RNA实验技术

Optimizing RNA interference for application in mammalian cells来源：http://www.biochemj.org/bj/imps_x/pdf/BJ20040260.pdf是一篇34页的综述，自己感觉不错就推荐给大家上传不了，自己下吧AbstractOver the last two years the scientific community has rapidly embraced novel technologies th ...

最近开始自己包装慢病毒shRNA，用的是之前组里师姐的protocol，基本上是基于TRONOLAB的protocol。之前师姐包装的病毒，效率很高，基本上能KD八成到九成。最近我自己包装了两次，浓缩后根据之前师姐包装的病毒用量感染肝癌细胞，细胞生长速度明显延缓，形态改变也跟之前的相似。但是做western却只能看到很marginal的蛋白水平降低，在有的细胞株甚至完全看不到KD。我用GFP质粒转染HEK29 ...

做RNAi的战友可以先学习学习了。1、PTGS转录后基因沉默（post transcriptional gene silencing）一种首先在植物中确定，然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法，现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具――RNA干扰。2、协同抑制（Cosuppression）基因沉默的一种特殊情况，来源于转基因的RNA与同源内源基因同时被抑制。3、静息作用（ ...

RNAi实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effec ...

因农民的儿子在【旧帖整理】-RNA抽提（第一个积极响应）中整理很全面，本贴也鉴签其法1, Protocol for Northern blottingNorthern Blot完全步骤NORTHERN BLOT PROTOCOL 试剂盒步骤2, 关于Northern的一些问题关于Northern Blotting的几个问题1关于Northern Blotting的几个问题2反NORTHERN杂交的问题northern blotting染色问题North ...

尽管当前有多种方法可用于全面研究蛋白质编码基因的细胞内作用，然而用于系统研究与多种生物学信号通路有关的长链非编码RNAs (lncRNAs)的技术却十分有限。在这篇文章中，来自德国德累斯顿工业大学的研究人员开发了一种结合非编码RNAs敲除和定位分析的技术，称之为c-KLAN。利用这一技术对lncRNAs进行了功能鉴定和定位，并鉴别出了调控小鼠胚胎干细胞类型的转录物。在真核生物基因组中大量的蛋白质编码和非编码转 ...

RNA InterferenceALEX ECCLESTON AND ANGELA K EGGLESTONSenior EditorsThe most familiar role for RNA is as a relatively passive intermediary in the translation of information from genes into proteins. But other functions for this versatile molecule have been emerging. This Insight ex ...

Using siRNA for gene silencing is a rapidly evolving tool in molecular biology. There are several methods for preparing siRNA, such as chemical synthesis, in vitro transcription, siRNA expression vectors, and PCR expression cassettes. Irrespective of which method one uses, the first step ...

来源：生命科学研究快报http://www.bioexpress.ac.cn/nmore.asp?T=文献计量　　1 引言　　RNA普遍存在于动物、植物、微生物及某些病毒和噬菌体内，和蛋白质生物合成有密切的关系。RNA曾经一度被认为只是用于传递遗传物质，现代生物学研究表明，RNA分子具有多方面的功能。过去的几十年，20～30个核苷酸组成的RNA分子成为生命科学研究重点，这些分子对真核细胞基因组的重要调控作用备受瞩目。美国《科学》杂志分别 ...

A resource for large-scaleRNA-interference-based screens in mammalsPATRICK J. PADDISON1~undefined, JOSE M. SILVA1~undefined, DOUGLAS S. CONKLIN1~undefined,?, MIKE SCHLABACH2,?, MAMIE LI2, SHOLA ARULEBA1, VIVEKANAND BALIJA1, ANDY O'SHAUGHNESSY1, LIDIA GNOJ1, KIM SCOBIE1, KENNETH CHANG1, THOMAS WESTBROO ...

RNAi实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effec ...

几十年来生物学上最重要的进展，也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA 干涉（RNAi）是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象，是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。此后，科学家们明白，RNAi还有其他形式，它既是一种了解基因功能的强大工具，又是很多生物的基因组所采用的一种在演化上来讲很古老的防卫方法。RNAi肯定有很多新用途，RNAi还可能具有一些仍然有待去发现的天然功能。在本期 ...

mylab大师你好：小人有几个问题想求助，非常着急，希望你能出手。本人刚开始做southern和northern，出现了几个棘手的问题无法解决，希望你能帮助，感谢！第一张图是Northern杂交，最右边的是Marker（出现了一些非特异结合，很正常）剩下的都是总RNA的杂交条带，孔的浓度是一个梯度，大体都在10ug左右，不知为什么这么淡，是不是有RNA降解的可能？或者是我的杂交液中的探针浓度不够（我用的浓度一定比说 ...

诺贝尔奖得主最新发表新方法来自斯坦福大学医学院病理学和遗传学系，约翰霍普金斯医学院生物学系，以及华盛顿Carnegie学院（Carnegie Institution of Washington）等处的研究人员发展了一种能帮助观测体内细胞质中蛋白和蛋白相互作用的分析方法：differential cytolocalization assay（DCLA），这一方法已证实可以检测线虫RNA干扰和无意义介导衰变(nonsense-me ...

1、实验目的提取人体细胞的总RNA和mRNA。2、本实验所需试剂1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件，2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂，3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管,4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇，5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN。6）、新配的电泳缓冲液，专跑RNA的琼脂糖（Agarose）。3、实验流程3.1 细胞总RNA的提取1）、6孔板 ...

下载：http://www.rayfile.com/zh-cn/files/eb54752e-9d60-11e0-a49d-0015c55db73d/或：miRNA实验指南(中文版).part1.rar下载：http://ishare.iask.sina.com.cn/f/16562038.html?from=likemiRNA实验指南(中文版).part2.rar下载：http://ishare.iask.sina.com.cn/f/165 ...

Do Your Experiments Require Total RNA or mRNA?看看就会有收获Selecting a Purification Strategy . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . 198Do Your Experiments Require Total RNA or mRNA? . . . . . 198Is It Possible to Predict the Total RNA Yield froma Certain Mass of Tissue or Number of Cells? . . . . . . . . 201Is There Protein in Your RNA Preparation, andIf So, Shou ...

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。外源dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA（s ...

RNAi从发现到现在，短短几年时间，已经由一种生理现象发展为生物医学研究的重要手段和具有很大潜力的治疗手段。目前，哺乳动物细胞的RNAi主要依赖于长19～21bp，3‘端悬挂2nt的对称的RNA双链，即短干扰RNA（siRNA）。这里，作者报道了一种长15bp、3’和5‘端分别悬挂3nt的反义核苷酸的非对称的RNA双链，即非对称干扰RNA（aiRNA），可以有效诱导哺乳动物细胞RNAi的发生。研究表明aiRNA诱导的 ...

如果有人告诉你有一种不用去NCBI、UCSC、DBTSS等数据库，也不用众多的启动子分析软件去苦苦倒腾，就能准确、快速、高效、直接、简洁、明了的获取目的基因的启动子以及cDNA、shRNA、miRNA等重要信息，道友们一定不会相信，而在今天之前我也不相信，而事实是下面我要分享的这个东东介于牛A和牛C之间，很牛B啊！道友们不信？ 去这个网站吧http://www.genecopoeia.com/product/search/i ...