蛋白质技术

相关专题 用于检测重组DNA，也可分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段。用于基因诊断，也可验证检测片段的分子量大小。将基因组DNA经限制性内切酶酶切，进行琼脂糖电泳，把分离后定位在凝胶上的不同分子量的DNA经碱变性处理，将凝胶中变性的DNA转移至一固相支持滤膜。利用标记的某一DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的DNA发生同源 ...

相关专题 蛋白质的检测与分析――western blot 操作步骤 一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western(西)印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶 ...

相关专题 1. 30%储备胶溶液： 丙烯酰胺(Acr) 29.0g　　　　　　　　　　　亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1.0g　 混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。 2. 4×分离胶缓冲液(1mol/L Tris-HCl PH 8.8) Tris 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 8.8，定容至100ml ...

相关专题 Western免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗 ...

相关专题 在电流的作用下，使蛋白质从胶转移至固相载体(膜)上。膜的选择：印迹中常用的固相材料有NC膜、DBM、DDT、尼龙膜、PVDF等。我们选用PVDF(聚偏二氟乙烯)，其具有更好的蛋白吸附、物理强度，以及具有更好的化学兼容性。 有两种规格：Immobilon-P(0.45um)和Immobilon-PSQ(0.2um for MW A ...

相关专题 要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上，这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vacuum transfer) 与电 ...

相关专题 主要包括以下 4 个基本步骤：样品制备；电泳分离；蛋白的膜转移；免疫杂交与显色――蛋白检测。 溶液和试剂 1. 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) 2. ModifiedRIPAbuffer：Tris-HCl:50 mM pH 7.4； NP-40: 1%；Na-deoxycholate: 0.25%；NaCl: 150 mM；EDTA ...

相关专题 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 &NBSp; 方法一、化学发光检测 试剂及其配制： 洗膜缓冲液：100mmol Maleic acid 150mmol NaCl 0.3%(v/v) Tween20 pH 7.5 Maleic acid缓冲液：100mmol Maleic acid 150mmol NaCl pH 7.5 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 探针准备 DIG标记的RNA探针与DNA探针相比，显示较强的杂交信号和较地的非特异性背景，因此，只要可能选用RNA探针可以比DNA探针获得更好的杂交结果。如果必须使用DNA探针，建议使用高SDS杂交缓冲液或DIG Easy Hyb以减少背景。 在正式杂交试验之前，优化杂交探针浓度是避免颜色 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide) A. 地高辛标记的体外转录 试剂及其配制(试剂盒提供)： 10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5) 10mmol ATP 10mmol CTP 10mmol GTP 6.5m ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 A.质粒DNA的小量提取 试剂及其配制 含AP的LB液体培养基 TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0) 1mmol/L EDTA (pH 8.0) 溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0) 10mmol/L EDTA 50mmol/L 葡萄糖 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 A. 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板，其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子，同时，为了获得理想的Northern杂交试验结果，载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体，以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用的这类载体有：pGEM-3/pG ...

相关专题 二、RNA质量检测 提取的RNA需要对其质量和数量进行检测。实验室常用的方法有紫外吸收值检测和电泳检测两种。 方法一、紫外吸收检测 试剂：TE ( 10mmol/L Tris 1mmol/LEDTA)。 dH2O 试验程序 1.预热紫外分光光度计10～20min.。 2.取两个1ml的狭缝石英杯，一个装入1mlTE溶液作为空白校正 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 方法一、改良异硫氰酸胍提取法 试剂及其配制 异硫氰酸胍变性液： 贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理) 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备 ...

相关专题 探针的原理及其应用Northern Blotting技术专题 Northern 杂交是RNA定量测定的一种检测方法，主要利用碱基配对原则，利用特性的DNA探针与其杂交，经过显影技术分析RNA的量和大小。 Northern 杂交的原理 Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 RNA isolation Harvest Cells when they are about 80-85% confluent. Stationary phase cells have decreased RNA yield. Wash cells with warm PBS and s ...

相关专题 在western blotting 方面，本文绝对是一个新手，目前正准备磷酸化蛋白的Western，急需这方面的实验技术操作步骤和一些注意事项的指导。在网络上搜集整理了一个western blot实验达人的建议，供大家参考。 我做了很久的western blot，尤其是phospho-抗体，可以算是达人了。我根据自己的经验，对磷酸 ...

相关专题 Western是利用抗体检测蛋白常用的方法，本手册旨在表明Western-blot的技术原理、操作步骤及常见问题分析，可采用以下步骤进行Western-blot实验： Western-blot技术原理： Western Blot技术是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相 ...

相关专题 本期主题为“水稻基因组DNA的 Southern杂交与非放射性ECL直接核酸标记及检测”，主要是满足初学者对Southern杂交的了解。 Southern杂交的新手们不妨参考下。 【实验目的】 通过本实验学习和掌握Southern转膜、辣根过氧化物酶直接标记探针、Southern杂交及增强化学发光(ECL)检测分子杂交结果的过程。 ...