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培养细胞RNA提取--RNA Isolation Protocol-Cultured Cell Samples

Required Reagents:ChloroformIsopropanol75% Ethanol (cold)Monophasic Isolation ReagentRNA Precipitation Solution1.2M NaCl0.8M Disodium CitrateDNase (RNase-free)Ultra-pure waterLiquid NitrogenSolutions250ml RNA Precipitation Solution17.53 ...

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转录分析的几种方法

信号通路,只有一个目的:将细胞的外部信号转换成细胞的内部变化。不管是胰岛素,还是异亮氨酸,抗原还是肾上腺素,它们的终极目的总是如出一则:对转录活性的改变。 这些对于转录活性的影响来自于转录因子与基因的调控区域:如启动子、增强子、沉默子等结合达到的。经典的凝胶迁移滞后试验(the electrophoretic mobility shift assay)已经成为证明某种蛋白能与特定的短基因序列结合的有力方法手段。但是凝胶迁移滞后试验 ...

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冷泉港实验室:RNAi基因沉默方法

冷泉港实验室:RNAi基因沉默方法 大约在十年前,2006年诺贝尔生理/医学奖得主CraigMello和AndrewFire发现,他们能够将短RNA分子插入到线虫中并沉默特定基因的表达。今天,研究人员也常常使用这种强大的RNA干扰方法来研究哺乳动物系统中的特定基因功能。  为了进行这种基因沉默实验,研究人员通常需要依赖化学合成的RNA分子,而这个合成过程是相当昂贵的。本月《冷泉港实验手册》(ColdSpringHarb ...

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RNAi精华资料(dxy)

RNAi精华资料(dxy)关于RNAi整理贴(基因沉默撰写贴)1.RNAi对照解析贴http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=7151795&sty=3http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=7461187&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#7461187http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=96447 ...

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利用Trizol法提取植物乳杆菌总RNA

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血清中 miRNA 抽提和实验设计经验谈

人体内的血液循环系统犹如印度的圣河 – 恒河,河水中携带的养分滋养着古老的大地;洗涤带走地上的ㄧ切污秽,人们的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象,河水中充斥着各种物质,有废物有养分,只要你想都可以从河水中捞取。同样的我们的循环系统如同恒河;流动的血液如同恒河水,身体所需的ㄧ切由血液运送,身体产生的废物也由血液清运,同样可以想象血中的成份也是包罗万象。如果我们想知道大地有多纯净 ...

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lncRNA研究策略与技术

研究背景: 长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子,长度在200bp以上,起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物,不具有生物学功能;近期的研究表明lncRNA具有保守的二级结构,可以与蛋白、DNA和RNA相互作用,参与多种生物学过程的调控,尤其在肿瘤当中发挥了重要的调控角色,如染色质修饰、转录激活和抑制、转录后调解以及作为miRNA的 ...

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获得高质量土壤RNA的10个建议

提取土壤RNA是环境分子生物学研究最难的研究方法之一。RNA提取本身就是件艰巨的任务,提取土壤的RNA挑战更大。最大的困难之一是土壤RNA得率。从土壤中获得RNA远比DNA少,前者仅有后者的10-20%,所以需要比提DNA更多的加样量。因此需要用更大的研磨管(15 ml)和更大的离心机。 另一个大问题是腐植酸等抑制因子的污染。RNA实验对纯度要求很高。当逆转录寻找低拷贝数基因时,你 ...

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动物总RNA的提取

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动物总RNA的提取与电泳

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转录因子研究——为论文加“分”

什么是转录因子? 0 0); font-family: arial; font-size: 13px; line-height: 18px;"● 转录因子(Transcription factor,TF)是一类能与特异性DNA序列结合并调节基因转录的调控蛋白。 0 0); font-family: arial; font-size: 13px; line-heig ...

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miRNA Northern Blot实验技术应用

MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为20-25 nt(核苷酸)的非编码单链RNA分子,在生物进化过程中高度保守,约占整个基因组基因总数2%。大量研究表明,miRNA在多种生物过程中起关键作用,包括细胞的发育、分化、增殖和凋亡等;并且功能研究已证实多种miRNA分子与肿瘤发生、发展过程相关,miRNA具有类似于致癌基因或抑癌基因的作用。 最早被发现的两个miRNAs ...

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转录因子,研究新时尚

● 转录因子与2012年诺贝尔奖 2012年的诺贝尔生理学或医学奖得主山中伸弥,在小鼠成纤维细胞中表达Oct3/4、Sox2、c-Myc以及Klf4四种转录因子,将成纤维细胞逆转形成多能干细胞(iPS),进一步揭示了转录因子在生物学研究中的重要研究价值。 每年的诺贝尔奖都会受到举世瞩目,而其获奖内容亦会引领新一轮新的研究热潮。 不想out的科学家们,你们还在等什么?! ● & ...

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miRNA研究,可以很简单

无论您的研究内容是遗传发育、干细胞、调控,还是疾病…… 无论您的研究物种是人、大鼠、小鼠,还是植物…… 无论您的样本类型是组织、细胞、血液,还是石蜡切片…… 您都可以很简单、很轻松地研究miRNA! l 什么是miRNA? MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度为22nt左右的非编码单链RNA分子,在 ...

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RNA Collection

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用RNAi研究基因组印迹现象的调控机制

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利用BLOCK-iTRNAi技术,进行简单、高效的RNAi分析!

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The Northern Blot Hybridization

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RNA抽提- 成功经验法则大公开

本期专文要来跟大家讨论的话题是核糖核酸(RNA)的萃取,看到这里各位心中可能已经起了疑问: RNA 萃取不是很简单吗?只要照着标准步骤操作,加一加试剂就完成了,有必要大费周章特地开篇幅来谈这件事吗?其实越简单的东西遇到困难时就越难解,各位看倌就请耐着性子,听我们娓娓道来。 Lab 的经验和客户的难题 以华联基因体实验室的长期以来承接客户RNA检体的经验来说,我们经常遇到的问题是(1)R ...

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原位杂交组织化学常用试剂及处理

一、杂交前准备   (一)DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。  DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中,所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是:取市售DEPc 1ml,加入1L待处理水(蒸馏水等)中,经猛烈振摇后,于室温静止数小时,然后高压灭菌,以除去降解DEPC(DEPC分解为CO2和 ...

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