蛋白质技术

一、蛋白质分离的一般程序 蛋白质的种类、性质、所处体系以及蛋白质分离纯化的目的不同，因此，不可能有一个固定的程序适用于各类蛋白质的分离工作。但这并不意味着蛋白质的分离纯化没有一定的规律实际上多数分离纯化工作中都有相类似的步骤与手段。蛋白质分离纯化的一般程序： 生物体组织细胞→破碎→离心→盐析、等电点沉淀→凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析和高效液相层析。 二、 ...

双向电泳IEF (sigma) IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的. IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了(推荐六一的，买进口电泳槽的钱留出来测搞出的差异蛋白质的序列吧） BIO－RAD 的圆盘电泳槽，国产的不推荐，因为上槽Bi ...

【实验目的】 1.掌握聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的基本原理 2.学习用等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的操作和方法 【实验原理】 等电聚焦法是一种特殊的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。它的特点是在凝胶柱中加入两性电解质载体-Ampholine，从而使凝胶柱上产生pH梯度。当向两性载体凝胶施加电场时，即可形成pH梯度，pH梯度的顺序是从阳极到阴极pH值逐渐增大。 蛋白质为两性电解质，其所带电荷的性质和数量随 ...

【实验目的】 1.掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2.学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术，用于分离蛋白质。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为支持物的一种电泳形式。单体-丙烯酰胺和交联剂-甲叉双丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺，该聚合反应以TEMED作为催化剂，以APS 作为引发剂。 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的比例可决定凝胶网孔的大小，交联剂所占比重越大，凝胶的网 ...

【实验目的】 1.掌握SDS—聚丙烯酰胺电泳法的原理。 2.学会用此种方法测定蛋白质的分子量。 【实验原理】 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。SDS与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。SDS&mda ...

【原理】 以醋酸纤维薄膜为支持物，用缓冲液润湿后，将微量血清样品点于膜上，再在电泳槽中进行电泳，可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带，将薄膜置于染色液中，使蛋白质固定并染色后，可看到清晰色带，也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定，再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。 在正常情况下，这些蛋白质各占一定的百分比，在某些病理情况下， ...

葡聚糖凝胶柱使用及注意事项 1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。 2 Sephadex LH20 的原理。 Seph ...

本文由生物秀根据华东理工大学生物工程学院的酶工程课件整理而成 一、实验流程 二、实验安排 第1次 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、 装离子交换柱 第2次 测酶活、定蛋白离子交换层析 层析样品进行浓缩、透析 第3次 浓缩、透析前、后样品测活、定蛋白 装分子筛柱 第4次 分子筛层析，并对收集样品进行测活、定蛋白等 第5次 对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析，并绘出分离纯化表 三、实验操作 第1次： 菌 ...

1.原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。 ...

一、目的： 1．学习SDS—PAGE测定蛋白质分子量的基本原理。 2．掌握垂直板型电泳的基本操作技术。 二、原理： 由实验十五中已知，蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。 1967年，Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS）， ...

This method uses carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)rather than fluorescein isothiocyanateresulting in more reliable labeling.Succinimidyl esters are excellent reagents for amine modification ...

Day 0 and 1 Materials 1.0.5 mM ATP0.2 mM CaCl22 mM Tris-HClpH 8.0 at 4℃250 ml for day 0. 2.100 mM KCl100 mM boric acidpH 8.4 at 4℃10 ml. 3.0.5 mM ATP2 mM MgCl2100 mM KCl2 mM DTT2 mM PIPESpH 7.01000 ml ...

Day 0 and 1 Materials 1.0.5 mM ATP0.2 mM CaCl21 mM PIPESpH 6.8 at 4℃250 ml for day 0. 2.0.5 mM ATP0.2 mM CaCl270 mM KCl150 mM PIPESpH 7.01 ml. 3.16 mM ATP0.2 mM CaCl25 mM DTT5 mM lysine10 mM glutamic ...

Day 0 and 1 Materials 1.0.5 mM ATP0.2 mM CaCl22 mM Tris-HClpH 8.0 at 4℃250 ml for day 0 and 1000 ml for day 1. 2.100 mM KCl100 mM boric acidpH 8.4 at 4℃10 ml. 3.IATR (tetramethylrhodamine iodoacetamid ...

Day 0 and 1 Materials 1.0.5 mM ATP0.2 mM CaCl22 mM Tris-HClpH 8.0 at 4℃250 ml for day 0. 2.0.5 mM ATP2 mM MgCl2100 mM boric acidpH 8.3 at 4℃10 ml. 3.N-(1-pyrene)iodoacetamide (Molecular probes P-29m.w ...

Day 1-2 Materials 1.0.5 M KCl10 mM HEPESpH 7.54℃250 ml. 2.0.5 M KCl50 mM HEPESpH 8.04℃250 ml. 3.Bio-Beads SM-2 in a 0.7x15 column. 4.20 mM KCl20 mM PIPESpH 7.04℃250 ml. 5.IATR (tetramethylrhodamine io ...

Day 1 Materials 1.50 mM KCl0.2 mM EGTA2 mM ATP2 mM MgCl210 mM HEPESpH 7.0.Need 500 ml. Procedure 1.Thaw appropriate volume of frozen gizzard myosin to obtain 10-20 mg. 2.Centrifuge in a SS34 rotor at ...

Materials 1.Small vial and stir bar. 2.Bio-Beads SM-2 in 0.7x15 cm column. 3.2 mM Tris-HClpH 8.54℃250 ml. 4.Centricon-30 concentrator. 5.5 mM Tris-acetate0.1 mM DTTpH 6.954℃250 ml. 6.200 mM K-boratepH ...

Materials 1.200 mM K-boratepH 9.010 ml. 2.100 mM lysine100 mM K-boratepH 9.01 ml aliquots stored at -20℃. 3.2 mM Tris-HClpH 8.54℃250 ml. 4.100 mM DTT stock. 5.Centricon-30 concentrator. 6.5 mM Tris-ac ...

Materials 1.Drop frozen 2x cycled tubulin in a polymerization-promoting buffer.Stored at -80℃ 2.GTP100 mM stocktitrate to pH ~7.Need 2 ml. 3.Waterbathset at 37℃ 4.SS34 rotor5 ml and 15 ml tubes and ad ...