PCR技术

1.选择方法（同管或是不同管）http://www.dxy.cn/bbs/thread/80432892.循环次数选择http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1701400_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4882246_0.html3.内参比目的片断亮http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/po ...

因为是Qpcr引物，为了提高准确性，就缩短了产物长度，大概都在100-150bp左右。供高手讨论，共同提高。目的基因一（CDS区）：gacattgtctaaaagccaagatgacagactgagaggcctgagcccttgttctggcattctcccaggaagatgcagtaaaggggttgacccaatatactgcagagaatttcatccagttccctcctccatcctgatccca ...

谈谈PCR引物设计1．简介寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生，甚至在RNA-PCR中也能识别cDNA或基因组模板。引物设计也极大的影响扩增产量：若使用设计粗糙的引物，产物将很少甚至没有；而使用正确设计的引物得到的产物量可接近于反应指数期的产量理论值。当然 ...

标 题: PCR实用技巧从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是G ...

标准的PCR反应体系：　　　　　　 10×扩增缓冲液 　 10ul　　　　　　 4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　　　　 引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　　　　 模板DNA 　　　 　0.1～2ug　　 　　　　　Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　　　　 Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L　　　　　　 加双或三蒸水至 　100ul　　PCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+　　引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用 ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

请各位战友看下面这段注释，来自NCBI:{LOCUS AY602989 704 bp DNA linear PLN 19-DEC-2006DEFINITION Trichoderma sp. zd 56 endochitinase 42 (ech42) gene, partial cds.ACCESSION AY602989VERSION AY602989.1 GI:52630747KEYWORDS .SOURCE Trichoderma sp. zd 56ORGANISM Trichoderma sp. zd 56Euk ...

有空将DGGE的给总结了一下，好辛苦哦如下了其中以这个最为精彩：请教用FISH和DGGE做污泥细菌分布那一更好？ ：http://www.dxy.cn/bbs/thread/566504其中可以看到好多的大侠啊，嘿嘿求助PCR DGGE ：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=1157763&sty=3&keywords=dgge关于DGGE ：http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外，更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。在非变性条件下，DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基决定，其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用（主要为氢键）来维持。相同长度的DNA单链其 ...

对于作PCR的来说，最难的莫过于设计引物了，理论现在已经很多了，但是真正实践起来是要付出一定的心智的，记得曾经看到某一位主任说他设计了上千对引物，从没有失手的时候，真是让我佩服得五体投地。最近看了一下OLIGO6.0的使用说明，英文的，感觉有很多地方还是讲得不很明白，比如 Nested primers design 及 multiplex PCR Primer design.下面我先来讲讲普通的利用OLIGO 设计引物的方法吧：1 从文件菜单打开模 ...

Validation of a quantitative method for real time PCR kineticsAbstractReal time RT-PCR is the most sensitive method for quantitation of gene expression levels. The accuracy can be dependent on the mathematical model on which the quantitative methods are based. The generally accepted m ...

感觉很不错的网站，你可以找到你想要的实验方法，也是你解决实验中遇到问题的地方，protocol online试验方法在线http://www.protocol-online.org/http://www.bioprotocol.comhttp://www.protocol-online.netwiley公司的Current Protocol Online系列http://www.dxy.cn/bbs/post/view? ... p;keywords ...

PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524 文献标识码： 文章编 ...

Nat Med杂志于 2008.4.13在线发表了一篇文章，该文章报道了一种新的PCR技术 COLD-PCR 可补足常规PCR在检测DNA低水平突变中的不足，将革命性的转变常规PCR在遗传病检测，癌症，感染性疾病，产前诊断中的能力。Replacing PCR with COLD-PCR enriches variant DNA sequences and redefines the sensitivity of genetic testing.Li J, Wang L, Mamon H, Kulke MH, Be ...

看到论坛上有很多朋友询问RT-PCR的重复性问题，说明这里面还是有很多问题的，于是 想跟大家分享一下自己做PCR的经验：1. 总RNA的提取： 材料来源一般为细胞和组织，细胞相对比较单一，蛋白污染较小，TRIZOL法提取结果 A260/A280 结果一般都在1.8-2.1之间；组织的成分较复杂，污染多，提取较纯的RNA有一定难度, 我觉得以下地方需注意：1）最好新鲜取材，不能马上做的标本可以-70度保存，短时间内也不会有什么影响。2）研磨的手法 ...

免费引物设计软件Neoprimer引物设计之我心得最近听同学介绍了一款引物设计的软件——Neoprimer软件，融合引物设计的两个基本功能，即引物自动搜索和分析功能，并且使用方便，与Premier Primer相比有过之而无不及。现将我的心得讲述一下：打开序列后就能显示序列和限制性内切酶位点，然后在分析栏可以根据你的需要设计并搜索引物。如果没有特殊要求，建议使用默认设置。可以用于搜索PCR引物，测序引物或杂交探针（ ...

1，降落PCR中引物TM相差过大如何设定退火温度http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=1383577&sty=3&keywords=%BD%B5%C2%E4PCRhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3004779_0.html2，降落PCR的结果分析http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/602867 ...

1.SNP的定义http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1022204_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1094366_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1718873_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/6 ...

以下是所有的看家基因的列表，大家在设计引物时，可以直接采用这些基因的序列，本表来自于Trends in Gentics上一篇文献，内容全面，所有的看家基因均标注了基因银行号（Genbank），可以直接到pubmed中查询得出。引物设计可以推荐用primer 5，也可以直接与fbzhang@hotmail.com联系，请注明：引物设计服务， 同时提供您所需要的引物的基因银行编号或全部序列。List of housekeeping genes de ...

实验中的一些好习惯(转自零点花园）问问自己，有没有过发生这样的事：从冰箱中拿出一个EP管，发现上面只有一个数字，打破脑袋也想不起来这个数字的意义；一边讲话一边配PCR反应，加着加着不知道自己加到哪一管了；做完实验后发现有一种试剂有问题，可是同样的试剂有几瓶，再也记不得当时用的哪一瓶……凡此种种问题，归根到底都是因为实验习惯不好。今天看到的这篇文章无论是对实验室新人还是“老手”都很值得一看！( 由于是很多人的经验总结,所以 ...