RNA实验技术

短发夹RNA (small hairpin RNA，shRNA)可在细胞中被加工成siRNA。设计shRNA时，shRNA中两个反向重复序列的设计原则与siRNA序列的设计相同（可参考Transheep SiRNA序列的设计方法），需要重点考虑的是shRNA 环序列的长度及组成，而且环序列不能与靶基因内的其它序列具有同源性。1 .shRNA环序列的长度一般来讲，设计shRNA时选择3～10 nt长度的发夹环均可。Brummelkamp等& ...

本人的想法：拿出自己研究过的文献（外文），供大家提出问题，讨论、翻译。相信大家的讨论一定会碰撞出新的ideas来。（已经搜索了相关内容，应该不是重复法帖，请班主支持！）相互交流、享受提高！！！Small Interfering RNA-Mediated Gene Silencing in TLymphocytes1Michael T. McManus, Brian B. Haines, Christopher P. Dillon, Charles E. Whitehurst,Luk van Par ...

The Scientist-September 23,2003-Fingering single genes-Cathy HoldingThe ability to control in vivo gene expression may be a powerful tool in cancer therapy, gene therapy of inherited genetic diseases, and for the study of gene function. Small interfering RNAs are increasingly used in ...

本内容需要回复后才能下载！ 本书版权归作者所有，请于下载后24小时内删除MicroRNA-从基础科学到疾病生物学（高清中英文版）0作　　者/Author:Krishnarao Appasani 著 Not Specified 编出 版 社/Publisher:Cambridge University PressＩＳＢＮ:9780521118552出版时间/Publication Date:2009-08-20版　　次/Edition:1页　　数/Pages:580MicroR ...

siRNA DatabaseSearchable database of Silencer™ Validated and Pre-designed siRNAs to 34,000 human, mouse, and rat targets. All siRNAs in the database have been designed for maximum potency and specificity using a well-tested, proprietary algorithm. And silencing results are guaran ...

导读：来自中山大学、中国科学技术大学和哈佛医学院的研究人员在新研究中开发出了一种新型的分子传递平台，利用该平台可克服当前将基于RNA的基因沉默技术用于癌症治疗的一个重要障碍：确保治疗能到达正确的位点并在该处停留。RNA诱导的沉默复合物来自中山大学、中国科学技术大学和哈佛医学院的研究人员在新研究中开发出了一种新型的分子传递平台，利用该平台可克服当前将基于RNA的基因沉默技术用于癌症治疗的一个重要障碍：确保治 ...

近几年来，RNAi技术已经成为分子生物学研究领域的一把利剑。最近，一项新的研究表明用RNA干扰技术靶向单个基因的RNA能够成功地降低小鼠的胆固醇水平。这些结果公布在2004年11月11日的Nature上。仅仅在数年前，研究人员发现除了细菌以外的所有生物体控制基因表达，部分依赖于一种叫做RNA干扰的机制。研究人员一直试图将这个机制用于人类疾病的治疗。这种方法的原理很简单，即创造出一个所谓的短干扰RNA（siR ...

RNA干扰RNA干扰（RNA interference，缩写为RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性，所以是基因功能研究的重要工具。siRNA是一类长约21～25 个核苷酸的双链小RNA分子 ...

摘要：对于富含miRNA的样品，如大部分组织样品，TaqMan和miRCURY平台都很有可能产生好的结果。然而，在对低丰度miRNA样品（如血浆样品）进行图谱分析时，miRCURY平台的高灵敏度和线性似乎更胜一筹。首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心的研究人员于7月12日在国际心血管领域顶级杂志《循环》（Circulation）发表研究论文，文中首次利用芯片（Exiqon miRCURY LNA芯片）对高血压患者和健康人 ...

miRNA已被证实与多种癌症的发生发展有关。某些特殊miRNA缺陷会导致其靶mRNA失去控制。目前，寻找miRNA靶点主要通过软件预测，但目前流行的预测算法所得到的结果中存在大量假阳性，或者无法获得有用的靶mRNA，这些结果会给后续验证实验造成很多麻烦。6月10日发布的Cancer Research，报道了第二军医大学、浙江大学医学院及中国医学科学院研究人员共同研发的一种名为miRIP（miRNA in vivo prec ...

RNAi（RNA interference）技术自诞生之日，就表现出巨大的疾病治疗应用潜力，每年全球多家巨型药企都会投入巨额资金进行RNAi治疗药物研发，Alnylam就是其中之一。最新一期Nature Medicine中报道了该公司与费城儿童医院关于血友病的RNAi疗法最新研究进展。在血液中，抗凝血因子和促凝血因子会组成一个凝血系统，通过控制血浆中凝血酶的水平，平衡失血控制与血栓形成之间的关系。凝血酶是凝血级联反 ...

慢病毒包装简要程序：以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293FT细胞。1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5min。2、取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min4、用胰酶消化并记数2 ...

快速的操作，低温环境，少量取上清。主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次，100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc。我们实验室一直是用170度考4小时，且不准离人，不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温, ...

快速的操作，低温环境，少量取上清主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有 RNase 污染。分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用170度考4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温,线路 ...

1.在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选： http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html http://katahdin.cshl.org:9331/RNAi/ http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html2.RNAi目标序列的选取原则： （1）siRNAs with lower G/C content (35-55%) are more active than t ...

RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相近但并不完全相同，这里列举了几个常见的RNA干扰相关的名词及其简单的解释：1、 miRNA：在 ...

一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。目前，以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛，该 ...

1.区分生物学重复与技术重复生物学重复：指样本重复，比如3只小鼠，同时做一种处理，就是三个生物学重复。技术重复：一般是三次实验，比如对一块组织，提了三次RNA，做三次realtime。2.设置生物学重复的意义由于新一代测序技术的优越性以及高成本，曾一度忽略了“生物学重复”的重要性。但生物学重复对于测序实验的设计以及实验数据的解读和分析都非常重要。设置生物学重复：能够消除组内误差：生物学重复可以测量变异程度增强结果的 ...

怎么从组织中提取RNA1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。 注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取 ...

miRNA 是一类22 碱基左右的非编码RNA，能够被整合到沉默复合体（RISC）中，使碱基互补的目标mRNA 沉默或降解，以实现其调控作用，与生物正常的生长发育以及各种疾病如癌症和心血管疾病等的发生都有着密切的关系。单细胞miRNA表达解决方案 启因生物独家引进美国NanoString公司的多基因表达 计数系统nCounter assay system，它仅需100 ng的RNA即可对逾八百个特异的mRNA转录子进行准确的定量；它无 需酶 ...