PCR技术

17.长链引物为什么出错的几率非常高？答：引物合成时，每一步反应效率都不能达到100%，产生碱基插入，缺失，置换突变的因素客观条件都有一直存在。引物链越长，突变的频率累加起来就越高。研究人员总希望合成的引物万无一失，这种心情可以理解。但是犹如PCR扩增，不可能绝对保证扩增产物中没有突变，引物合成也不可能保证100%正确。要知道，引物合成中发生错误（非人为因素）的频率，比任何高保真高温聚合酶PCR扩 ...

25.用软件设计的引物为什么不管用？答：引物是否好用，能否扩增出您需要的引物，与是否用软件设计没有太多的关系。引物设计有一定的指导意见，软件就是根据这些要求设计而成。不要迷信软件给您设计的引物，软件中一些参数您可能不明白，弄错了反而麻烦。其实，PCR扩增的成败最关键的是反应模板的制备和反应条件的控制。软件设计最大的毛病是，有时判断为该基因没有一段区域满足标准引物的要求。有时，我们需要扩增一段基因片 ...

O. Henegariu N.A. Heerema S.R. Dlouhy G.H. Vance and P.H. Vogt Indiana University Indianapoils IN USA and Heidelberg University Heidelberg Germany 摘要： 多重 PCR 通过在同一个反应中同时完成多个基因的扩增成为临床与基础研究领域中一种简便快捷的筛选检 ...

多重 PCR反应的基本原理 DNA 引物（步骤 1 和 2 ） . 引物的选择遵从简单的规则：引物长度为 18-24bp 或更长， GC 含量为 35%-60% ，退火温度 55 ℃ -58 ℃或更高。长些的引物（如 DMD 基因的引物， 28-30bp ）使反应在更高的退火温度下进行并产生较少的非特 异性产物。使用软件 Primers 1.29( 从 ftp.bio.indiana.edu 下载 ...

多重 PCR反应循环条件的优化延伸温度（步骤 5 ， A-C ） . Figure 2c 展示了当加入相等量 (0.4 μM each) 的四种用于扩增 Y 染色体上不同基因的引物进行多重 PCR 时，用程序 A 和程序 B 扩增得到的结果 (Table 2) ，程序 B 有更高的延伸温度 (72 ℃ ) 和更长的退火和延伸时间。总的来说，用程序 A 对 Y-1 Y-undefined 和 Y-4 的扩增得到了 ...

琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶 琼脂糖 . 长度彼此相差 30�40bp 的多重 PCR 产物在通常使用的 SeaKem 或 NuSieve(FMC BioProducts) 3% 的琼脂糖凝胶可以很好的区分开。在低电场强度下过夜电泳可以优化每个 PCR 产物条带的电泳效果，特别是当 PCR 产物小于 400�500 bp 时。 聚丙烯酰胺凝胶 . 为了分离长度仅差几个 bp 的 PCR 产物（例如微 ...

This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center. The following is a great RT-PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue NIH. H ...

一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多重PCR的主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物，某些遗传病及癌基因的分型鉴定。多种病原 ...

This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center. The following is a great RT-PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue NIH. H ...

George Church Lab Harvard Medical SchoolPCR_protocol.html"http://twod.med.harvard.edu/labgc/estep/longPCR_protocol.htmlEfficient Long PCR results from the use of two polymerases: a non-proofreading po ...

引言 　　聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命，但应用PCR分 离，分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列，这使扩增局限于已知DNA序列。我 们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是，我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的体细胞杂合体中的人DNA。使存留 在杂合子中的人特异区域序列得到分离和鉴定，避免了克隆DNA库和用 ...

引言 　　聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命，但应用PCR分 离，分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列，这使扩增局限于已知DNA序列。我 们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是，我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的体细胞杂合体中的人DNA。使存留 在杂合子中的人特异区域序列得到分离和鉴定，避免了克隆DNA库和用 ...

一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用，掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析，还可用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病诊断，肿瘤机制 ...

临床使用PCR定量检测核酸，由于手工操作多、影响因素多，质量控制比较困难，在增强操作能力和仪器设备的基础上，选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。 一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价 【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值，因此都有拟合好的扩增曲线，通过扩增曲线可以很直观、准确的了解和评判试剂质量的好坏。认真研究扩增曲线图可以看出非常多的问题，基本上可以判定试剂的质 ...

临床使用PCR定量检测核酸，由于手工操作多、影响因素多，质量控制比较困难，在增强操作能力和仪器设备的基础上，选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。 一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价 【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值，因此都有拟合好的扩增曲线，通过扩增曲线可以很直观、准确的了解和评判试剂质量的好坏。认真研究扩增曲线图可以看出非常多的问题，基本上可以判定试剂的质 ...

实验中的一些好习惯加入试剂之前把它混匀一下以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿 ...

仅仅是扩增的方法不同而已一个是普通的PCR一个是RTPCR.如果需要鉴定染色体的DNA序列有无差别或基因突变可以用PCR-SSCP我曾做过这方面的实验检测病人有无基因的点突变同时扩增病人和正常人的基因片段然后做sscp只要有一个核苷酸的区别变性SDS-PAGE后条带就会有很大的区别.而RTPCR-SSCP 检测的是cDNA片段有无区别的实验。需要注意的是SSCP技术通常用到银染显色，silver ...

Two long PCR steps:First round of the nested PCR step of the end point dilution procedure to quantitate the cDNA.First round of the nested PCR step of the limiting dilution step to amplify single temp ...

PCR from Tissue Reference:Klimyuk et.al. 1993 Plant J. 3:493-494 Last updated: 1/27/00 By: Kay Schneitz collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing ...

PCR from Tissue Reference:Klimyuk et.al. 1993 Plant J. 3:493-494 Last updated: 1/27/00 By: Kay Schneitz collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing ...