RNA实验技术

Mammalian RNA InterferenceThomas TuschlLaboratory for RNA Molecular BiologyThe Rockefeller University New YorkExcerpted from RNAi: A Guide To Gene SilencingEdited by Gregory J. Hannon ABSTRACTA ser ...

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and ...

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and ...

RNAi target selection rules:Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG). Search for sequence motif AA(N19)TT or NA(N21) or ...

RNAi target selection rules:Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG). Search for sequence motif AA(N19)TT or NA(N21) or ...

Argonaute - A family of proteins containing multiple domains and involved in RNA interference (RNAi). Argonatue is the main component of RNAi effector complex the so called siRNA induced silencing com ...

提取RNA器械：离心管2支，吸管4个，酒精灯，打火机，记号笔，200ul1000UL枪，DEPC泡过的枪头EP管，紫外照过的手套。滤纸，DEPC纯水（750ml无水乙醇＋150mlDEPC水剧烈振荡，使劲的摇晃，直至混匀），氯仿，75％酒精，异丙醇，Trizol，预冷的离心机（两种），EP管架（洗液擦洗）过程：1. 取细胞悬液，室温下离心，1000rmp/min6min弃上清（此时可预冷另一个离心 ...

提取RNA器械：离心管2支，吸管4个，酒精灯，打火机，记号笔，200ul1000UL枪，DEPC泡过的枪头EP管，紫外照过的手套。滤纸，DEPC纯水（750ml无水乙醇＋150mlDEPC水剧烈振荡，使劲的摇晃，直至混匀），氯仿，75％酒精，异丙醇，Trizol，预冷的离心机（两种），EP管架（洗液擦洗）过程：1. 取细胞悬液，室温下离心，1000rmp/min6min弃上清（此时可预冷另一个离心 ...

RNA抽提指南(TRIZOL法)注意事项：_全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。_使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探针的实验室可能用RNA酶A 或T1来降低滤纸上的背景，因而某些非一次性的物品（如自动吸管）可能富含RNA酶。_...

一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）：1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇5.取第3步离心的上清（一定不要 ...

1.TotalRNAisolation： 测定OD260，OD280及两者比值，换算出RNA的浓度。并电泳鉴定。 2.Gel： 以80ml的1.5％甲醛琼脂糖凝胶为例： agrose：1.2g ddH2O：57.6ml 10×RNundefined(RNAbuffer)：8ml（RNB具体配方见后，用表示，下同） 甲醛溶液：14.4ml 3.Electrophoresis： （1）加样：（以取20μ ...

一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）：1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇5.取第3步离心的上清（一定不要 ...

RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。1。原理：双链RNA（杂交的）能够抵抗RNA酶的降解。2。应用：检测RNA表达3。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点：1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使 ...

RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。1。原理：双链RNA（杂交的）能够抵抗RNA酶的降解。2。应用：检测RNA表达3。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点：1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使 ...

一、试剂准备1． GACU POOL：取100mM ATP、CTP、GTP各2.78μl、100mM UTP 0.06μl，加DEPC H2O至100μl。2. 杂交缓冲液IPES 0.134g、0.5M EDTA（pH8.0）20μl、5M NaCl 0.8ml、甲酰胺8ml，加DEPC H2O至10ml。3. RNase消化液：5M NaCl 120μl、1M Tris-HCl(pH7.4) ...

一、试剂准备1． GACU POOL：取100mM ATP、CTP、GTP各2.78μl、100mM UTP 0.06μl，加DEPC H2O至100μl。2. 杂交缓冲液IPES 0.134g、0.5M EDTA（pH8.0）20μl、5M NaCl 0.8ml、甲酰胺8ml，加DEPC H2O至10ml。3. RNase消化液：5M NaCl 120μl、1M Tris-HCl(pH7.4) ...

看了离心机的配平讨论帖，才决定发起该帖的。该帖的问题也比较简单，但人人都会遇到，所以帖之。实验者，5 成用心，3+ 成用脑，2- 成用手是也。假定你抽提 RNA 时使用到的有机试剂 - 氯仿、异丙醇、无水乙醇 - 都是国产的 (这是完全可以使用的)。我的问题是：你采取了什么措施来降低或者杜绝 RNase 的污染？具体地：你是如何选择、预处理、使用和保存氯仿和异丙醇？你是如何配制和保存 75% 乙醇 ...

看了离心机的配平讨论帖，才决定发起该帖的。该帖的问题也比较简单，但人人都会遇到，所以帖之。实验者，5 成用心，3+ 成用脑，2- 成用手是也。假定你抽提 RNA 时使用到的有机试剂 - 氯仿、异丙醇、无水乙醇 - 都是国产的 (这是完全可以使用的)。我的问题是：你采取了什么措施来降低或者杜绝 RNase 的污染？具体地：你是如何选择、预处理、使用和保存氯仿和异丙醇？你是如何配制和保存 75% 乙醇 ...

转录后基因沉默（PTGS， post- transcriptional gene silencing）-最初被认为仅限于矮牵牛花和其它一些植物中的奇异现象，是目前分子生物学研究中一个最热门的话题。过去几年中，科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植物中，在机体防御病毒入侵和转座子沉默效应中起着重要作用。但是最激动人心的是转录后基因沉默现象的技术应用，即在多种有机体中应用核糖核酸干扰（RN ...

前言Lipofectamine™ 2000试剂是一项专利配方，用于高效转染Stealth™ RNA或者短的干扰RNA（siRNA）到哺乳动物细胞，以进行RNAi分析（1，2）。该说明书提供了一般的指导以及使用Lipofectamine™ 2000转染Stealth™ RNA或者siRNAj进入哺乳动物细胞的步骤。提供推荐的起始使用试剂剂量。为了获得最佳的RNAi实验结果，需要针对哺乳动物细胞系和目 ...