RNA实验技术

从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。 从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这 ...

采用Promega公司的PolyATract® 26reg；mRNA Isolation System III。 使用该试剂盒，mRNA产量极低，因此下述方法是以Promega公司试剂盒操作手册为基础，并采用储昭晖硕士（作物遗传改良国家重点实验室植物分子生物学水稻分室）所建议的改进方法综合而成。 由使用者自备的材料 65℃水浴 无菌的、无RNase的1.5ml塑料离心管 无菌的、无RNa ...

实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA，可以为cDNA文库的构建做好准备。我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度，尤其是完整性、防止修饰和纯度。RNA是单链，2’OH是它的化学性质远比DNA活泼。所以，提取RNA颇为不易。加之RNA的不均一性，要将所有的RNA（rRNA、tRNA、mRNA）完全提出，更加有挑战性。而Rnase是无处不在的（这种酶遇高温后也不会丧失活性，复 ...

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的 RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最 ...

Ambion and Applied Biosystems have joined forces to provide a complete convenient solution for performing gene silencing experiments and validating the results by real-time RT-PCR. Ambion's Silenc ...

稀释计数法 滴度单位：TU/ml，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。”TU”为”transducing units”的缩写，中文为“转导单位”，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。 第一天 细胞准备 将生长状态良好的293T细胞消化计数后稀释至1×105/ml，加入96孔板，100?l/孔，为每个 ...

方法一 超速离心沉淀法 F取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。 F每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。 F取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ...

一、293T细胞的冻存1. 随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。2. 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。& ...

1、慢病毒载体概况 慢病毒是逆转录病毒科亚科之一，分为两类：灵长类和非灵长类慢病毒。灵长类慢病毒包括HIV-1、HIV-2、猴免疫缺陷病毒( SIV)，非灵长类慢病毒包括猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、马免疫缺陷病毒(EIAV)等。 多项研究表明慢病毒载体具有可感染非分裂期细胞、可长期表达、而且宿主细胞免疫反应小、细胞毒性小等优点。因其自身结构特点，可包装8～lOkb，适用于 ...

以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。 ...

慢病毒使用操作手册 1、慢病毒使用操作手册 1.1慢病毒的储存与稀释: 1.1.1病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度 B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低 ...

病毒核酸提取试剂盒提供一种快速方便的病毒RNA/DNA提取系统，无需酚仿抽提，可迅速从血清、血浆、尿液、脑脊液或其他无细胞体液、病毒培养上清液和鼻咽拭子等样本中进行病毒RNA/DNA纯化，纯化后的核酸可用于病毒基因分型研究、病毒流行病学研究和传染病研究等。 实验操作： 1、试剂耗材的准备： （1） 试剂：无水乙醇 （2） RNase 去除的耗材：用0.01% （v/v） DEPC 溶液完全浸泡过 ...

miRNA定量 进行一次逆转录即可实现所有目标miRNA的测定？没错，采用加尾法，一次逆转录就可以得到全部miRNA对应的cDNA。 我们知道，真核生物mRNA都是有poly-A尾巴的，这样Oligo-dT（逆转录引物）就很容易结合到mRNA上来合成cDNA了。 miRNA就缺了poly-A尾巴，怎么办呢？在逆转录试剂盒中加入poly-A聚合酶，先给它们加上一串poly-A尾巴，然后用带有一段通 ...

随着分子生物学研究的进展，越来越多的新技术被开发和应用到核酸检测领域。除PCR技术之外，TMA技术（Transcription mediated amplification）、NASBA技术（nucleic acid sequence-based amplification）、b-DNA技术、LCR技术（ligase chain reaction）以及SDA技术（strand disp ...

一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案 很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。 下面我们来分 ...

首先询问客户提取的大致种类，是动物组织细胞？植物？血液样品？真菌？细菌？病毒？酵母？不同的种类应该选择不同的产品。

最近碰到了好几个RNA提取的初学者来实验室学习如何提取RNA，对于如此简单的操作，却有如此多的人提取不出来，细问一下，原来他们的知识来源都是书本上或者网上的“RNA提取注意事项一类”的所谓经验，其实，他们提取不出来的真正原因，恰恰是他们严格遵守了所谓的经验，精力全放在不需要注意的地方，结果搞得自己很紧张， 真正需要注意的操作反而没有注意了。

在最新的《自然—方法学》（Nature Methods）杂志上，谢晓亮研究组再次发表文章，提出了利用其研究组自身研发的技术——受激拉曼散射（stimulated Raman scattering，SRS）显微技术进行RNA干扰实验的新方法。

在用血液标本进行基因表达研究时，需要及时把新鲜血液中有核细胞的RNA提取出来。全血还不能直接放到-80℃保存，即使在-80℃保存，全血中的RNA也容易发生降解。传统的提取新鲜全血RNA方法是把先把有核细胞从全血中分离出来，需要加白细胞分离液、离心等步骤，比较繁琐，在临床医院往往难以实施。

一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒经常失败原因和解决方案很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。下面我们来分析 ...