RNA实验技术

in vitro Transcription Reaction 1 µl 10X Transcription Buffer (Ambion) 1 µl 10X NTPs (4 mM ATP CTP 1 mM GTP UTP) 2 µl 10 mM GpppG cap (Pharmacia) 2 µl a-UTP (NEN) 800 Ci/mmo ...

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。 一、RNAi的分子机制 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation a ...

The siRNA user guide (revised May 6 2004) Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequence Using Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et al. 1999) we have systematically ...

1. Snap freeze ~107 cells or ~100 mg of tissue in liquid nitrogen or dry ice/ethanol. 2. Transfer the frozen sample to a mortar and pestle and grind to a fine powder. Or use a hand-held tissue grinder ...

将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞 中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞 膜并通过胞饮进入目的细胞 的细胞 质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关重要。在实验中使用的每种试剂都必须小心校准，保证质量，因为甚至偏离最优条件十分之 ...

1 前言 RNA 是生物体内最重要的物质基础之一，它与 DNA 和蛋白质一起构成生命的框架。但长久以来， RNA 分子一直被认为是小角色。它从 DNA 那儿获得自己的顺序，然后将遗传信息转化成蛋白质。然而，一系列发现表明――这些小分子 RNA 事实上操纵着许多细胞功能。它可通过互补序列的结合反作用于 DNA ，从而关闭或调节基因的表达。甚至某些小分子 RNA 可以通过指导基因的开关来调 ...

In the past poly(A)+ RNA has not been detected in prokaryotes. In the early 80s a new method of isolating RNA from bacteria was developed involving lysis by protease K in the presence of SDS and ...

Prepare in a sterile tube: template RNA: total RNA 0.1-5µg or poly(A)+ mRNA 10ng-0.5µg or specific RNA 0.01pg-0.5µg primer: oligo(dT)18 0.5µg or ...

The Easiest Route to Guaranteed Silencing Increasing numbers of researchers are using small interfering RNAs (siRNAs) to reduce the expression of specific mammalian genes. Applications of siRNA induce ...

1.相似性序列发生Cross－react引起脱靶效应。 2.监测手段：对脱靶效应的监测一般通过基因芯片来监测。Gene expression profiling对脱靶效应。 3.脱靶效应的特性： 转录物表达模式有序列特异性和靶特异性两种。 4.大部分脱靶效应具有siRNA序列特异性。 低浓度也可能产生脱靶效应，不仅仅是高浓度能产生脱靶效应的假象。 脱靶效应在蛋白和mRNA水平同时考虑进行分析，要缜 ...

Helvetica sans-serif" size="-1"Our current strategy with siRNA is to synthesis relatively small amounts enzymatically and use these to test for efficiency by western blotting. This allows us to test ...

Supplementary information to miRNAs cloned from mouse and human An online clearinghouse for miRNA gene name assignments (http://www.sanger.ac.uk/Software/Rfam/mirna/) is provided by the Rfam database ...

Secondary structure of prion mRNA Luck R; Steger G; Riesner D Institut fur Physikalische Biologie Heinrich-Heine-Universitat Dusseldorf FRG. J Mol Biol 258: 813-26 (1996) An algorithm for prediction ...

Here is our T7 siRNA protocol. The main idea is to design primers that begin with GG so that transcription by T7 polymerase is efficient. I) FIRST design oligos: Using sense coding sequence of any gen ...

CONCERT细胞质RNA 纯化试剂是一种新颖的单相酚溶液，是专门设计用来从新鲜或冷冻的培养的动物细胞 或组织中快速、简单地纯化高质量的细胞质RNA 。 应用 利用CONCERT™细胞 质RNA 试剂分离的总RNA 能够用于构建cDNA文库，RT－PCR，northern印迹分析，斑点印迹杂交，poly（A＋）筛选，体外翻译，RNA 酶保护，和分子克隆。 现在所有的商品化试剂不仅分离细 ...

Hot phenol may also be used to remove DNA. 1. Add equal volume of TE-saturated phenol to RNA solution. Mix. 2. Heat to 70 ℃ for 5 minutes. 3. Centrifuge at top speed for 10 minutes at room temperature ...

完整RNA 的提取和纯化，是进行RNA 方面的研究工作，如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地将ＲＮＡ从ＤＮＡ和蛋白混合物中分离；5），对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键 ...

Gene (Ref) Accession # Position from ATG ...

来自一家名为“ＡＬＮＹＬＡＭ”的生物技术公司的研究人员在11日出版的《自然》杂志上报告说，他们通过转基因技术 在ＲＮＡ（核糖核酸）干扰技术的研究上取得了突破，为治疗糖尿病 、癌症等疾病带来了希望。 ＲＮＡ干扰是一种由双链ＲＮＡ诱发的“基因沉默”。在此过程中，致病细胞中与双链ＲＮＡ有同源序列的信使ＲＮＡ被降解，从而抑制了致病基因的表达。ＲＮＡ干扰技术在 ...

本制品是一种快速方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取总RNA。样品在RNAiso Reagent中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（下层)，RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。 RNAiso Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，提取过程方便快速，整个操作在一 ...