蛋白质技术

发酵是细胞大规模培养技术中最早被人们认识和利用的。发酵技术在医药、轻工、食品、农业、环保等领域中广泛应用。微生物发酵过程大致可以分为四个阶段，即：菌种阶段、种子扩大培养阶段、发酵阶段和提炼阶段。为了获得高水平的生产发酵条件，一般优先考虑的是菌种的选育和基因工程菌的改造。而发酵工艺的优化，则能够进一步提高单位产量水平，因此在生产过程中也十分重要。通常在得到所需要生产发酵的菌株后，经过实验室摇瓶小量发酵水平上的优化，获 ...

跨膜蛋白及药物研发跨膜蛋白作为细胞膜的重要组成部分, 在物质运输、信号转导和细胞间识别等多种细胞功能中发挥着重要作用。其功能异常往往会导致疾病的发生，这使它们成为理想的药物作用靶点。目前以跨膜蛋白为药物靶点占现阶段己知药物靶点的60%以上。而针对抗体药靶点，膜蛋白几乎占90%以上。跨膜蛋白在物质运输、信号转导和细胞间识别等多种细胞功能中发挥重要作用抗原制备尽管有着重大的意义，针对跨膜蛋白的药物开发仍然具有很大的挑 ...

先来看下传统重组蛋白表达系统：传统重组蛋白表达系统应对的挑战：操作流程长：5天-4周时间很多蛋白不能在细胞内成功表达不可以改造目标蛋白以大肠杆菌为代表的原核蛋白表达系统是常用的表达系统，具有表达量高和成本低的优点，但是蛋白质翻译后缺乏加工机制（比如形成二硫键和蛋白糖基化等），且很难保留生物活性。以甲醇毕赤酵母为代表的酵母蛋白表达系统，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近真核生物等优点，但是部分蛋白产品易降解，表 ...

随着不同的基于质谱分析方法的发展，可以研究的蛋白互作网络的范围也在逐渐增加。更重要的是，用于肽和蛋白质定量的新兴方法产生的数据是完整且无偏差的，是研究完整网络或蛋白互作的基本要求。基于数据依赖性采集（Data-dependent acquisition, DDA）易于执行，并能快速评估样本中的物质的数量。除了简单之外，还需要对蛋白质进行鉴定和翻译后修饰。任何蛋白质的生物学特性在动态系统中的已知程度都是极微小的，不断增加 ...

蛋白互作技术蛋白质是生物功能最直接的执行者，虽然一些蛋白质可以独立的完成他的使命，但是大部分的蛋白都是需要一些伴侣分子的协助一起完成任务或者形成复合物之后才能充分发挥他的功能。所以，了解蛋白质与蛋白质之间的相互作用，能够帮助我们更好的了解细胞的生命活性，揭示隐藏在表象下的调控机理。经典的蛋白互作分析研究方法主要包括三个：酵母双杂交、免疫共沉淀、GST-pull down。1. 酵母双杂交技术：主要用来进行互作蛋白的筛选 ...

平行反应监测（ Parallel Reaction Monitor-ing, PRM）是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段（如发生翻译后修饰的肽段）进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术首先利用四级杆质量分析器（如Orbitrap系列）的选择能力，用Q1选择目标肽段的母离子；随后在collision cell中对母离子进行碎裂；最后利用高分辨、高质量精度分析器在二级质谱中检 ...

采用亲和加分子筛两种层析方法就能得到大量高纯度的蛋白样品往往是别人家的实验。到自己手上总会有各种惊喜…今天的主角更加过分，在真正纯化之前就需要我们施展十八般武艺把它从细胞上「拽」下来。没错，它就是膜蛋白…人类基因组中，有大约 30% 的基因编码膜蛋白。当今已批准上市的药物中，有超过 50% 以膜蛋白为靶点，然而目前蛋白质结构数据库 (Protein Data Bank, PDB) 中膜蛋白比例不足 1%。欲了解其功能，必解析其结构。是很多结构生物学家心头的 ...

用蛋白或多肽标签融合于重组蛋白中，进而方便重组蛋白的纯化和检验。小分子标签通常免疫原性较低，且不影响目标蛋白功能而得以保留。但是大分子标签如 GST 因其对目标蛋白的结构和生物活性有所影响，通常需要去除。今天我们就来聊一聊柱上酶切那点事儿~什么是柱上酶切柱上酶切纯化路线是指在吸附了标签蛋白的层析柱上添加蛋白酶进行在位去除标签，具有更加灵活、高效、快速的特点。相比于常规的洗脱后的酶切纯化路线，柱上酶切不仅可以简化酶切后 ...

非标记定量蛋白质组学(Label Free)近年来成为重要的质谱定量方法，按照其原理进行分类，可以分为两类。Spectrum counts类的非标记定量方法，发展比较早，也形成了多种算法进行定量，但是主要的原理都是根据MS2的鉴定结果作为定量的基础，各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量方法的原理是以MS1为基础，计算每个肽段信号在LCMS质谱上的积分，目前Label Free主要的数据分析方法 ...

叫糖的不一定都是甜的，还有可能糟心。别担心，这篇多糖纯化技巧教你的纯化实验也可以带点甜。多糖广泛分布于自然界的多种生物体内，尤其是动物细胞膜，植物细胞壁以及微生物细胞壁中，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，是构成生命体的重要分子基础。根据来源可以被分为动物多糖，植物多糖和微生物多糖三种类型。动物多糖动物多糖常见的有甲壳素、肝素、硫酸软骨素、透明质酸等，也是医学和美容保健界的万金油，在临床研究 ...

