PCR技术

大家好,我都快急哭了,希望各位多多关照...我刚进实验室,老板就给我一课题,就是做病毒外壳蛋白基因的原核表达,我查了大量资料,一点头绪都没有.首先我要设计引物,这是我最大的难题.因为没有人带我,只有自己摸索,万般无奈下,我只好来到丁香家园向大家求救.下面是我课题一些情况:我要作的病毒CP基因序列:ORIGIN1 atgggcacca acaagccagc cactctagct gatttgcaga aggcaattaa tggcatctc ...

品牌不是唯一，高性价比的荧光定量PCR仪选购指南从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家 ...

1.重组PCR原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1263309_0.html2.是直接以初次PCR扩增产物作重叠延伸，还是电泳后切胶回收后再做http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5540543_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/4745715http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能形成二级结构，那就可以在这一区域设计引物。现在可以在这一保守区域里设计一对引物。一般引物长度为15~30碱基，扩增片段长度为100~600 ...

PCR定义PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。PCR技术的基本原理一.PCR反应成分：1.模板DNA； ...

RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b ...

如何做标准曲线求助：EB毒理学资料求助：酵母总RNA的提取请问这样的实验如何操作？看引物设计得行不行ABI与MJ荧光定量哪个好如何知道我的引物包含有内含子序列多重PCR过程中退火温度如何掌握pcr扩增后的DNA在跑agarose胶之前还需不需要处理一下看我设计的大鼠IL－6引物行不求助RNA提取问题请大家帮忙看看我的引物PCR-ARMS是怎么个做法克隆一种野生大米谷蛋白的编码序列并测序的疑问［求助］AP ...

RT-PCR引物序列 基因来源 引 物 序 列 产物大小（kb）β-actin 人 有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kbβ-actiundefined 大鼠 有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kbβ-actin 小鼠 有意义链GTCGT ACCAC AGGCA TTGTG ATGG反义链GCAAT GCCTG GGTAC ATGGT GG 0.49 kbGAPDH 人 有意义链 GGTGA AGGTC GGAGT CAACG ...

理论上应该扩增出超过2kb的片段，但每次得到的PCR产物都只有700多bp，跟这个基因的cDNA长度类似。换过好几个模板，得到的结果都相同。上游引物：CATGAGCTACATCAATCTGCCC下游引物：AGTCCAACCTGGGTAGGAGGenebank上查到的序列：小鼠胸苷激酶（tk）基因M684891 ccatggcaga tccggaggga tggtcgagct ccaggctttt cacgtagctg agaggt ...

近来做2个基因的半定量分析，对RT的中RNA的用量问题一直没搞得很懂，也没有权威的资料可供参考，在园子里Search 了很久也没有得到理想的东西，无意中在生物谷得到了下文，虽然没有权威的出处说明，但也颇受启发，遂转来供正在做RT-PCR并和我一样处于郁闷的同仁们分享：http://www.bioon.com/experiment/pcr/pcr5/Index.htmlRT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做 ...

问题1:不出现扩增条带引物：引物质量是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。对策为：①选定合适的引物合成单位；②引物的浓度不仅要看OD值，最好用引物原液做琼脂糖凝胶电泳，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应与引物合成单位协商解决，如一条引物亮度高，一条引物亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度；③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏而导致变质降解失效；④引物设计不合理，如引 ...

以前对real-time了解并不多，但是现在工作需要，必须熟悉AB的定量产品，因此对其网站深度挖掘了一番，收获颇丰，给大家贴出来一起进步。总的来说AB的各个地区网站中，个人感觉tw地区的最好，pp的台湾mm，让你的学习体验非常有感觉，请大家点击感兴趣的课程，简单注册后即可免费在线学习，蛮好的哦！Real-Time PCR 原理http://www.appliedbiosystems.com.tw/webinar/reg_rtpc ...

帮朋友发个帖子，他刚进实验室，PCR实践技术还在摸索中，找了以下这些文章来学习，不看不知道，一看吓一跳，这些用Real-PCR做出来的研究好些都发了不错的杂志，影响因子都比较高的，可惜我这边没有权限下载全文，哪位朋友帮帮忙，下载几篇全文吧，本人不胜感激！！！1. 标题: Quantitative analysis of cell-free Epstein-Barr virus DNA in plasma of patients with nasopharyngeal car ...

问题1： 第1条cDNA链产物产量低或没得到可能的原因：1 RNA被降解（建议：通过变性琼脂糖凝胶电泳检验RNA的完整性；2确保试剂、加样器尖头及反应管均无RNA酶。在有核酸酶抑制剂（如Promega公司的rRNasin® 核酸酶抑制剂）存在的情况下分离RNA。）2 AMV反转录酶被高温灭活（建议：如果在实验方案的开始加入了一个变性/退火步骤，则应确保在变性步骤及此后的48℃恒温之后再加入含有AMV反转录酶的酶混合物。）3 引物的特异性 ...

1.PCR引物序列来做原位杂交的探针序列http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=464691&sty=3&keywords=%D4%AD%CE%BB%D4%D3%BD%BB%B5%C4%CC%BD%D5%EB2.设计原则http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2339929_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...

增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互补, 否则容易造成DIMER f. 避免3'端 ...

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3226158&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3225948&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3223640&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/ ...

最近一直在做基因组步移，看了些资料，步骤很详细，感觉可能会大家有帮助，如果遇到细节问题还可以进一步交流，现总结如下：用于Genome Walking Kit的模板总DNA 一般要满足以下几点：1、DNA 的完整性，电泳为单一条带。2、避免杂质，OD260/280=1.8~2.0。3、模板DNA 不要被污染。4、准确定量，不要少于3μg原理基因组步行技术是一种新发展的利用已知序列(cDNA或基因组DNA)从基因组中获得基因的上游(如启动子)或下 ...

Labonchip的PCR个人体会PCR应该是分子生物学的基本，记得刚进实验室时，大家的口头禅就是：今天你P了吗?那怎样才能做好PCR，结合个人体会，我谈谈自己的看法。论坛里高人很多，说得不对的还请多多指教和包含。当然，若能给新人朋友们带去一些帮助，那我本贴的目的就算是达到了。PCR设计的一般套路1） 目的基因或目的基因片段对象是什么？对于原核生物来说，由于不存在外显子和内含子，因此还比较简单，直接从genebank ...

因为之前有个帖子，邮箱中的资源被不良的人删掉了，所以特发此贴。rayfile地址：http://www.rayfile.com/files/098fe2ee-891e-11dd-9cdc-0014221b798a/不会下的可以留下邮箱号我发给你。Publisher: Humana PressNumber Of Pages: 431Publication Date: 2007-08-02ISBN-10 / ASIN: 158829725XISBN-13 / EAN: 9781 ...