RNA实验技术

miRNA和siRNA的基本介绍及区别1998年，Andrew Fire和Craig Mello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，Amy Pasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RNAs(stRNAs，mall temporal RNAs)。RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断 ...

.miRNA实验技术答疑专场microRNA（miRNA）作为非编码RNA的代表，是目前表观遗传学研究的热门领域。miRNA在生物体内发挥着重大的调控作用。通过对靶蛋白转录或翻译过程的抑制，miRNA参与调节细胞增殖、分化、代谢等各个生理过程。此外，miRNA在疾病的调控中发挥重要作用，特别是其可以行使原癌基因或抑癌基因的功能，影响癌症的发生、发展和迁移。由于miRNA含有的核苷酸数量较少，在提取、逆转录和荧光定 ...

本人在做RNA抽提实验中总结了一些需要注意的事项，以及一些抽提各种RNA的常用方法及步骤。希望与大家共同分享：高质量的真核生物mＲＮＡ的提取， 必须使用ＲＮＡ酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活ＲＮＡ酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的ＲＮＡ酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量ＲＮＡ酶也很重要。下面列举避免ＲＮＡ酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项 ...

又淘到一本好书，不知道是否有人发过miRNA Protocols,清晰电子版，2006 humana press,分子生物学实验方法系列中的一本，顾名思义是专讲miRNA的，做miRNA的各位可以不用拿siRNA的方法去套了，两者毕竟还是有区别的。目录如下：1. The MicroRNA: Overview of the RNA Gene That ModulatesGene FunctionsShao-Yao Ying, Donald C. Chang, Joseph D. Miller, ...

各位战友：一下是小妹在Invitrogen公司的siRNA designer设计的shRNA序列，均为小鼠基因，也经过Blast验证，质粒选择的是pGPU6/GFP/neo，酶切位点分别是Bbs 1 和BamH 1，请给位专家给予指导！Rictor（190-208、845-863）：1.5-CACCGCTGGGCCATCTGAATAAC-TTCAAGAGA-GTTATTCAGATGGCCCAGC-TTTTTTG-3 3-CGACCCGGT ...

在设计siRNA时，人们总是关心如何地提高siRNA的效率，实际上我认为研究为什么siRNA没有效率也是一个很有意义的问题，它可以从反面给人们以启发。在思考这个问题的同时，我查到一篇文献，说是单链RNA也是可以激发RNAi途径的，这对我很新鲜，因为一直把dsRNA引发RNAi当作经典范式。文章认为，单链RNA和双链RNA都是只有一条链同RISC (rna induced silencing complex)相结合，所以其机理 ...

摘要：微小RNA基因和小的干涉RNA是小RNA的最主要组成部分，它们的相关性密切，既具有相似性，又具有差异性。它们功能的重要性提示我们基因组非蛋白编码区的序列蕴含着极为重要的信息。对小RNA的深入研究将使我们更深一步了解生命的奥秘。关键词：小RNA，siRNA，miRNA，非蛋白编码区引言长度大小为二十几个核苷酸的小片段RNA在近年得到了极大的关注，这些小RNA中有些可直接调控某些基因表达，进而调控细胞发育、决 ...

RNA的提取准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤:1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板 ...

【1】pSUPER vectorhttp://www.oligoengine.com/pSUPER_New/pSUPER_Main2.html【2】pSilencerhttp://www.ambion.com/catalog/ProdGrps.html?fkApp=25&fkSubApp=145【3】psiRNA VECTORhttp://www.invivogen.com/siRNA/psiRNA.htm【4】pGE-1http://www.s ...

如有遗漏之处，请跟进，谢谢！1　ProtocalRNA-isolation protocalhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=686034&sty=3&keywords=RNA%CC%E1%C8%A1抽提经验谈http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=596203&sty=3&keywords=%B3%E9%CC%E1%BA%CB%CB%E1RNA提取（网友总结 ...

microRNA（miRNA）是一种机体内源性表达的单链小分子RNA，位于基因组非编码区，本身不具有开放阅读框（open reading frame，ORF），具有高度保守性，时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中，不编码任何蛋白质，长度仅为20～24nt。成熟的miRNA 5′端有一个磷酸基团，3′端为羟基，由具有发夹状结构的约70～90nt的单链RNA前体经过Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA ...

在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计，实验和分析siRNA效应转录后基因沉默，也称为RNA干扰，是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。这种现象可能是作为一种抑制病毒感染和转座子跳跃的细胞防御机制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratcliff et. al., 1999)。在体内，双链RNA被内源的核糖核酸酶降解为21-23个碱基大小的小分子干扰RNA（small i ...

shRNA 资源库及其构建方法shRNA资源库：以下资源库的构建及其详细的protocol都可以在网站下载1.NCBI　shRNA资源库http://cgap.nci.nih.gov/RNAiAbout RNAi on CGAPThe NCI is part of the consortium supporting the preparation of human and mouse libraries containing RNAi constructs that target cancer-relev ...

RNA-isolation (TRIZOL method)Isolation of RNA from whole worms using TRIZOL reagent (Gibco-BRL).1) Wash worms from a 60 mm plate with 1 ml DEPC-treated water.2) Spin down worms at 4000xg in microfuge for 1 minute.3) Remove excess water and add 1 ml Trizol reagent. Vortex and invert tube. Let sit at room ter ...

Northern Blot继分析DNA的Southern杂交方法出现后，1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA或含poly A尾的RNA样品中特定mRNA分子大小和丰度的分子杂交技术，这就是与Southern相对应而定名的Northern杂交技术。这一技术自出现以来，已得到广泛应用，成为分析mRNA最为常用的经典方法。与Southern杂交相似，Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电 ...

我用附件传不上来，只能用这种笨法了，希望大家用的上　　近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。 　　一、RNAi的分子机制　　通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(initita ...

最近要写一篇关于RNAi的综述，昨天在nature上面找了一篇关于rnai全文的综述，觉得写的挺好，拿出来分享Nature(C) 2004 Nature Publishing Group----------------------------------------------Volume 431(7006) 16 September 2004 pp 338-342----------------------------------------------Revealing the world of RNA interferenceMello, Craig C.1 ...

The Knowledge Foundation: RNA in drug developmenthttp://www.knowledgefoundation.com/events/5071225_p.pdfA Link Between RNA Interference and Nonsense-Mediated Decay in C. eleganshttp://www-hhmi.genetics.utah.edu/bass/papers/science00.pdfRNAi in Cup ...

一．实验材料及其仪器1．实验仪器iQ5 Real Time PCR Detection System： Bio-Rad2．实验材料及试剂All-in-OneTM miRNA Q-PCR Detection Kit： GeneCopoeia (Cat. No. R0101S )验证模板：人源十个不同的组织所制备的cDNA测试引物：共5 对（具体引物序列等详细信息附在产品说明书处，此处略）Catalog# Primer ID Mature_Acc Mature_ID PCR SIZE1 miRQP0227 hsmq ...

总RNA提取具体步骤：（关键是防止RNA酶的污染）⑴1) 称取-85℃冰冻保存的标本50-100mg，于液氮中夹碎(用剪刀将组织块剪成若干碎块)(须避免RNA酶的污染)。2) 将组织碎块加入1ml TRI zol变性缓冲液中(所加组织块的体积不能超过TRIzol体积的10%)，在玻璃匀浆器中充分研磨至无明显大的组织块为止，研磨过程在0℃冰水中进行，以防止组织RNA被降解。⑵ RNA的分离3) 然后将组织匀浆液转移到1.5ml的Eppendorf管 ...