蛋白质技术

相关专题 一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。二、实验原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动;当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动;蛋白质在特定电 ...

相关专题 一、原理：蛋白质分子在一定的PH条件下，由于基团解离而带有一定的电荷，在含有缓冲液的醋酸纤维薄膜上，受电场作用而以一定的速度向一定的方向移动。不同的蛋白质分子，由于所带的电荷不同，移动的方向或速度不同，从而达到分离。 二、材料与试剂：电泳仪、醋酸纤维薄膜、PH8.6巴比妥缓冲液(称取10.30g巴比妥1.84g，溶于1000ml蒸 ...

相关专题 近日，安捷伦科技公司发布了安捷伦 2200 TapeStation自动化电泳系统，实现新一代测序流程中样品和文库质量控制的自动化。2200 TapeStation配合预包装的即用型 ScreenTape 试剂耗材，能够简化和加快新一代测序工作流程中的质量控制。 安捷伦液相分离业务部副总裁 Patrick Kaltenbach 称： ...

相关专题 用常规的凝胶回收试剂盒(Gel Extraction Kit)来回收琼脂糖凝胶电泳里的DNA条带可谓最简便易行的实验室操作之一。只要割胶，加入溶胶Buffer保温溶胶，上柱离心，清洗一次，最后洗脱就可以了。不过如果实验偶尔需要跑聚丙烯酰胺PAGE胶，回收DNA可就麻烦多了。电洗脱?要多麻烦就有多麻烦，回收率还低----PAGE上样 ...

相关专题 RNA提取 【实验目的】 掌握总RNA变性胶电泳的原理和方法。 【实验原理】 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0-1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。如需快速检测提取总 ...

相关专题 现在，聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已经成为实验室的最常规实验了。不过可别小看了这个实验，它比核酸电泳可复杂多了，需要准备的试剂多，耗时也长，而且每一次跑出来结果可能都不一样。有时只是为了补一张漂亮的电泳图片，却花了好几天时间，横 竖还是不满意。这时，你就可以考虑一下预制胶了。 蛋白专家Pierce公司推出了与多种电泳槽兼容的Pr ...

相关专题 想要得到一张条带清晰、没有杂带、背景干净的图片，还是具有一定挑战性的。常遇到没有条带、背景过高等问题，没关系，请看本文的问题解答。 Question:我的结果是膜上一片空白，为什么呢? A:导致这种结果的因素很多。 胶和膜放反了：如果在转印的过程中，胶和膜的位置颠倒了，那么蛋白就从胶上转移到缓冲液中，而不会到达膜上。对于标准的转印 ...

相关专题 Western Blot技术专题 1981 年美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)发明了蛋白质印迹(western blot)。但是接下来二十多年的时间，Western blot 的步骤一直都没有什么大的改变，大家还是沿用分子克隆上的技术和试剂。直到近几年，一些新技术新产品的不断涌现，使得Western blot ...

相关专题 Western Blot技术专题 做了五个月的western blot ，有一点点小心得，给新手点经验. 蛋白提取： 1. 总蛋白提取(胞膜，胞浆，胞核)： 组织匀浆后15000g 4度 20分钟后取上清. Buffer:NP40 750ul 脱氧胆酸钠0.5克 SDS 0.1克 加undefinedPBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4 ...

相关专题 生命科学领域发生的革命性变化，对生命活动的研究正在从传统的还原式研究转向了整体性的研究——以基因组学(功能基因组学)和蛋白质组学为基础的系统生物学。其中蛋白质组学包括表达蛋白质组学(expression proteomics)、结构蛋白质组学(structural proteomics)和功能基因组学(functional pro ...

相关专题 重组DNA技术工具酶限制性核酸内切酶产品选择专题 实验目的 1. 学会DNA限制性内切酶酶切技术。 2. 琼脂糖凝胶电泳法观察酶切DNA的结果。 实验原理 质粒pUC118上有限制性内切酶BamHI的识别序列G↓GATCC，用BamHI酶切后形成线性质粒DNA。琼脂糖凝胶电泳可以按酶切产物分子量的大小分离DNA片段，小片段 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 一、实验目的 1.通过对DNA的酶切，学会设计构建体外重组DNA分子; 2.根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶; 3.掌握DNA的酶切技术。 二、实验原理 限制性内切酶是从细菌中分离出来的一种能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，目前已从多种细菌中分离出超过400种，识别各自不同的核苷酸顺序，这一顺序大多 ...

相关专题 等点聚焦电泳主要是依据不同的蛋白质分子等电点不同而对蛋白质进行分离的技术。本文主要等点聚焦电泳中对电聚焦的优缺点、等点聚焦原理、仪器与试剂、两性电解质、密度梯度等电点聚焦等方面进行描述。 一、电聚焦的优缺点： 电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时 ...

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株(品系)。例如，从Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindII、HindIII，HpaI ...

相关专题 学生物的人对琼脂、琼脂糖这两个词一定都不会陌生。不过它们是同一样东西抑或有所差别呢?我想不少人都会犯迷糊了。没关系，且听我细细讲来。 首先，琼脂和琼脂糖不光中文叫法有点区别，它们的英文名字也是不同的。先来说说琼脂，它的英文名为agar。这个词来源于马来语的agar-agar，意思是胶状物。而琼脂糖的英文名为agarose，天然琼脂 ...

相关专题 PAGE胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳）主要是以PAGE为介质，根据DNA分子大小和电荷分离DNA分子。PAGE胶电泳采用银染法进行显色。银染的原理：一、银离子（一般是AgNO3)和DNA结合;二、还原剂甲醛把Ag+还原成银颗粒，最终DNA呈现为黑褐色。 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根 ...

相关专题 RNA电泳包括非变性和变性凝胶电泳两种，非变性电泳可以分离不同分子量大小的RNA，由于RNA分子具有二级和三级结构，这些结构会影响电泳结果，所以分变性电泳无法确定其分子量，而只有在变性的条件性，RNA分子才能完全伸展开。 一、实验目的 学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。 二、实验原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测 ...

相关专题 本文总结了金普泰质粒提取纯化试剂盒的使用步骤，可以根据提取的规模和质量要求选择适合实验的的纯化试剂盒。 金普泰生物柱离心式去内毒素超纯质粒小量抽提试剂盒说明书： wash A wash B和wash C: 用前按照试剂 瓶上标明的量分别加入分析纯异丙纯或95%的分析纯乙醇，充分混匀，用后盖紧盖子。 用1ml ddH2O (灭菌)完 ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）实验方法总汇 非变性凝胶电泳也称为天然凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用与变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性.最主要的有以下几点: 1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS而变性凝胶的有SDS. 2 ...

相关专题 SDS-PAGE电泳主要利用聚丙烯酰胺的分子筛效应分离蛋白质和核酸，SDS-PAG蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质。 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS-PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一 ...