PCR技术

xiaomao1260 各位战友，小弟刚入行，读文献时看见两种试验方法:减除杂交和表象差异分析法。想各位请教这两种方法的实验原理，基本步骤，和用途。谢谢！freecell 请提供相关名词的英文名称。xiaomao1260 减除杂交subtractive hybridization表象差异分析法representational difference analysisziyunfei 中文翻译是消减杂交，是一种以PPCR subtraction ...

伽利略 检RT PCR测到a mRNA上调6倍，其蛋白上调15倍即蛋白比mRNA上调幅度大得多这说明了什么？a受到转录后调控还是怎么的？小薇宝宝 这很正常，起码趋势是一致的，其中有一些实验误差，也有翻译水平的调控存在伽利略 谢谢啊，如果不考虑实验误差问题，那蛋白比mRNA上调幅度大很多代表了什么，比如蛋白上调了100倍，mRNA只上调10倍。Fasta921 伽利略 wrote:检RT PCR测到a mRNA上调6倍，其蛋白上调15倍即蛋白比m ...

伽利略 假设PCR后6倍，能代表初始量mRNA就是6倍么？有人说能，有人说不能，谁能来解释一下呢？我一直都想不清楚，但是国外文献确实有直接说就是几倍几倍的如果RT PCR不能，那么REAL TIME的能么zhao22840718 在引物设计非常好的情况下，指数扩增时能代表，如果循环数过多，后期就不是指数扩增了，自然就不能代表了。灰度扫描能不能代表真实的倍数，我就不清楚了。real time分析的是指数扩增期，应该能代表。个人看法。伽 ...

skybjp123 转录因子可以用荧光定量PCR测其含量吗？能说明问题吗？谢谢啊～～～xdb86 不能说明问题，因为转录因子不是含量高活性就高。需要用荧光素酶报告基因、EMSA、ChIP等方法研究转录因子。skybjp123 不知道western blot 方法测定转录因子的蛋白含量，拿加药组和未处理组进行含量的对比，来说明药物通过这个转录因子来影响目的物质，这样的设计可以吗？谢谢啊～kidderzhou 我们提供转录因子活性芯片及技 ...

一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施【嘉美生物】亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基化的5一甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的pH值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败，体会如下：(1)亚硫酸氢钠的浓度最好控制在3.0～3.9 mol/L为好，其pH值必须用NaOH精确调整至5.0；(2)修饰时间应 ...

实时定量PCR (qPCR)的优势•实时检测PCR反应过程•精确计算出每个循环的PCR产物量•扩增和检测同时进行•消除后续PCR的干扰在实时定量PCR反应中，杂交探针与插入染料如SYBR Green相比是更好的选择。荧光标记探针可以提高实时定量PCR结果的效率、灵敏度和特异性。而且定量PCR可以在一个反应里同时检测多个目标基因。实时定量PCR的应用•基因表达分析•转基因检测和定量•病原体检测和定量•基因型/ SNP分析•突变 ...

【共享】再次提高移液精度----移液器使用宝典（2）?http://immunotech.dxy.cn/bbs/topic/21509913工欲善其事，必先利其器：你 会 用 “枪” 吗 ？???????????????????????——移液器使用宝典详解一、移液器的工作原理移液器的工作原理是活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液。 在活塞推动下，排出部分空气， 利用大气压吸入液体， 再由活塞推动空气排出液体。 使用移液器时，配合弹簧的伸缩性特点来操作，可以很好地控制移液的速度和力 ...

免疫学实验方法大全： http://www.cau.edu.cn/bwlab/chs/linkpage.htm#protocol2005年新版《分子免疫学》课件 ： http://www.cau.edu.cn/bwlab/chs/download.htm我的邮箱:yanguoliuhen@56.com里的共享资源（资料暴全）：邮箱内具体内容如下：科技词典2002 年Humana Press出版商的反转录-PCR ProtocolsThe Laboratory ...

单抗讨论小组报名帖|\|/|单抗讨论小组日常讨论交流贴|\|/|\|/|单抗讨论小组工作交流与工资贴在单克隆抗体制备中，首先进行的就是抗原的设计与合成，这是制备单抗成功与否的关键。因为产生抗体的特异性与亲合性是与抗原密切相关的，合成的抗原如果可以将所需要的抗原决定簇充分暴露出来，那么机体更容易识别抗原决定簇，从而免疫的动物所产生的抗体自然会在特异性和亲合力上最大程度的与抗原决定簇拟合。所以，在制备单抗的过程中，设计并合 ...

8D这是个非常有意义的讨论，相信对大家的实验有所帮助。如果觉得好，别忘记顶贴，以使更多同学能分享。ELISA相关讨论 文字优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规 ...