定量蛋白质组学分析定量蛋白质组学分析（Quantitative Proteomics）是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白，结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能，同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记（Label）和非标记的（Label Free）定量策略。定量蛋白质组学技术常见的几类主 ...

尿液是血液经肾小球滤过、肾小管和集合管重吸收、排泄及分泌产生的终末代谢产物，其组成、数量与性状的变化携带有泌尿系统疾病发生、发展及预后的各种信息，也可反应机体整体代谢状态，与血清等其它体液样本相比，其获取无创、收集便利，并且蛋白组成相对简单、易于分析。长期以来, 肾脏病及其他泌尿系统疾病的诊断和治疗研究进展缓慢, 鉴别诊断通常只能依靠细微的组织病理学改变, 使得早期诊断、预后追踪以及疗效观察都十分困难. 尿蛋白质组可以为疾病诊断、 ...

概要对于基因工程技术构建的重组蛋白，通常分为可溶性重组蛋白和不溶性重组蛋白，可溶性的重组蛋白一般常常存在于细胞质内、细胞分泌到培养基、分泌到周质间隙中等。不可溶性的蛋白主要是由于表达系统的高效表达，在细胞内形成了包涵体。E.coli是应用最为广泛的重组蛋白质表达系统，但是表达的外源性蛋白多以包涵体的形式存在，为了重新获得生物活性，需要对包涵体蛋白质进行体外变复性操作。蛋白质复性模型根据对蛋白质折叠过程的研究， ...

天然蛋白的特性可以说是迥然有异，每种蛋白都是不一样的烟火，共同特点就是丰度很低，自带丰富的背景杂质，并且没有特异性的纯化方法可寻。然万物皆有共性，我们只需找到他们的共同点就可以求同存异，一切难题也就可以迎刃而解。凡是蛋白质都是氨基酸组成的，氨基酸既是两性电离物质又有多种多样的 R 取代基，那么丰富的氨基酸组成就让不同蛋白质或多或少拥有带电性与疏水性。以上给我们的纯化提供了基础方案：以离子交换层析和疏水层析为核心步骤来 ...

老话说的好，巧妇难为无米之炊，要做好标签蛋白质的纯化实验，首先得选择合适的填料和预装柱，以达到事半功倍的效果。我们今天就来看看 Cytiva 标签蛋白填料的大家族，一起 pick 最适合您蛋白质研究的填料吧！蛋白标签（Protein Tag）所谓蛋白标签（Protein Tag）是指利用 DNA 体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪、和纯化等。常用的标签有His、GST、Strep、MBP、Flag ...

MALDI-TOF-MS最初用于等分试样（1μL或更少）样品的质谱鉴定，用于检查肽的纯度或PMF。大批量的样品测定，往往使用Edman降解法测序或ESI-MS，如四极（Q）-TOF-MS 质谱。做出以上选择的原因，主要是因为MALDI技术进行分析，上样量不能超过0.5μL。这种样品制备方法极大地限制了MALDI技术检测的整体灵敏度，并且还限制了可以分析的肽浓度，因为肽和基质共结晶过程的质量对于检测的灵敏度和准确性都非常重 ...

你是否苦于你纯化的标签蛋白无法达到理想纯度而日夜发愁？是否在换了新的标签后仍不太满意而承受老板们鬼畜般的霹雳大吼？朋友别哭，相信这篇文章可以为你带来纯化高纯度蛋白的新思路。进行蛋白质功能研究的关键在于得到高纯度蛋白。习惯于构建单标签的你想必遇到过杂质太多，蛋白表达量少甚至不稳定的情况。何不根据目的蛋白性质构建双标签蛋白进行两种不同亲和层析柱的纯化？没准会有意想不到的效果。01双标签蛋白助力于目的蛋白的高特 ...

还不知道层析策略的小伙伴们，今天就与小编一起来探寻层析策略的内涵吧！所谓层析策略（简称为 CIPP，是 Capture, Intermediate purification, Polishing 的缩写）就是利用组合层析技术纯化蛋白，帮助您获得合适纯度和产率的纯化路线。层析策略的制定可分为三步：1确定蛋白纯化目标，即纯度要求；2确定稳定的纯化后分析方法；3合理组合层析技术，用最少的步骤实现预期的纯度和收率的平衡。一、抗体纯化圆圈内的步骤 ...

本期要介绍到的是基于MS强度或计数的数据依赖法非标记定量蛋白质组学的蛋白质互作分析。在试验中使用不同的同位素标记（某些情况下等压标记）是一种行之有效的肽和蛋白质定量方法。通常，分析之前，标记样品和未标记样品是混合在一起的，这时可以通过测量相应的峰值强度来直接确定化合物比率。标记大致可以分成这些共价附着在肽上的标记，包括同位素编码的亲和标签、ICAT或iTRAQ、通过酶反应合成（例如通过胰蛋白酶合成18O）或通 ...

免疫组化实验步骤试剂： PV-9000 通用二步法试剂盒 （北京中杉金桥）ZLI-9018 DAB显色试剂盒 （北京中杉金桥）脱蜡至水二甲苯Ⅰ(8min)二甲苯Ⅱ(8min)无水乙醇和二甲苯1:1(5min)无水乙醇(3min)95%乙醇(3min)85%乙醇(3min)75%乙醇(3min)PBS洗3遍二．抗原修复抗原修复液柠檬酸钠0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）PH值6.0。抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。三 ...