PCR技术

八十年代以来由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其严重的危害性而受到人们高度重视，力争早期诊断和寻求有效治疗是防止其广泛传播的关键所在.聚合酶链反应(PCR)具有敏感、特异和快速的特点，是检测病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具.一、HIV的基因结构　　HIV的基因结构与其它逆转录病毒基本相同，为RNA双分子，其单链RNA分子由9749个核苷酸组成，有3组共9个基因。 ...

什么是LNALNA 是新型的核酸类似物，它包含了2＇-氧4＇ 碳亚甲基连接，这个连接限制了呋喃核糖环的灵活性，因而将其结构锁定成一个刚性的双环模式，因此而提高杂交效率和优越的稳定性。LNA 荧光探针优点：1.增强热稳定性和杂交的特异性对实时定量PCR探针提出LNA化学产品增强双链体的热稳定性，同时加强对目标序列杂交的特异性。因此，由非所需激活的荧光背景将大量减少，从而使信号对背景噪音的比例增大。L ...

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.2、PCR试 ...

常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样品温度要比槽板温度滞后20—30s，加上槽板升降温度较慢(1’C／s)，因此30个循环反应通常需要2～6h，循环时间多浪费在加热和冷却样品过程中，不能满足临床快速诊断的需要。毛细管PCR由于采用导热性远强于塑料管的毛细管作为反应容器，使得样品温度滞后时间小于1s，对于扩增500bp的片段，延伸反应10s就可完成；对于10／A1 ...

这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1．Transwelltrans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。 ...

常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等）在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列 ...

简单说明:transhold染料法PCR master mixReal Time PCR反应液配制（50μl反应体系，染料法）： 使用准备： 引物溶解：先12000rpm离心5分钟，然後用ddH2O溶解成25μM，加水量根据引物合成报告单提供的计算方法计算。配制说明： 按照以下配方，如果推荐引物加样量如加0.2ul的结果不好，可以调整引物使用量。括号里是第二备选加样量和第三备选加样量 ...

由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知所措。 本文就从 ...

关于进化树分析及其相关软件的使用和应用范围 来源：易生物实验 浏览次数：0 网友评论 0 条进化树也称种系树，英文名叫“Phyligenetictree”。对于一个完整的进化树分析需要以下几个步骤：⑴要对所分析的多序列目标进行排列（Toalignsequences）。做ALIGNMENT的软件很多，最经常使用的有CLUSTALX和CL关键词：进化树分析进化树也称种系树，英文名叫“Ph ...

怎样在线做PCR引物设计 来源：易生物实验 浏览次数：0 网友评论 0 条要先对PCR目的序列的长度有个大致估计：关键词：PCR引物设计要先对PCR目的序列的长度有个大致估计：第一步：找到Primer3的站点。你不用记住这个站点，但是要记住“Primer3”这个词，然后打开GOOGLE首页，输入Primer3，跳出来的第一个项目就是了“Primer3 Input 0.4.0 (primer3-w ...

怎样使用凝胶成像系统的定量分析 来源：易生物实验 浏览次数：0 网友评论 0 条快捷指南VolumesQuickGuide，此功能能对任意所选区域进行定量分析此分析可以报告2个结果：相对浓度和绝对浓度（如有浓度标准样品）关键词：凝胶成像系统定量分析快捷指南Volumes Quick Guide，此功能能对任意所选区域进行定量分析此分析可以报告2个结果：相对浓度和绝对浓度（如有浓度标准样品）1 ...

蛋白序列分析软件包ANTHEPROT 4.3中文使用说明 来源：易生物实验 浏览次数：0 网友评论 0 条蛋白序列分析软件包ANTHEPROT4.3是位于法国的蛋白质生物与化学研究院（InstituteofBiologyandChemistryofProteins）用十多年时间开发出的蛋白质研究软件包。软件包包括了蛋白质研究领域所包括的大多数内容关键词：蛋白序列分析软件包ANT ...

问：新买了GelRed，比较贵，打算用节约的方法来使用，也就是把GelRed预混在上样缓冲液里，和样品混合后上样电泳。因此想请教一下有经验的站友：1 假定使用6X上样缓冲液，应该以多大比例混合GelRed？2 预混GelRed的上样缓冲液与核酸样品混合后，需要孵育一段时间还是可以直接上样？3 预混在上样缓冲液中的GelRed是否稳定，是否可以长期存放，以及存放条件是室温，4度还是-20？4 Gel ...

问：实验室最近用gelred代替EB，我是直接把gelred稀释到6X Loading Buffer 中，2ml上样缓冲液加分别加入1微升，2微升--10微升的gelred，同时marker充当样品点样。结果跑出来的条带悲剧了，puc57的条带显示在3000以上，也就是样品跑得慢，marker跑得快！而且跑双marker时，显示的条带也不一致。还试验了另一种方案，做胶时直接把gelred加到溶胶液 ...

传统mRNA差异显示技术（DDRT-PCR）是根据绝大多数真核细胞mRNA3'端具有的多聚腺苷酸尾（polyA）结构，因此可用含oligo（dT）的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNA。该方法的创始人Liang P和Pardee A根据Poly A序列起点前2个碱基除AA外只有12种可能性的特征，设计合成了12种下游引物，称3′-锚定引物，其通式为5'-T1 ...

该网站由University of Tartu Department of Bioinformatics 维护。 Human Allele Database 1.0 Program for finding ancestral and consensus alleles for human SNPs ChipTester 2.0 Program that ...

载体主要有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+多l克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段P/E：启动子/增强子Terms：终止信号加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA ...

PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多 ...

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