蛋白质技术

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相关专题 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的?预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗?电泳1-2小时再加结合反应产物吗? 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂提高分辨率不加任何物质一般30-60分钟后加样电泳. 2. 银染的步骤是什么?银染的关键因素是什么? 步骤是: (1) 固定:10%冰乙酸30min. (2) ...

相关专题 非变性2D-PAGE:两向均在非变性条件下进行这样分离的蛋白质点的等电点和表观分子量同生理条件下获得的这些蛋白的值是一样的; 非变性/SDS-2D-PAGE:第一向采用非变性IEF之后在2%SDS溶液中平衡;第二向也在SDS存在的条件下进行.适于分析非共价键连接的蛋白-蛋白间的相互作用. 非变性/还原/SDS-2D-PAGE:非变 ...

相关专题 误区：凝胶试剂总是修饰我的蛋白 事实：NuPAGE® 凝胶试剂实际上保护了您的蛋白 更中性pH是关键 tris-甘氨酸凝胶系统的根本缺点是样品制备过程中的蛋白降解。在使用pH 6.8的tris-甘氨酸样品缓冲液时，样品在缓冲液中加热，因tris-甘氨酸的负温度系数导致pH值下降。这最终导致蛋白水解。 NuPAGE® 凝胶试剂通过维 ...

相关专题 引物设计 电泳中的引物问题 1) 使用3%的Agarose凝胶电泳分析合成的引物，发现有很多条泳带，为什么? 对引物进行电泳一定要使用变性PAGE电泳。由于引物是单链DNA，容易形成复杂的立体结构，因此进行Agarose电泳时，容易出现多条泳带，更无法用Agarose电泳进行定量了。 2)能否根据引物电泳后EB染色后条带的亮度对合成 ...

相关专题 1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳(管柱状)为第一向，SDS-PAGE为第二向(平板)。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋 ...

相关专题 在电场中，推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。F=QE质点的前移同样要受到阻力(F)的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′=6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F=F&prime ...

相关专题 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗？ 一般情况下是可以的。但当上样量特别大时，可能会有一部分蛋白质没有被胶条吸收，这样跑完 1D 和 2D ...

相关专题 一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。二、实验原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动;当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动;蛋白质在特定电 ...

相关专题 一、原理：蛋白质分子在一定的PH条件下，由于基团解离而带有一定的电荷，在含有缓冲液的醋酸纤维薄膜上，受电场作用而以一定的速度向一定的方向移动。不同的蛋白质分子，由于所带的电荷不同，移动的方向或速度不同，从而达到分离。 二、材料与试剂：电泳仪、醋酸纤维薄膜、PH8.6巴比妥缓冲液(称取10.30g巴比妥1.84g，溶于1000ml蒸 ...

相关专题 近日，安捷伦科技公司发布了安捷伦 2200 TapeStation自动化电泳系统，实现新一代测序流程中样品和文库质量控制的自动化。2200 TapeStation配合预包装的即用型 ScreenTape 试剂耗材，能够简化和加快新一代测序工作流程中的质量控制。 安捷伦液相分离业务部副总裁 Patrick Kaltenbach 称： ...

相关专题 DNA连接与转化 实验目的： 1.掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。 2.掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。 3.掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。 基本原理 限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶(水解磷酸二酯键)。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。通常所指的 ...

相关专题 用常规的凝胶回收试剂盒(Gel Extraction Kit)来回收琼脂糖凝胶电泳里的DNA条带可谓最简便易行的实验室操作之一。只要割胶，加入溶胶Buffer保温溶胶，上柱离心，清洗一次，最后洗脱就可以了。不过如果实验偶尔需要跑聚丙烯酰胺PAGE胶，回收DNA可就麻烦多了。电洗脱?要多麻烦就有多麻烦，回收率还低----PAGE上样 ...

相关专题 一.实验目的 1.掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程 2.学习DNA的限制性酶切的基本技术 3.掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。 二.实验原理 1984 年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA 用作基因探针 ...

相关专题 RNA提取 【实验目的】 掌握总RNA变性胶电泳的原理和方法。 【实验原理】 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0-1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。如需快速检测提取总 ...

相关专题 现在，聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已经成为实验室的最常规实验了。不过可别小看了这个实验，它比核酸电泳可复杂多了，需要准备的试剂多，耗时也长，而且每一次跑出来结果可能都不一样。有时只是为了补一张漂亮的电泳图片，却花了好几天时间，横 竖还是不满意。这时，你就可以考虑一下预制胶了。 蛋白专家Pierce公司推出了与多种电泳槽兼容的Pr ...

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相关专题 想要得到一张条带清晰、没有杂带、背景干净的图片，还是具有一定挑战性的。常遇到没有条带、背景过高等问题，没关系，请看本文的问题解答。 Question:我的结果是膜上一片空白，为什么呢? A:导致这种结果的因素很多。 胶和膜放反了：如果在转印的过程中，胶和膜的位置颠倒了，那么蛋白就从胶上转移到缓冲液中，而不会到达膜上。对于标准的转印 ...

相关专题 Western Blot技术专题 1981 年美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)发明了蛋白质印迹(western blot)。但是接下来二十多年的时间，Western blot 的步骤一直都没有什么大的改变，大家还是沿用分子克隆上的技术和试剂。直到近几年，一些新技术新产品的不断涌现，使得Western blot ...