蛋白质技术

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相关专题 蛋白激酶将磷酸基团从ATP转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明，真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性，包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。此外，异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。在评估磷酸化时，选择的方法可能会有所不同，这取决于 ...

相关专题 不同的蛋白质分离纯化的方法不同，但蛋白质分离纯化的操作步骤基本类似，那么如何进行细菌蛋白的提取呢？这里总结细菌蛋白的提取的实验试剂、操作步骤以及一些注意事项。 实验试剂 采用T7• Tag Affinity Purification Kit T7•Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1. ...

相关专题 Folin—酚法蛋白质含量测定法是最为灵敏的方法，但其试剂也不容易配制。本实验的主要目的是掌握分光光度计的使用方法，学习Folin—酚法测定血清蛋白的含量。 一、目的 1、学习分光光度计的原理和使用方法。 2、学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 3、进一步掌握比色法或分光光度法，准确测定未知样品。 二、原理 蛋白质浓 ...

相关专题 蛋白marker产品选择指南 条带模糊： 电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。 电泳缓冲液陈旧，建议使用新鲜的电泳缓冲液，为了获得理想的结果建议在使用前将缓冲液预冷。 分离胶的浓度偏低，建议使用合适的胶浓度。 SDS-PAGE凝胶放置时间过长，建议使用新配制的凝胶电泳。 带型不整 ...

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 一、限制性内切酶对DNA消化的方案 1.限制性内切酶反应在灭菌的0.5ml离心管中进行。 2. 20μl体积反应体系如下： DNA 0.2-1 μg 10×酶切buffer 2.0 μl 限制性内切酶 1-2 u(单位) 加ddH2O 至 20 μl 限制性内切酶最后加入，轻轻混 ...

相关专题 纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。本文主要介绍了纸层析法分离鉴定氨基酸的实验原理、器材和具体操作步骤。 纸层析法 一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成 ...

相关专题 蛋白质在PH等于等电点时，溶解度最小。本文主要介绍了利用沉淀实验测定蛋白质等电点的实验原理、器材、试剂和具体操作步骤。 蛋白质PH位于等电点时溶解度最低 一、蛋白质等电点的测定 1、目的 (1)了解蛋白质的两性解离性质。 (2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶 ...

相关专题 印迹(blotting)是生物学实验中常用的检测和分析方法。印迹(blotting)实验的过程可以简单描述为将待检测的生物大分子经电泳等方法分离后转移并固定在膜(如：硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜)上，然后用特异性识别物质(如探针)去识别，最后经显色反应(同位素放射自显影、荧光、化学发光等)在膜上显示出结果------印迹。 最 ...

相关专题 Western Blot技术专题 1.制胶及上样： (1)配制12%SDS-PAGE分离胶，混匀后注入边条厚度为2mm的两块洁净玻璃板间，其上加一薄层异丙醇，室温下静置至凝固。 (2)待分离胶完全聚合后，倾去其上的水层，以吸水纸吸净残余液体，插入加样梳，缓缓加入浓缩胶，使其充满加样梳间的空隙，室温下静置。待胶完全聚合。 ...

相关专题 Western Blot技术专题LOWRY法蛋白定量专题 A. Folin-phenol(lowry method)定量法 此法以Biuret方法反应为基础发展而起，因此会严重干扰Biuret测定方法的因子都会影响此测定法的准确度。这些干扰因子包括：含-CS-NH2，-CH2-NH2，-CRH-NH2，-CH2-NH-CHNH2-C ...

相关专题 Western杂交时，为确认蛋白是否转至PVDF膜上，可用下列方法对膜上蛋白进行可逆性染色。 1. 氨基黑染色 染液：0.5% Amido Black (w/v) 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid. 染色：将PVDF膜置于染液中染色数钟，ddH2O 脱色。 2. 考马氏亮蓝染色 染 ...

相关专题 1.确定抗生素作用的最佳浓度：不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。 ① 提前24 小时在96 孔板或24 孔板中接种细胞8 孔，接种量以第二天长成25%单层为宜，置CO2 孵箱中37℃培养过夜。 ② 将培养液换成含抗生素的培养基， 抗生素浓度按梯度递增0(50 10 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 1. 取RNA 2. 将电泳槽和板，梳齿浸泡在3%H2O2中20-30分钟，并吹干 3. 跑1%琼脂糖凝胶，检测样本RNA含量 4. 变性胶 在桌面上利用保险膜铺出一块干净的区域，将1.95g 琼脂糖加入110ml 的 DEPC-H2O (加热前可在三角瓶上做一个记号，在加热后把蒸发的水分 ...

相关专题 western blot中膜的选择是实验成功的关键点，Western blot实验中一般可以选择硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么区别呢？怎样才能选择最恰当的杂交膜进行Western blot实验呢？ NC膜 PVDF膜 尼龙膜的特点 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC ...

相关专题 蛋白Marker可分为：一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的 ...

相关专题 Western免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下western blot技术: 一、原理 二、 分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECLiii.底 ...

相关专题 问：我现在在养细胞，然后收细胞抽蛋白以及提RNA用，我想先多收点细胞冻着。想问一下怎样收集细胞，有具体的流程吗? 我是这样做的： 1、将细胞消化吹打后转移至离心管离心 2、倒去上清，加1 mlPBS打匀后转移至1.5 ml EP管 3、离心12000 rpm 2 min (不知道大家这里用多少转速，有讲究吗?) 4、倒去上清，我是 ...

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相关专题 生物实验中的封闭剂 杂交膜上有很多非特异性的蛋白质结合位点，为防止这些位点与抗体结合引起非特异的染色和背景，一般用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点来降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和 ...