RNA实验技术

southern 我用一段序列来搜索可能作用的miRNA，结果中出现“ — strand”，这是不是指反义链转录的？那么它们是如何发挥作用的呢，会不会和+ strand 转录的发生互补而作用抵消了呢？295546 你是怎么搜索的？southern miRBase有一个by sequence框，将序列粘贴进去，其他参数都不动，只选择了homo sapiens本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师 ...

otherwise http://azaleasays.com/2009/09/06/brief-history-of-microrna-research/从无人问津到淘金热–微RNA研究简史Posted onSeptember 6, 2009 by azalea今天师兄Charles推荐了2008年Lasker Basic Medical Research Award得主之一VictorAmbros的一篇文章:Ambros,V. (2008). The evolut ...

fly6543210 各位大虾,向你们求救啦。心手上路，多多指点。我的实验室 一组对照组（不干预），一组实验组（干预），只养一种细胞。然后我要用miRNA 芯片检测。问题有如下：1. 每个芯片可以检测几个样本？ 实验组和对照组的样本检测是在同一张芯片上进行，还是分开在不同的芯片上进行？2. 实验组和对照组要最少重复做多少次芯片检测才能达到数据有统计分析意义？这样需要多少块芯片？3. 比如每块芯片可以测12个样本，那我的重复实验是不是可以在同一块芯 ...

liuchao8510 有没有人在细胞转染中应用加硫代硫酸修饰的胆固醇尾的miRNA inhibitor，加胆固醇文献中说是for delivery in vivo，硫代硫酸是为了stability，那在转染细胞的时候胆固醇会不会对转染效率造成影响，转染试剂用Lipofectamine RNAI MAX还是Lipofectamine 2000？有没有人比较过这种修饰的inhibitor与2-OMe修饰的inhibitor在细胞中对对应 ...

zhao5741321 谁能帮我解释一下 反义转录本是什么意思 ~谢谢小超123 可以百度搜一下！呵呵zhujoker 人的基因组的大量区域都被转录，其中绝大多数转录本涉及非编码RNA。有些基因组位点的正反两链都转录，形成顺式天然反义转录本对。也有两个转录本编码于基因组不同位点，但在序列上互补，形成反式天然反义转录本对。天然反义转录本对可以在转录、剪切、及翻译等多个层次起到调控作用。鼠标顺便提醒一下楼上的帅哥，都硕士博士了还什么 ...

zwmc 很多文章使用这种方法来表达miRNA, 而且我在论坛上看到很多坛友也比较推崇这个方法。但是我最近遇到了问题：我想要克隆表达的miRNA具有5p和3p两种剪切形式，理论上我把包含该pri-miRNA的基因组片段到表达载体在细胞里表达之后，这种情况下我表达出来的miRNA是兼有5p 3p两种形式？或者是只有一种呢？很困惑，请大家不吝赐教！吴佰霖 1. 查文献，看这个miRNA的5p和3p是否都有表达，还是以其中一个为主要产 ...

yingxiongjms 我是trizol法提的大鼠胚胎组织的总rna，用普通1%琼脂糖凝胶110v电泳30min（听我们实验室的老师说不一定非用变性凝胶），请教每个泳道最前面模糊一片的是什么呢？后面三个亮点应该是rna吧？是不是降解的比较严重？yingxiongjms 图片在这里。ningmeng1119 有RNA的降解，还有你的核酸染料有没有问题，胶本身制作的有没有问题，都有待解决，建议你跑个Marker看一下本文由 ...

赵东生 各位老师师兄、师姐们！我用的是mirVana? PARIS? Kit 提取血清MicroRNA，提了半个月，OD值总在1.3左右。我是严格按照说明书来的，而且酚氯仿抽提那步，我也很小心确保不会吸到蛋白质。大家帮我分析一下，问题会出在哪里啊？zhujoker 使用是mirVana? PARIS? Kit 提取血清MicroRNA的260/280就是在1.3到1.4左右，这个不奇怪！赵东生 谢谢斑竹！它protocol上说纯化的RNA，OD在1.8-2 ...

flower1946 菜鸟求助各位大虾，要做miRNA的实验，现已知可以查某个特定miRNA的有哪几个调节靶点，那反过来，如果要查调节某个特定蛋白（如MMP-7）的miRNA，该如何查呢？谢谢！zhujoker 可以使用targscan等软件啊，其实现在很多网站都有了，包括sigma也有一些预测flower1946 感谢楼上295546 TargetscanmiRdb本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

sahalafeisha 我们之前在动物模型中检测microRNA方法用SYBR方法，没有用Taqman方法，内参用得是5s，现在想在细胞上作实验，仍然是先提取microRNA，再加尾POLYA，再反转录，然后SYBR方法PCR，是不是还可以继续用5s作内参，还是必须得换成U6，如果要换的话，求U6引物序列及方法，多谢各位高手～willion1985 还可以继续用5s作内参驼走西域 求5s 逆转录和RT-PCR上下游引物本文由 ...

