定和染色用容器试剂：丙稀酰胺、双－丙稀酰胺、载体两性电解质、尿素、过硫酸胺、TEMED、TritonX－100、2－巯基乙醇、溴酚蓝、磷酸、氢氧化钠、氯化钾、三氯乙酸、考马斯亮蓝、甲醇、乙酸。　　储存液：1）30％（w/v）丙稀酰胺，1％（w/v）双－丙稀酰胺；2）20％Triton X100；3）10％三氯乙酸；4）1％三氯乙酸；5）1％溴酚蓝；6 ...

如果要进行天然等电聚焦电泳，要做一些修改：1. 胶过程中配的凝胶中不需要加尿素；2. 上样缓冲液（2×）5ml：其中1.8ml水，200ul载体两性电解质（同制胶成分），3ml甘油，上样时候于等体积样品混匀，10000×g离心5敏即可上样；3. 室温下电泳，接好电极，恒压下先200V电泳1.5h，再400V电泳1.5h。 ...

等电聚焦有以下几点需要注意： 1. 等电聚焦后可用一根染色的细线（0.1mm）标出染料前沿的位置；2. 不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别，使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异，若要获得最好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌；3. 通常，窄范围的pH梯度可以提高分辨率，但是需要时间也比较常，pH梯度范围为2是较好的选择；4. 由于电源和凝胶冷却系统的限制，最长的 ...

固相pH梯度等电聚焦是80年代建立起来的一种等电聚焦技术，其所用的介质是一些具有弱酸或弱碱性质的丙稀酰胺衍生物，它们于丙稀酰胺和甲叉双丙稀酰胺有相似的聚合行为。固定化电解质一端的双键可以在聚合中共价结合到聚丙烯酰胺介质中，其另一端的R集团为弱酸或弱碱，可在聚合物中形成弱酸或弱碱的缓冲体系，利用缓冲体系滴定终点附近 ...

固相pH梯度的优缺点　　固相pH梯度可窄至pH0.1的范围，因此分辨率极高，可达0.001pH；pH梯度稳定，不漂移；灵活性大，可随意选择pH梯度和斜率；重复性好；加样容量大；样品中盐的干扰小；对碱性蛋白质也能很好的分离，无边缘效应，故可用很窄的胶条（如5mm宽）聚焦，特别适合于双向电泳的第一相，但固相pH梯度灌胶技术复杂，只能使用聚丙烯酰胺凝胶，电泳时候需要高电压，电泳时间长，窄范围pH测定困难 ...

摘　要:　综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法 主要包括高效液相色谱法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 ...

用蛋白质快速层析系统(FPLC)的几种层析技术对啤酒中的含氮化合物组成进行了研究。利用Suprose6/Superose12体积排阻柱对啤酒经透析得到的蛋白质成分分析表明 啤酒多肤物质的分子量范围分布相对较广 包括不连续分布的高分子量组分万(30万、50万)、分子量6万、4万的中分子组分和分子量在5000----2万连续分布的低分子量组分。又对分子量大于4万和界于4----6万的组分进行了进一步离 ...

本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。

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Hahn Lab last modified 9/30/98 1. In microfuge tubes spin down 0.1 ml of uninduced cells grown to near saturation or 0.15 ml of IPTG induced cells. Remove YT (or LB) media with a pipetman or drawn out ...

Preparation of PAGE gels. 1. Clean glass plates with ethanol and assemble casting stand see Biorad instruction manual 2. Mix solutions for lower gel in order shown ie. TEMED last and pour into plates ...