蛋白质技术

相关专题 网友分享了他在从2005年第一次见到抗体到2010年间五年western blot的实验经历。五年里，太多的磨难，太多的惊喜，太多的感触，太多的代价，让其对于western blot实验有了独到深刻的见识. 1、抗体的选择 　 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单，买进口抗体 ...

相关专题 要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上，这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vacuum transfer) 与电 ...

相关专题 主要包括以下 4 个基本步骤：样品制备；电泳分离；蛋白的膜转移；免疫杂交与显色――蛋白检测。 溶液和试剂 1. 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) 2. ModifiedRIPAbuffer：Tris-HCl:50 mM pH 7.4； NP-40: 1%；Na-deoxycholate: 0.25%；NaCl: 150 mM；EDTA ...

相关专题 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 I. Electrophoresis clean gel box with NaOH and/or SDS 2 hours to overnight rinse with water prepare Agarose gel solution 1 x MOPS H2O to 95 % of ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 方法一、化学发光检测 试剂及其配制： 洗膜缓冲液：100mmol Maleic acid 150mmol NaCl 0.3%(v/v) Tween20 pH 7.5 Maleic acid缓冲液：100mmol Maleic acid 150mmol NaCl pH 7.5 封闭液：5 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 探针准备 DIG标记的RNA探针与DNA探针相比，显示较强的杂交信号和较地的非特异性背景，因此，只要可能选用RNA探针可以比DNA探针获得更好的杂交结果。如果必须使用DNA探针，建议使用高SDS杂交缓冲液或DIG Easy Hyb以减少背景。 在正式杂交试验之前，优化杂交探针浓度是避免颜色 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide) A. 地高辛标记的体外转录 试剂及其配制(试剂盒提供)： 10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5) 10mmol ATP 10mmol CTP 10mmol GTP 6.5m ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 A.质粒DNA的小量提取 试剂及其配制 含AP的LB液体培养基 TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0) 1mmol/L EDTA (pH 8.0) 溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0) 10mmol/L EDTA 50mmol/L 葡萄糖 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 A. 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板，其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子，同时，为了获得理想的Northern杂交试验结果，载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体，以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用的这类载体有：pGEM-3/pG ...

相关专题 二、RNA质量检测 提取的RNA需要对其质量和数量进行检测。实验室常用的方法有紫外吸收值检测和电泳检测两种。 方法一、紫外吸收检测 试剂：TE ( 10mmol/L Tris 1mmol/LEDTA)。 dH2O 试验程序 1.预热紫外分光光度计10～20min.。 2.取两个1ml的狭缝石英杯，一个装入1mlTE溶液作为空白校正 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 方法一、改良异硫氰酸胍提取法 试剂及其配制 异硫氰酸胍变性液： 贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理) 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备 ...

相关专题 探针的原理及其应用Northern Blotting技术专题 Northern 杂交是RNA定量测定的一种检测方法，主要利用碱基配对原则，利用特性的DNA探针与其杂交，经过显影技术分析RNA的量和大小。 Northern 杂交的原理 Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本 ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 1.制胶：(1%) 琼脂糖 2.5g 10×Mops缓冲液 25.0ml H2O 192.0ml 2.在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌。 3.取出胶冷却到60℃，于通风柜中加45ml甲醛，混匀。 4.加20μl溴化乙锭，混匀。 5.令胶液再冷却10分钟。 6.将其倒入四面封好的 ...

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相关专题 Northern Blotting技术专题 Abstract: This is the standard and complete Northern blotting protocol including preparation of RNA gel RNA sample and probe hybridization detec ...

相关专题 Northern Blotting技术专题 Prepare glass plates for gel:  Rinse plates with cold water then clean with dishwashing liquid and warm water. Do not scratch plates. Rinse with ...

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