shewotwzqishui 大家好！请教一个问题：本人已经稳压了一个过表达的突变型细胞系，现在想在此基础上设计一段siRNA或shRNA，瞬时干扰或稳定沉默掉内源的，不知是否可行，设计这段序列、稳压的过程中需要注意哪些问题？谢谢。lixiaoling633 设计mRNA CDS前的区段吧bigbang_0_0 可以设计在CDS区，也可以设计在UTR区，前提是特异性良好，可使用相关的在线软件设计，前提是这个基因对于细胞的正常生 ...

陈蛋蛋1号 本人想从石蜡切片中提取RNA，希望有经验的高手指点下迷津呀！lmnsmu 石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。陈蛋蛋1号 lmnsmu wrote:石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。好的！谢谢~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、 ...

晓晓317481504 请问问siRNA能否在大鼠体内转染并且起干扰作用? 文献有报道就是说体内的RNAi也能够正常的起作用。请问有没有老师做过这种实验？谢谢slytjiaofei siRNA肯定在大鼠体内发挥干扰作用，有很多相关文献，如下两篇楼主可以参考！http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21571310http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8113414晓晓31 ...

nvonne 我在做靶基因预测时，有一个靶基因是NCR3（ ENST00000376069），但是我在NCBI中查找时，NCR3的几个mRNA形式都和这个号不同，怎么回事呢？请高手帮忙！非常感谢！forest22939 Do u use the microchip to predict the target gene? If in this case, ask the tech support , suppose it is an error.mrliuw ENST00000376069，这个ENST应该是ENSE ...

xan36 本人刚用了提poly(A)尾RNA的盒子提了mRNA，扩了内参（b-actin），有条带，但不知道怎么样才能证明就是mRNA，求高手指点wlh0369 能不能跑一下PAGE胶，看看条带位置啊？xan36 谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳，但出来了三条带，跟totalRNA 的位置相似xan36 wlh0369 wrote:能不能跑一下PAGE胶，看看条带位置啊？谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶 ...

曹会 我看文献中有利用anti-miR miRNA inhibitor也有 mi-RNA inhibitor 哪位帮忙解释一下两者有何区别区别baby_susan Anti-miR? miRNA InhibitorsAmbion? Anti-miR? miRNA Inhibitors are chemically modified, single stranded nucleic acids designed to specifically bind to and inhibit endogenous microR ...

曹会 各位大侠帮忙指点一下，我打算做miRNA的实验，试剂商有 miRNA mimic 和Pre-miR? miRNA ,不知道两者有什么区别，如果订购试剂的话 哪家的性价比较高，转染试剂用的是什么啊 ，希望有关miRNA给点建议，谢谢！！！！！！！！！！奇志 加我qq1787361906baby_susan miRNA mimic 模拟生物体内源的miRNAs，运用化学合成的方法合成，能增强内源性miRNA的功能。Pre-miRNA是对应miRNA的前体曹会 baby ...

docado 我要做乳腺癌细胞siRNA瞬时转染，不知道哪里的转染试剂比较好用、可靠。Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM-2000 德国QIAGEN公司Attractene Transfection Reagent北京英恩格公司的EntransterTM -R这些是否有人用过，转染效果怎样？非常感谢！！！baby_susan 我们用的最多的是 Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM- ...

jiaojiaoliu922 前些日子根据miRNA芯片结果，挑选了几个miRNA做验证。订了ABI的taqman探针，到货后做预实验，出现问题：realtime PCR的结果：内参RNU48的cycle数在22左右；有一个miRNA的cycle数在20左右；其他几个miRNA的cycle数都在35。预实验做了两遍，都是这种情况。请大家帮忙分析一下情况。指点一下后面该怎么做。谢谢！吴佰霖 内参RNU48的cycle数在22 ...

valerie2011 各位园友大家好我在一个靶基因库中查到miRNA-28-5p的靶基因有IKBKB，在pubmed中查到IKBKB also known as IKK2,IKKB,NFKBLKB,FLJ33771,FLJ36218,MGC131801等。但我在有的靶基因库中查到的靶基因是FLJ38028,或是FLJ36031，MGC35097，想请教一下，FLJ后面的数字代表什么啊？ 是表示基因序列长度吗？在pubmed上面查FL ...