PCR技术

热启动PCR 热启动PCR是除了好的引物设计之外，提高PCR特异性最重要的方法之一。尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚合酶在室温仍然有活性。因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。这些非特异性产物一旦形成，就会被有效扩增。在用于引物设计的位点因为遗传元件的定位而受限时，如site-directed突变、表达克隆或用于DNA工 ...

1、引物设计由美国Perkin-elmer公司合成，引物末端标记有生物素。 （1）扩增体系 10×PCR buffer 5μl PCR引物&n ...

多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。此法操作简便， 可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的DNA序列的拷贝，PCR技术虽然问世仅数年时间， 但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域，引起了生物技术发展的一次革命. 目前它在分子克隆， 目的基础检测，遗传病的基因诊断，法医学，考古学等方面得到了广 ...

Designing PCR primers 1.length of individual primers between 18-24 bases. Longer primers (30-35 bp) seem to work in more similar cycling conditions compared with shorter primers and can make multiplex ...

1.DMSO and glycerol Recommended by a number of authors to improve amplification efficiency and specificity of PCR. Howeverin the multiplex reaction these enhancers gave conflicting results.For example ...

1.Introduction Polymerase chain reaction (PCR) has rapidly become one of the most widely used techniques in molecular biology and for good reason: it is a rapid inexpensive and simple means of produci ...

1.protocol (1)collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOH (2)put in boiling H2O for 30 sec (optimum may need to be determined for each type ...

PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量。模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要。模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败。而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等)。除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高模板核酸的产量。 传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS ...

Nature of the Insert The cloning of PCR-amplified fragments into a linear vector is typically a rapid and efficient process. However not all PCR fragments will clone with the same efficiency into the ...

A commonly used PCR buffer includes only KCl Tris and MgCl2 (for examplePerkin Elmer Cetus);a somewhat more complex buffer was previously proposed for multiplex reactions of the DMD gene exons (Chambe ...

Materials: sterile water 10X amplification buffer with 15mM MgCl2 10 mM dNTP 50 μM oligonucleotide primer 1 50 μM oligonucleotide primer 2 5 unit/μl Taq Polymerase template DNA (1 μg genom ...

Polymerase Chain Reaction 1) Add the following to a microfuge tube: 10 ul reaction buffer 1 ul 15 uM forward primer 1 ul 15 uM reverse primer 1 ul template DNA 5 ul 2 mM dNTP 8 ul 25 mM MgCl2 or MgSO4 ...

Software for: Making Restriction Maps Designing PCR primers Assembling fragments detecting SNPs and managing raw sequence data For:GCGMacPCUNIXand on the Web Restriction Mapping -Making restriction ma ...

1、PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2、假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时 ...

PCR技术简介 前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。 何谓PCR 简单的说，PCR就是利用DNA聚合 ...

随着兽医防疫工作重要性的逐步提高，PCR检测技术已被兽医工作者比较广泛认可，已经从实验室研究走进了临床应用阶段。如何提高PCR检测质量，已成为实验室技术人员不可回避的一个问题，它直接影响实验室检测结果的可信度和兽医防疫工作质量。 PCR检测质量的控制是一个系统工程，总体上涉及三个方面：一是试验仪器；二是试验试剂与耗材；三是人员操作。任何一个方面出现问题，都会影响PCR检测质量。 一、试验仪器 PC ...

PCR的假阳性问题深受重视，但PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题。而PCR的假阴性却不同，它涉及了与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂。就临床而言，大三阳检出率低、甚至于GC镜下都很多 ...

PCR的假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了，同时由于造成假阳性的因素相对单一，因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话，那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性，仍然有相当的临床适用价值。但PCR的假阴性在检验工作中仍很严重，并且用些因素经常被人忽略，严重的影响了PCR的使用。可以想象一种假阳性和假阴性都很高的项目，有什么样的诊断价值。 造成PCR假阴 ...

PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 PCR的实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反 ...

早在1958年科学家分离出DNA聚合酶（ polymerase）后，就曾设想利用DNA聚合酶扩增大量DNA片段。但当时由于DNA测序较难，没有核苷酸合成技术及耐热性的DNA聚合酶没有得到分离等原因而没有发展起来。直到1985年，美国的Cetus人类 遗传实验室的年轻科学家Mullis在偶然灵感的启迪下发明了划时代的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称PCR技术- ...