题目：Web-based Tools for Vaccine Design出处：作者：Ole Lund1, Morten Nielsen1, Can Kesmir1,2, Jens K. Christensen1, Claus Lundegaard1, Peder Worning1, and Søren Brunak1文献介绍及评论：Computational methods used in vaccine design have been changing drastically in recent years. In classical immunological research results could be recorded by pen and pencil or in a spreadsheet, but new experimental highthroughput methods such as sequencing, DNA arrays, and proteomics have generated a wealth of data that are not ef

说明：1、好花不常开，好景不常在。网络硬盘保存的文件，随时可能失效。因此建议你尽快下载。如失效，不要pm给我。我也没有办法。2、Annual Reviews of Immunology已全部更新。3、如转帖，请注明丁香园freecell提供。Annual Reviews of Immunology 2011年全部内容如下：http://www.annualreviews.org/toc/immunol/29/1已经上传：1-Innate Antifung ...

昨天公司培训，又学了一招，呵呵。确定CUT-OFF值的方法：确定CUT-OFF值的方法一：使用阴性血清测定结果均值的2或3倍作为 阳性判断值：取一定数量（通常较少）的阴性血清样本，使用已建立的酶免疫测定方法或试剂盒测定，如果上述阴性血清样本的吸光度均值为0.05，则该次测定 的阳性判断值为0.10或0.15。例如现有的试剂盒结果的判定以P/N或S/N≥2.1为阳性，其依据即是以阴性参考血清的2倍作为阳性判定值。这种 Cut-off值 ...

1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无R ...

http://www.dxy.cn/bbs/topic/13023971这个贴上的内容是n年前找的，后来发现要上网站居然需要注册了……不过一样是能下到，好好把雅培的说明书研究研究，这个诊断项目的东西你就明白大半了，写的的确很好。看完这个再看国内的某些说明书你会有一种￥%#~7~8amp~J~5的感觉~如果涉及版权或者什么问题，就请版主处理吧，没关系。这次就不上资源了，大家自助吧~第一步，找对网站，诊断试剂的网站是这个，可千万别上成那个卖奶粉的啊~~有点慢，但是能上去。如果提示选地区的话就点中国那块，点美国那里上不去的。http://international.abbottdiagnostics.com/About_Us/contact.cfm第二步，注册，我用新浪免费邮箱可以注册。有的同学问怎么注册，在没注册的情况下点第四步里的内容就会提示要你注册啦~注册时需要提供一下你的机器的序列号，给大家一篇新闻吧，上面有很多序列号，请自选~http://www.scfda.gov.cn/CL0238/42558.html注意这里面的序列号是对应ARCHITECT系列的机器第三步，激活账号。会收到一封邮

Lateral Flow ImmunoassayBy Raphael Wong, Harley TsePublisher: Humana PressNumber Of Pages: 235Publication Date: 2008-12-09ISBN-10 / ASIN: 1588299082ISBN-13 / EAN: 9781588299086Binding: HardcoverList Price: $224.95Product Description:Due to the simplicity, relat ...

IL-17是Th17细胞最主要的效应因子，目前认为其家族成员包括IL-17A～F六种高度同源的细胞因子，其中Th17细胞分泌的IL-17主要是IL-17A和IL-17F，传统的观点认为IL-17A和IL-17F具有共同的受体，因此二者的生物效应相同，但是Immunity杂志在09年1月份刊登了一篇文章，作者通过观察IL-17A-/-、IL-17F-/-、IL-17A-/-IL-17F-/-的小鼠在黏膜感染以及过敏反映中的表现，指 ...

以下是2006年4月份无人应助贴，请大家积极应助，继续优先加分鼓励！:):):)求购信息【求助】急需知道哪里有卖乳化枪的作者：sarlett 回复数：0000【求购】紧急求购人PAHs-DNA加合物ELISA试剂盒作者：surgemail 回复数：0000【共享】转让四型胶原和层粘蛋白的放免试剂盒作者：mcj03545670206 回复数：0000【求购】ACE抗体试剂盒，对下肢肌肉标本进行免疫组化作者：zlzonglin【求购】SP1的多抗,最好是进口分装作者：wdpky 回复数：0000【求助】B细胞活化用何种F(ab')2作者：郭根凯 回复数：0000【求助】B细胞活化用何种F(ab')2作者：郭根凯 回复数：0000【求购】生物素葡聚糖胺和甲基氧化偶氮甲醇（MAM）以及荧光金试剂作者：hh749260 回复数：0000【求购】锌原朴啉作者：yaoji1113 回复数：0000【求购】兔子高敏C反应蛋白测定作者：hmnv2004 回复数：00002006年硕士研究生调剂名额作者：huasongz 回复数：0000【求购】求购anti-blca-4的ELIS

一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。　　目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。　　1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）　　试剂：多聚甲醛　　　　　　　　　　40g　　0.1mol/L磷酸缓冲液　　　　　　　　至1000ml　　配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。　　

1．固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡 ...