RNA实验技术

实验准备：1. 植物叶片 研钵 液氮2. 氯仿、异丙醇、RNase-Free ddH2O 、75%乙醇（使用RNase-Free ddH2O配制）3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml 离心管（RNase-free）4. 涡旋振荡器 台式低温离心机

以下操作按照天根产品 DP424 TRNzol Universal 总 RNA 提取试剂的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 植物叶片 研钵 液氮2. 氯仿、异丙醇、RNase-Free ddH2O 、75%乙醇（使用RNase-Free ddH2O配制）3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml 离心管（RNase-free）4. 涡旋振荡器 台式低温离心机 ...

实验准备：1. 植物叶片 研钵 液氮2. 氯仿、异丙醇、RNase-Free ddH2O 、75%乙醇（使用RNase-Free ddH2O配制）3. 移液器及配套无菌枪头（200 μl ，1ml）4. 涡旋振荡器5. 台式低温离心机

实验准备：1. 动物组织， 研磨器或液氮，研钵2. 氯仿、异丙醇、RNase-free ddH2O 、75%乙醇（用RNase-free ddH2O配制）。3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml 离心管（RNase-free）4. 涡旋振荡器 台式低温离心机

实验准备：1. 植物叶片 研钵 液氮2. 无水乙醇 氯仿3. 移液器及配套 RNase-free 无菌枪头（200 μl ，1ml），1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 涡旋振荡器，台式低温离心机实验准备-试剂盒准备：第一次使用前应在去蛋白液 RD、漂洗液 RW 中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后在瓶身做好标记。

实验准备：1. 动物组织 研磨器或液氮，研钵2. 无水乙醇 氯仿3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml）； 1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 涡旋振荡器，台式低温离心机实验准备-试剂盒准备：第一次使用前应在去蛋白液RD、漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后在瓶身做好标记。

引言古植物学研究中很关键的一环，便是通过对古植物样本，即植物分类学的研究及植物系统分类的建立。因为地质历史时期有不少已绝灭的类别，必须把它们与现存的植物统一考虑，才能建立科学的分类体系，反映各类植物间的系统关系。最早曾被分为菌藻植物、苔藓植物、蕨类植物、种子植物四个门，以后随着植物学、古植物学研究的深入，曾提出多种分类方案。目前，古植物学也是很对植物研究人员的关注和兴趣吸引的方向。几亿年的古植物标本样上亿年的古岩 ...

前言RNA 的提取是肿瘤研究的重要内容。在乳腺癌的研究中，乳腺癌样品通常含有较高含量的脂肪组织和结缔组织，而脂肪组织由于密度小，通常漂浮于液面，使样品难以被充分研磨。若研磨不充分，会导致样品离心后不能得到明确清晰的分层，多数老师都会选择牺牲提取量以保证提取效果。深圳大学医学院的老师们正是遇到了上述的难题。通过咨询了解，老师们选择了和上海净信合作，采用上海净信研磨仪对乳腺癌组织进行研磨探究。实验步骤步骤 1：研磨前，将乳 ...

miRNA 是一种既可爱又可恨的小东西，它们深居简出，它们飘忽不定，它们似乎总是在和我们捉迷藏，当我们费尽力气以为即将要将它们掌控的时候，它却又顽皮的从我们的指缝中溜走，而我们却又毫无办法。同学莫怕，TIANGEN 即将上市的最新产品 miRcute 增强型 miRNA cDNA 第一链合成试剂盒 (KR211) 与 miRcute 增强型 miRNA 荧光定量检测试剂盒 (SYBR Green)(FP411) 这对黄金搭档轻松解决所有问题，反转加 A 一步完成，高灵敏度检测试剂让 ...

环状 RNA（circular RNAs,circRNA）是一类具有闭合环状结构的 RNA 分子，早在 20 世纪八十年代即有研究报道，但由于其表达丰度低，文献报道较少，一直被认为是 RNA 转录剪切的罕见错误而被忽视。直到 2012 年开始有研究者开始大批量鉴定 circRNAs，从古生菌、线虫、小鼠和人类细胞鉴定出大量 circRNAs，揭示 circRNA 大量存在于真核转录组中，是细胞基因表达的一个普遍现象，并可能发挥重要的生物学作用。进一步研究表明 circR ...

随着表观遗传学研究的不断深入，组蛋白修饰（甲基化，乙酰化，磷酸化…）和 DNA 甲基化修饰相关的高水平研究成果如雨后春笋般涌现，遍布 Nature, Cell 和 Science 等期刊杂志。在分子生物学的中心法则中，遗传信息从 DNA、RNA 流向蛋白。基因组 DNA 和组蛋白上都存在可逆的表观遗传学修饰，这些修饰可调控基因的表达，并由此决定细胞的状态，影响细胞的分化和发育。不禁让人疑问，那么 RNA 上也存在类似的调控机制吗？近两年，科学家们首次发现了一种可逆性的 ...

1. RNAi 介绍RNA 干扰（RNAi:RNA interference）是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在线虫实验中发现的，2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导。这个方法与常规方法相比更加简便，现在已经成为一种常用的抑制基因功能的方法，也属于研究工具之一。RNAi 是 21~23bp 的短链双链 RNA（siRNA:small interfering RNA）或者是长链双链 RNA（dsRNA: ...

实验原理TP53 是重要的抑癌基因。在多种肿瘤中都能发现 TP53 基因突变及功能丧失。我们将针对 TP53 基因设计的靶点构建到 pCas9/gRNA1 载体，转染 293T 细胞，构建了 TP53 基因敲除 293T 细胞系。1、本实验基因敲除原理：pCas9/gRNA1 载体表达 gRNA 和 Cas9 蛋白。将靶点序列克隆到 pCas9/gRNA1 载体上，gRNA 将诱导 Cas9 蛋白对靶点 DNA 进行切割，造成 DNA 断裂。细胞通过邻端连接 ( nonhomologous end-joining) 修复重新连接 DNA， ...

案例：通过 RNA 测序分析帕金森病中白血球的长链非编码 RNA 及选择性剪接的调控背景：人类寿命的延长伴随着神经退行性疾病的发病几率的增加，因而价格不贵的血液诊断的发展迫在眉睫。通过 RNA-seq 分析血液细胞的转录本是发现新的生物标志物的非常高效的途径。目的：利用 Illumina 测序平台对帕金森病人白血球中 lncRNAs 进行分析，探讨其对 mRNA 选择性剪接的调控机制。结果：通过对帕金森病人的 RNA-seq 结果分析发现，在白血球中有 6000 个以上 ln ...

案例：应用全基因组测序和 RNA 测序来描绘常见的变异型免疫缺陷综合症（CVIDs）的基因图谱背景：常见的变异型免疫缺陷综合症（CVIDs）是机体免疫应答反应中不能产生抗体的最主要原因。CVIDs 变异度很高，大概 5% 的病人是由基因改变引起的。目的：利用 Illumina HiSeq2500 和 HTSeq 测序平台对 CVIDs 进行全基因组及转录水平的研究，揭示并绘制 CVIDs 的信号调控图谱。结果：通过对 CVIDs 基因组和转录组进行测序和综合分析发现， TNFR ...

案例：以结肠癌，卵巢癌，特发性肺纤维化及正常的人组织为例探讨 circular RNAs 的富集与增殖的相关性背景：最新研究表明，circular RNAs 大量存在，是构成生物体 RNA 网络的一部分，而且研究者们推测 circular RNAs 与 miRNAs 一样具有生物学功能。目的：利用 Illumina 测序平台对细胞增殖速度不同的样品（正常组织和细胞，不同肿瘤组织和细胞，非肿瘤疾病组织和细胞）的 circular RNAs 进行分析，探究 circular RNAs 的富集与 ...

通过深度测序分析乳腺癌中microRNA的序列和表达 背景： microRNAs 调控很多对肿瘤发生非常重要的基因。乳腺癌中很多 microRNAs 是下调的，但系统的乳腺癌中 microRNA 的表达分析还没有被报道。

长链非编码 RNA(long noncoding RNA，lncRNA)指的是转录本长度在 200-100000 nt 之间的 RNA 分子，它们不编码蛋白，位于细胞核或胞质内，具有保守的二级结构。研究显示，lncRNA 并非以前所认识的那样没有功能，它可与蛋白质、DNA 和 RNA 相互作用，通过多种机制（如基因印记、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA 降解和翻译调控等）在多种层面上（如表观遗传学、转录调控及转录后调控等）调控基因的表达水平。lncRNA 参与多 ...

Lab 的经验和客户的难题以华联基因体实验室的长期以来承接客户 RNA 检体的经验来说，我们经常遇到的问题是（1）RNA 的总量不够，（2）RNA 有严重的盐类污染，（3）RNA 有严重的有机溶剂污染，（4）DNA 污染及（5）样品 降解严重（图一图二）。前四项问题都还好解决，只 需要再次萃取或进行纯化即可解决，但是样品降 解就较为棘手，常常因重新准备检体一来一往， 耗掉不少心力和时间，最后也拿不到好的结果。客户经常会问为什么执行芯片实验会如此要求 RNA 质量呢? 而其他的 ...

血液中 miRNA 的组成血液中的 miRNA 到底是从何而来? 要往哪里 去? 这些 miRNA 的生理功能是什么? 以上这三个问题是很多研究人员关心的问题，事实上这些问 题目前并没有很明确的答案，我们知道 miRNA 是 内生性的短片段 RNA，长度约 17 到 23 核苷酸， miRNA 可以藉由和信息 RNA（mRNA）结合诱导 信息 RNA 的降解，进而调控信息 RNA 和相对蛋 白的表现。根据一些论文的揭示 1 和实验室实际的 操作经验显示，正常人的血液中 miRNA 的含量是 极微量的，但是在病人和检体制备不佳的血液样 本中却可抽取 ...