感受态细胞的制备及其转化

详细描述了进行成年小鼠趾短屈肌和骨间肌纤维DNA转染时的体内电穿孔术。要想有较高的转染效率，必须严格按照要求的步骤进行。

电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备 【材料和试剂】 （1）恒温旋转式摇床 （2）三角烧瓶（容量为1或2L） （3）50ml灭菌离心管 （4）低温高速离心机 （5）SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl&n

瞬时转染分析研究的步骤 1．瞬时转染分析法 目前有很多功能性分析方法用于研究转录调控，最常用的方法是瞬时转染分析法。该方法是通过一定的转染程序将含目的调控区的质粒导人培养细胞。在典型情况下，调控区调控“报告基因”的转录。报告基因是在mRNA和蛋白质的水平上都易于被正确检测到的基因。产生的质粒在培养细胞中转录后，在特定时刻测定从报告基因上合成的mRNA或蛋白质，以评价调控区的活性。人们 ...

近日，Cell Research在线报道了生化与细胞所李劲松研究组建立的一种高效诱导体细胞重编程的研究系统。

・CaCl2感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml ...

1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜； 2．取 2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6（约2.5-3小时）；3．将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟； 5．4℃下3000g冷冻离心5分钟； 6．弃去 ...

Note: This protocol has been optimized for Cos-1 cells. Successful transfection of each cell type requires optimization of the basic protocol. Variables to consider for optimization include but are no ...

It is best to do a test ligation without insert if the background is low it would not be necessary to screen colonies for insert.1.colony PCR 1) Pick a colony from plate and suspend the colony in 10 µ ...

Kitto Lab The University of Texas at Austin http://research.cm.utexas.edu/bkitto/Kittolabpage/Protocols/Microbiology/electroporation.html This procedure prepares glycerol stock cultures of bacteria fo ...

德国明斯特的马普分子生物医学研究所汉斯·舒勒领导的一个研究小组成功地利用分子机理，使实验鼠细胞的“复位”过程变得更加有效，如果这项最新成果能应用于人类，对患者自身干细胞的修复将迈出重要的一步。这项研究成果刊登在最新一期的《细胞》杂志上。

报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。

下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒ＤＮＡ产生5x106-2x107个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆 的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重复性更好。该法制备的感受态细胞 可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。

在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。

国外的同学说一般他们克隆都是直接购买感受态细胞 转化，实验效率很高的。我总是以为如果是一般的克隆实验，自己做感受态好像够用了－－如果是建库，购买现成的感受态细胞 就是非常必要的首选，因为转化效率确实比实际手工制备的高2－3个数量级以上，特别是建库，能实实在在地提高实验的效率。实际上，除了建库以外，Stratagene为更好的表达蛋白、以及转化效率较低的巨无霸质粒，而特别优化了一些感受态细胞 ，做表达的人其实可以参考一下，有点用处的。在这里借用Merck公司提供的资料供大家参考。

细胞转染方法包括DEAE－葡聚糖法， 磷酸钙法，阳离子脂质体法，阳离子聚合物，病毒介导法，Biolistic 颗粒传递法 （基因枪粒子轰击法），显微注射法，电穿孔法等，对各种方法的原理，应用，特点，厂家产品等信息的比较结果如下表。

碧云天生产的超级感受态细菌制备试剂盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌感受态细菌的试剂盒。超级感受态细菌制备试剂盒是在传统超级感受态细菌制备方法的基础上进行适当改良而成，操作便捷，转化效率高。

本文介绍了几种不同感受态细胞的特征和用途。

本文介绍了感受态细胞的制备原理及方法

本文介绍了高效率感受态细胞的制备过程中的注意要点

本文介绍了大肠杆菌感受态细胞的制备和转化方法。